常用10种培养基的配置和质控标准

1、.小结：常用10 种培养基的配置和质控标准（ 1） 基础肉汤成分和配制方法：蛋白胨10gNaCl5g牛肉膏5g酵母膏3gDW1LpH7.47.615 磅 30min 高压灭菌，倾注无菌试管备用。每次新配制时做质控阳性质控： ATCC 25923金黄色葡萄球菌接种基础肉汤中，35温箱 24h 肉汤混浊。无菌试验： 100 管随机抽取 10 管未接种的基础肉汤 35温箱 24h 培养，无细菌生长。平行试验： 质控时，要求新旧批号的培养基同时做用途：供培养对营养要求不高的细菌增菌用；作其他选择培养基的基础液。储存干粉：室温保存，由于容易受潮，所以开瓶后务必将盖拧紧。培养基： 2-8保存一个月（ 2）

2、普通营养琼脂成分和配制方法 ：基础肉汤100ml琼脂2g15 磅 30min 高压灭菌，倾注平板备用。注：可购买国内生产的瓶装营养琼脂粉，按上面的说明配制。.质量控制：质控频度每次新配制时做质控质控方法阳性质控： ATCC 25923金黄色葡萄球菌或 ATCC25922大肠埃希菌接种营养琼脂上，35温箱 24h 细菌生长良好。无菌试验： 100 块随机抽取 10 管未接种的营养琼脂 35温箱 24h 培养，无细菌生长。平行试验： 质控时，要求新旧批号的培养基同时做用途：供培养对营养要求不高的细菌。作无糖基础培养基。加血成血平板。加血加热 75以上，再加上生长添加剂就成巧克力平板。储存干粉：室温

3、保存，由于容易受潮，所以开瓶后务必将盖拧紧。培养基： 2-8保存半个月（ 3）葡萄糖肉汤成分和配制方法：蛋白胨10g朊胨10gNaCl5g牛肉膏5g酵母粉3g葡萄糖4g枸橼酸钠3g硫酸镁3gDW1LpH7.27.4.0.4%酚红5ml15 磅 30min 高压灭菌，备用质量控制：质控频度每次新配制时做质控质控方法阳性质控： ATCC 25923金黄色葡萄球菌接种葡萄糖肉汤中，35温箱 24h 肉汤混浊。无菌试验： 100 管随机抽取 10 管未接种的葡萄糖肉汤 35温箱 24h 培养，无细菌生长。平行试验： 质控时，要求新旧批号的培养基同时做用途：供培养对营养要求不高的细菌增菌用。6 储存干粉

4、：室温保存，由于容易受潮，所以开瓶后务必将盖拧紧。培养基： 2-8保存一个月（ 4） 血液琼脂平板成分和配制方法：（法国生物梅里埃成品培养基）4g 琼脂基础 +100mL 蒸馏水高压灭菌（ 15 磅、 121 ） 20min冷却至 50 加入 5%-10% 无菌羊（兔）血倾注于无菌平皿内（9mm）每一个平皿分装1315ml 。质量控制：质控频度每次新配制时做质控质控方法阳性质控： ATCC 6303肺炎链球菌（或质控菌株）和ATCC 25923金黄色葡萄球菌接种于血液琼脂， 35温箱 24h 细菌生长良好。 ATCC6303 肺炎链球菌为溶血。 ATCC 25923金黄色葡萄球菌为溶血。无菌试

5、验： 100 块随机抽取 10 块未接种的血液琼脂35温箱24h 培养，无细菌生长。平行试验： 质控时，要求新旧批号的培养基同时做.用途：供分离培养营养要求较高的细菌。储存干粉：室温保存，由于容易受潮，所以开瓶后务必将盖拧紧。培养基： 2-8保存半个月注意事项 :制备血平板时，温度必须适宜，琼脂应冷至50左右，如温度过高，可使血液变色不易观察溶血，温度过低，琼脂凝固与血液不易混合。使用的血液以羊血，兔血为好，不宜使用人血，因人血中有抗体、补体不利细菌生长。羊血对链球菌、 葡萄球菌的溶血比较满意，但可抑制脑膜炎奈瑟氏菌与嗜血杆菌的生长。（ 5）血液琼脂平板（国产）普通营养琼脂粉3.8 克 +10

