10组织培养第十章　常见植物脱毒与快繁

1、第十章 常见植物脱毒与快繁技术宜职院08.9,目的与要求 了解农作物、果树、花卉、药用植物的脱毒和快繁的生产意义与基本技术，根据地方特点和组培技术现状，例举部分植物进行讲授，并结合学生查阅资料共同探讨。 具有农作物、果树、花卉、药用植物快繁基本技术，具备马铃薯、草莓等植脱毒技术，进行微型薯生产基本知能，有利用图书及网络资源收集相关资料，了解相关行业信息的能力，并具备一定交流探讨能力。,第一节 农作物的脱毒与快繁 植物组织培养技术已广泛运用于农作物育种和良种繁育，尤其是许多无性繁殖类农作物脱毒及良种快繁，对提高农作物生产的产量和品质发挥了极其重要的作用。,一、马铃薯的脱毒和快繁（一）茎尖培养脱毒

2、1、取材 生产大田顶芽，或块茎，预培养抽生的枝条污染较少。供试材料存在病毒可结合热处理脱毒。2、消毒 自来水冲洗1h，70%酒精30s，10%漂白粉溶液510min，无菌水冲洗23次。 3、接种 解剖镜下，解剖刀切取0.10.3mm带有12个叶原基的茎尖，接种到培养基上。 4、培养条件 MS、Miller，252， 1000lx，4周后增至20003000 lx，光照16h。5、病毒鉴定 目测法和指示植物鉴定法。,（二）微型薯生产技术 由试管苗生产的重130g的微小马铃薯被称为微型薯。不带病毒，增产效果一般在40%以上。 1、试管生产 微型薯一般只有15g。用组织培养方法生产微型薯分以下两个步

3、骤：（1）单茎段扩大繁殖（2）微型薯的诱导。 2、温室多层架盘工厂化生产 3、低网畦生产,二、甘薯的脱毒与快繁,（一）茎尖培养 1、茎尖培养脱毒 取高产、优质母株枝条，切成带1芽小段。自来水流水冲洗， 70%酒精10s， 0.1%的升汞10min，无菌水45次，或2%次氯酸钠5min，无菌水34次。 2、茎尖剥离和培养 解剖镜下剥去芽上较大幼叶，切取0.30.5mm含12个叶原基的茎尖分生组织，迅速接种到制备好的培养基上。,3、病毒检测 目测法和指示植物鉴定法。 （二）脱毒苗扩繁和种薯的生产 通过病毒检测的脱毒苗先在试管内进行切段快繁。30d左右长成有68片展开叶的试管苗。待试管苗繁殖到一定数

4、量后，即可在防虫条件下于无菌基质中进行栽培繁殖。所结小薯即为原原种薯。以原原种（苗）为种植材料，在防虫条件下的无病毒土壤上培育出的薯块即为原种。以原种苗在大田条件下生产所结薯块即为生产用种薯（良种）。,红薯原原种炼苗,第二节 果树脱毒快繁,利用组织培养方法繁殖果树植株具有占地面积小，繁殖周期短，全年都能进行繁殖，繁殖系数高等特点。还可以消除果树的某些病毒病，适应果树向品种更新快、矮化密植以及无病毒栽培方向发展的需要。,一、草莓 （一）草莓离体快繁技术 1、外植体 67月份匍匐茎1520cm长时取材。 2、培养基 初代MS+6-BA0.5mg/L+GA30.1mg/L+IBA 0.2mg/L 增

5、殖MS+6-BA0.51.0mg/L。 3、生根和驯化 1/2MS+IBA0.21.0mg/L 根23cm时炼苗，一周后发新根，四周后可移栽。,（二）花药培养脱毒,1、花药培养脱毒技术 春季取单核期花蕾（直径约4mm），45低温处理24h。浸入70%酒精30s，漂白粉或0.1%氯化汞1015min。剥取花药放在培养基上。 诱导培养基为MS+6-BA1.0mg/L +NAA0.2 mg/L +IBA0.2 mg/L， 继代培养基为MS+6-BA1.0mg/L+ IBA0.05mg/L 2、脱毒苗的检测 指示植物小叶嫁接鉴定法和电子显微镜鉴定法。,草莓小叶嫁接法,二、柑橘,1、茎尖微芽嫁接 砧木种

6、子45温水浸泡5min5556热水处理50min取出吸干消毒剥去种皮种子接种于MS培养基271暗培养2周后萌发芽苗可作砧木。 接穗材料强健新梢 热空气处理45min (50)取lcm长芽条消毒处理切取0.140.18mm微茎尖。 砧木苗切去长根和子叶，上胚轴留11.5cm切除顶部，垂直于茎，切开一个倒T字形切口，将微茎尖放置于砧木切口内，茎尖底部和砧木切口形成层紧密贴合。,嫁接苗转植于新鲜培养基上， 271、16h光照，24周后抽生新芽，成活率可达20%50%。58周可移植。,柑橘花药培养示意图,2、无病毒苗的繁殖 经无病毒苗鉴定后选出无病毒良种苗木，可建立原种母本园。在隔离区，按无病苗的栽培

7、要求建成无病良种母本园，供繁殖无病苗木采穗用。,三、香蕉 （一）花序轴切片培养 1、花序轴切片 香蕉果穗已完全抽出时采上部末结实花序，无菌下剥取苞片除去子房。取顶端1015cm长的花序轴段，灭菌后横切成23cm厚的薄片，再纵切成数片。 2、培养过程 常用MS培养基，也可用SM或改良MS，继代也可用Knudson培养基。,香蕉雄花序外植体诱幼苗过程,（二）影响试管育苗的关键技术 芽的反复增殖是香蕉试管育苗的技术关键。芽的增殖效果如何，较重要的衡量指标是增殖率和代期（次继代培养的时间），均与生长调节剂关系最为密切。细胞分裂素以6-BA 34mgL为宜，增殖率可达到4以上，代期为34周，因而增殖效率