6、0ml 蒸馏水10%葡萄糖0.6ml血液610ml冷却至 50 加入 5%-10% 无菌羊（兔）血倾注于无菌平皿内（9mm）每一个平皿分装1315ml 。质控方法阳性质控： ATCC 6303肺炎链球菌（或质控菌株）和 ATCC 25923金黄色葡萄球菌接种于血液琼脂， 35温箱 24h 细菌生长良好。 ATCC6303 肺炎链球菌为溶血。 ATCC 25923金黄色葡萄球菌为溶血。无菌试验： 100 块随机抽取 10 块未接种的血液琼脂 35温箱 24h 培养，无细菌生长。平行试验： 质控时，要求新旧批号的培养基同时做用途：供分离培养营养要求较高的细菌。储存干粉：室温保存，由于容易受潮，所以

7、开瓶后务必将盖拧紧。培养基： 2-8保存半个月注意事项 :.制备血平板时，温度必须适宜，琼脂应冷至 50左右，如温度过高，可使血液变色不易观察溶血，温度过低，琼脂凝固与血液不易混合。使用的血液以羊血，兔血为好，不宜使用人血，因人血中有抗体、补体不利细菌生长。羊血对链球菌、 葡萄球菌的溶血比较满意，但可抑制脑膜炎奈瑟氏菌与嗜血杆菌的生长。（6）巧克力平板成分和配制方法：基础肉汤100ml琼脂粉1.5g无菌脱纤维兔血10ml方法： 高压灭菌后，冷至80 85加入兔血，混匀置 85水浴 10 15min，使血液由鲜红色变为巧克力色。取出，当冷至50时倾注平板，经无菌试验后，保存冰箱中备用。质控方法阳

8、性质控：ATCC10211流感嗜血杆菌或 ATCC49619淋病奈瑟菌，35，5%CO2温箱 24-48h, 细菌生长良好。无菌试验：100 块随机抽取 10 块未接种的巧克力平板 35 5%CO2 温箱 24-48h 培养，无细菌生长。平行试验： 质控时，要求新旧批号的培养基同时做用途：分离培养脑膜炎奈瑟氏菌，嗜血杆菌。淋病奈瑟氏菌的分离培养。储存干粉：室温保存，由于容易受潮，所以开瓶后务必将盖拧紧。培养基： 2-8保存半个月（7）双糖培养基基础液胰蛋白胨10g.NaCl5g牛肉膏5gDW1LpH7.40.4%酚红液6ml制备：（ 1）基础液500ml葡萄糖1g琼脂2.5g（ 2）基础液50

9、0ml乳糖5g琼脂7.5g制法 ： 10 磅 20min 高压灭菌高，先将葡萄糖倒入无菌试管内1/3 处凝固后，再将乳糖加入2/3 处，置成斜面。质量控制：质控频度每次新配制时做质控质控方法阳性质控： 将福氏痢疾杆菌（卫生部临床检验中心质控菌株）接种于双糖培养基中，生长良好，上层为红色 / 下层为无色。阴性质控：将 ATCC27853接种于双糖培养基中， 35温箱 24-48h 培养生长良好，上层下层均为红色。无菌试验： 100 管随机抽取 10 管未接种的双糖培养基 35温箱 24-48h 培养，无细菌生长。平行试验： 质控时，要求新旧批号的培养基同时做。用途：用于分离培养肠道致病菌。储存干

10、粉：室温保存，由于容易受潮，所以开瓶后务必将盖拧紧。培养基： 2-8保存半个月.（8） MH 培养基成分和配制方法：可使用国产（北京奥博星生物技术有限公司）或法国生物梅里埃成品培养基配制：3.8g M-H 琼脂基础 +100mL 蒸馏水高压灭菌（ 15 磅、 121 ） 20min冷却至 50 倾倒平皿，厚度4mm质量控制：质控频度每次新配制时做质控质控方法阳性质控： ATCC25923、ATCC25922 接种于 MH 培养基上， 35温箱 24-48h 培养，细菌生长良好。无菌试验： 100 块随机抽取 10 块未接种的 MH 培养基 35温箱 24-48h 培养，无细菌生长。平行试验：

11、质控时，要求新旧批号的培养基同时做。用途 ：用于非苛养菌的KB法药敏试验用。储存干粉：室温保存，由于容易受潮，所以开瓶后务必将盖拧紧。培养基： 2-8保存半个月（9） 沙保弱培养基成分： 蛋白胨 10 克，琼脂20 克，麦芽糖40 克，水 1000 毫升。方法： 于 1000ml 水中加入上述成分，加热煮沸，不断搅拌，待琼脂溶解后，加入40 克麦芽糖（或葡萄糖） ，搅拌，使它溶解， 趁热调 PH 到 7.6，定量分装于烧瓶内（每瓶 100ml ），高压灭菌103.43Pa15min，倾注于无菌平皿内（9mm）每一个平皿分装13 15ml。待凝固后，于 37培养 18 24h，如无细菌生长，置冰

12、箱中备用。质控频度每次新配制时做质控质控方法.阳性质控： ATCC90028 接种于沙保罗平板上，35温箱 24-48h 培养生长良好。无菌试验： 100 块随机抽取 10 块未接种的沙保罗培养基 35温箱 24-48h 培养，无细菌生长。平行试验： 质控时，要求新旧批号的培养基同时做。用途：真菌的分离培养用。储存干粉：室温保存，由于容易受潮，所以开瓶后务必将盖拧紧。培养基： 2-8保存半个月（10）念珠菌显色培养基成分 :由琼脂、蛋白胨、色素、氯霉素等组成配制方法 ：准确称取科玛嘉念珠菌显色琼脂粉47.7 克，加蒸馏水1000 毫升，并在玻璃容器壁上标记液面刻度，边搅拌边加热到完全溶解，不要

13、用蒸锅消毒，冷却到45后，用氨水矫正 PH 至 6.3，摇匀，将其倾注入一次性无菌培养皿中制成平板，使平板深度为3mm 左右。质控频度每次新配制时做质控质控方法阳性质控：ATCC90028 接种于念珠菌显色培养基上， 35温箱 24-48h 培养生长良好，菌落为翠绿色。无菌试验： 100 块随机抽取 10 块未接种的沙保罗培养基 35温箱 24-48h 培养，无细菌生长。平行试验： 质控时，要求新旧批号的培养基同时做。用途：念珠菌的常规鉴定用。储存干粉：室温保存，由于容易受潮，所以开瓶后务必将盖拧紧。培养基： 2-8保存半个月基础质控标准1项目标准.外观液体培养基清晰透明，无沉淀杂质，淡黄色固

14、体培养基表面光滑，无干裂，无细菌生长灭菌一般培养基15 磅 20 30 分钟灭菌糖类培养基8 10 磅 15 20 分钟灭菌蛋白类培养基流动蒸汽或血清凝固器 80 95间接灭菌pH 值用处电位计法或标准比色法测定，禁止用试纸法测定。室温标准范围 pH0.2 内培养基的量度固体培养基一般培养基厚度为： 3mm，药敏培养基为： 5mm。液体培养基试管： 2030ml，培养瓶为： 6080ml斜面琼脂斜面高度不超过试管的 2/3，不干裂双糖斜面底层与斜面各占 1/3，两者之间有 1cm 直立区无菌实验高压后培养基不同环境按10%比例随机抽样无菌实验分装培养基不同环境按20%比例抽样；少量 100%作

15、无菌实验分离培养基质控培 养 基质控菌株预期结果血液琼脂乙型溶血性链球乙型溶血，发育良好菌绿色链球菌甲性溶血，发育良好巧克力琼脂流行性感冒杆菌发育良好脑膜炎奈瑟氏务生长良好普通琼脂大肠埃希氏杆菌发育良好表皮葡萄球菌发育良好高盐卵黄琼脂金黄色葡萄球菌卵磷脂沉淀，发育良好大肠杆菌不生长沙氏琼脂白色念珠菌生长发育良好大肠杆菌不生长麦康凯琼脂大肠杆菌分解乳糖，菌落红色福氏痢疾杆菌不分解乳糖，菌落无色透明SS 琼脂福氏痢疾杆菌不分解乳糖，菌落无色透明鼠伤寒沙门菌不分解乳糖，菌落无色中心黑色中国蓝琼脂大肠杆菌分解乳糖，菌落蓝色福氏痢疾杆菌不分解乳糖，菌落淡红半透明细菌生化实验质控生化实验阳性菌株阴性菌株糖发酵大肠杆菌绿脓杆菌.糖氧化绿脓杆菌大肠杆菌V-P 反应产气肠杆菌大肠杆菌靛基质实验大肠杆菌产气肠杆菌甲基红实验大肠杆菌产气肠杆菌枸橼酸盐弗氏枸橼酸杆菌大肠杆菌尿