8、高。,第三节 蔬菜组织培养一、番茄1、花药培养取花药37mm长、单核中期的花蕾。将花蕾用0.1吐温40溶液浸泡5min70酒精15s3的漂白粉10 min无菌水冲洗接种从花蕾中取出花药，接种在DBMII2.0mg/L NAA1.0mg/LKIN的培养基上，27、24h光照后黑暗下培养。,2、叶培养取无菌幼嫩叶片，切成55mm的小块。MS0.2mg/LIAA2mg/L BA 27、光。25天后，愈伤组织分化芽。一个月后每切块长出25个芽。芽转到无激素的MS培养基上，510d后形成根。,3、胚培养 外植体的制备授粉后3040d果实95%乙醇消毒5%NaCl中5min无菌蒸馏水充分淋洗除去种子上的胶

9、状复被。 培养基MS附加硫胺素3.0um。pH6.0。附加2.4D9.05um,IiP4.92um和椰乳100ml/L的MS用做愈伤组织启动和保存培养基。 培养条件愈伤组织启动和保存暗培，27。再生生根2030、16h/d，荧光下进行,二、甘蓝 1、取材和处理 剥去叶球的叶片，留下中心柱和腋芽，70%酒精1-2分钟0.2%升汞10-15分钟剥离腋芽接种在繁芽培养基上（MS+IAA0.2-0.5mg/L+6BA1.0-3.0mg/L） 2、培养 光照1000-3000lx, 12-13h/d, 202，湿度50%-60%。 3、扩大繁殖 重复进行扩繁，直到达到要求繁殖数量为止。,第四节 观赏植物

10、的组织培养 兰花 兰花系兰科植物，在自然条件下主要靠分株繁殖，繁殖率一年只有几倍，所以无法大量繁殖生产，而且由于长期进行无性繁殖，带病毒株增多，逐渐使种性降低，影响生长。,1、取材和处理 切取lOcm长生长健壮的茎尖，去苞叶洗净75酒精5的漂白粉10min无菌水冲洗接种。 在兰花叶片组织培养中，应选择带有嫩叶的花梗，以后的处理方法同茎尖。,2、原球茎的诱导培养 茎尖生长点或叶片接种在原球茎诱导培养基上。因兰花种类而异，可以用固体培养基或液体培养基(液体培养基中应加比较多的蔗糖)。凡原球茎切口处不变褐或变褐物质排出量较少的种类，可用固体培养基，而易变褐的种类，最好用液体培养基，诱导温度应于23，

11、光照强度1 500-20001x。,原球茎的增殖,3、苗的分化培养 兰科植物与其他草本花卉不同，它不易受生长调节物质的影响，一般是将原球茎转入离子浓度较低的培养基中，加入一些如椰子汁等天然提取物质，效果会更好，原球茎很快再生成植株。 lcm高的幼苗转移到壮苗培养基上培养36个月，使其长34片叶、34条根、310cm高，可移栽在泥炭和蛭石中，保湿弱光施肥。,原球茎再分化,蝴蝶兰,第五节 药用植物离体培养 芦荟 芦荟不能自花授粉结实，因此，用种子繁殖非常困难。目前的繁殖方法主要是分株和分蘖，但难以快速、大量地繁殖种苗，这也是当前芦荟种苗昂贵的重要原因之一。,（一）材料和培养基 取l0-l5cm高的

12、芦荟幼苗诱导培养基为MS+(1-6mg/ L)BA+(0.1-0.5mg/L)NAA分化培养基为MS+(2-4mg/L)BA+ (0.1-0.5mg/L)NAA生根培养基为MS+(0.1-0.5mg/L)IBA+(2-5mg/L)PP333,（二）繁殖方法1、愈伤组织培养 茎尖部分75%乙醇30-60s升汞5-l0min无菌水冲洗数次解剖刀取出组织切块接种 培养条件:光照 10-12h，1000一2000Lx， (25士)2。15-25d后，可膨大成愈伤组织，1周后，就可将愈伤组织转管进行继代培养或分化培养。,2、继代、分化培养 同诱导 3、生根培养 培养条件同分化，半个月后即可生根。 4、炼

13、苗 清水喷湿，在15-25、湿度60%- 80%的条件下炼苗24h，也可视情况缩短为l2h。 5、移栽 将幼苗移栽入由蛭石组成的驯化苗圃中驯化，定期喷施驯化培养液和清水，15-20d后，即可移栽。,第六节 树木的离体培养 银杏 是园林绿化的珍贵树种，亦有较高的药用价值，以叶及种皮入药，它的叶的制剂能显著扩张脑血管，可治疗脑血栓、冠心病、心肌梗塞及大动脉炎等。种仁、有小毒、性平、有敛肺、定喘等功能。因此可说全身都是宝。但常规繁殖较难，因此组织培养有很大应用价值。,胚培养 （一）取材：选择生长饱满的银杏种子。 （二）操作： 1、升汞进行表面消毒，无菌条件下剥除外皮和胚乳。接种在MS 培养基上。培养条件：光照1500LX ，温度25度。 2、愈伤组织的诱导：1/2MS+IBA浓度梯度（1、3、5、7、10PPM）诱导愈伤组织。将培养3天后的银杏胚接种在此培养基上，诱导出大量的愈伤组织。,3、愈伤组织继代培养： MS+1.0mg/LNAA+0