20041130_安捷伦HPLC色谱柱选择与色谱柱维护保养.ppt

1、,HPLC色谱柱选择与维护保养,Sa 安捷伦科技,安捷伦HPLC色谱柱选择,分离模式的选择,样品,溶于有机溶剂,溶于水,溶于四氢呋喃,非离子化,离子化,溶于有机溶剂,溶于水,溶于正己烷,溶于甲醇或甲醇/水 或乙腈或乙腈/水,用硅胶的正相模式,用键合相的正相模式,用键合相的反相模式,用键合相的反相模式,低分子凝胶渗透色谱,用键合相的反相模式,抑制电离反相键合相色谱,离子对键合相的反相模式,用硅胶的正相模式,离子交换模式,凝胶渗透色谱,凝胶过滤色谱,大孔填料的离子交换模式,用大孔填料的反相模式,分子量2, 000,分子量2, 000,反相分配色谱 极性:固定相 流动相 固定相 - 非极性 流动相(

2、甲, 乙醇, 乙腈, THF, 二氯乙烷)- 极性 非极性物质后出峰,正相吸附色谱 极性:固定相 流动相 固定相 - 极性 流动相(己烷, 庚烷)- 非极性 极性物质后出峰,正相色谱 20%,反相色谱 80%,正相 99.995% 纯度的二氧化硅,C-18柱-性能影响因素,ZORBAX生产工艺,微球表面的略微融合专利技术增强了硅胶填料的耐流动相冲刷能力-Zorbax色谱柱使用寿命长的技术保障,安捷伦拥有此项溶胶-凝胶填料专利技术,StableBond Eclipse XDB Bonus-RP Extend,ZORBAX Rx 多孔硅胶微球,色谱柱尺寸 - 对色谱分离的影响 短柱 (15-100

3、mm) - 运行时间短, 柱压低 长柱 (150-250mm) - 分辨率高, 运行时间长 窄径柱 ( 2.1mm) - 检测器灵敏度高 宽径柱 (3-21.2mm) - 载样量高,C-18柱-性能影响因素,颗粒形状 - 对色谱分离的影响 当使用黏度较大的流动相50:50=MeOH:H2O时, 球型颗粒可以降低柱压, 延长色谱柱寿命,C-18柱-性能影响因素,球形,不规则形,粒径 - 对色谱分离的影响 较小的颗粒柱效较高, 但会引起柱压过高. 3.5m粒径的常用于分离复杂的多组份样品, 而组份单一的样品多采用5m的粒径,1.8m 3.5m 5m 7m 10m,表面积 - 对色谱分离的影响 高表

4、面积对于多组份样品的分离具有较强的保留能力, 柱容量和分离度. 表面积低的填料通常能迅速达到平衡状态, 对于梯度淋洗尤为重要,C-18柱-性能影响因素,孔径 - 对色谱分离的影响 大孔的填料颗粒可以延长溶质大分子在填料表面滞留的时间, 达到充分分离, 改善峰形 样品 MW 4, 000, 选择 80 的孔径 样品 MW 4, 000, 选择 300 的孔径,大孔径填料适用于大分子分析,大孔径300 全多孔色谱柱 可用于分离蛋白质和多肽 分子量虽小但hydrodynamic volume(水动力学体积)较大的分子 Poroshell 色谱柱 高流速下, 高柱效分析大分子的蛋白质和多肽,色谱柱填料

5、孔径必须适合待测物分子自由进出填料孔, 与孔内表面的键合相进行分离分配,300 孔径可改善蛋白质和多肽峰形,选择合适的 填料孔径分析 大分子可获得 最佳峰形,300 孔径可改善大分子的峰形,色谱柱: 4.6 x 150 mm, 5 mm 流动相: 60% MeOH: 40% 0.1% 三氟乙酸 流速: 0.75 mL/min 温度: RT 检测器: UV 282 nm,溶液中的分子尺寸决定适宜的色谱柱孔径 窄的峰宽表明待测分子进入填料孔没有受到阻碍,分子量虽小但 hydrodynamic volume (水动力学体积)较大的分子,键合类型 - 对色谱分离的影响 单齿键合： 提高传质速率, 加快

6、色谱柱平衡 双齿键合： 增加色谱柱稳定性, 增加色谱柱的载样量,C-18柱-性能影响因素,碳覆盖率- 对色谱分离的影响 高碳覆盖率：提高分辨率, 分析时间长 低碳覆盖率：缩短运行时间,封端 - 对色谱分离的影响 封端：减轻待测组份与硅胶表面残留的酸性硅羟基反应而引起的色谱峰拖尾现象 对于极性样品, 未封端与经过封端处理的色谱柱在选择性上有明显差异,C-18柱-性能影响因素,固定相键合 二甲基硅烷,封端 四甲基硅烷,Si,O,OH,O,O,CH,3,Si,R,CH,3,CH,3,Si,CH,3,CH,3,Si,R,CH,3,R = C8,C18,etc,.,O,OH,OH,O,CH,3,Si,R

7、,CH,3,CH,3,Si,R,CH,3,+,+,Cl,CH,3,Si,CH,3,CH,3,OH,OH,OH,OH,CH,3,Cl,R,CH,3,(,TMS),传统键合及封端技术,取代基：五个 旁侧基团: 异丙基,Zorbax StableBond 空间位阻保护-抗水解能力,键合相 流失, 保留减弱,另一个裸露的硅羟基 , 潜在的拖尾因素,普通硅胶柱低 pH 2 不稳定, 发生水解,安捷伦专利的空间位阻保护,液相柱-保留值与pH的关系,pH变化值 0.1,RS变化值1.6,色谱柱：Zorbax StableBond C18 4.6 X 250mm, 5um 部件号：880975-906 流动相

8、：27%甲醇：73%磷酸 pH 2.5 & 2.6 温度：500C 流速： 1.0mL/min.,色谱柱: ZORBAX Eclipse XDB-C8 4.6 x 75 mm, 3.5 m 流动相: 44% 25 mM磷酸, pH 7.00 : 56% 甲醇 流速: 1.0 mL/min 温度: 25C 检测: UV 250 nm,可电离的组份的分离可能会随pH变化发生显著变化 甚至很小的 0.050.25 个pH变化单位.,样品: ketoprofen ethyl paraben Hydrocortisone fenoprofen propyl paraben Propranolol ibu

9、profen,液相柱-保留值与pH的关系,0.25 个pH,液相柱-保留值与pH的关系,pH变化： 0.2个pH(7.07.2) 保留时间改变： 1.2分钟 (13.614.8分钟),保留时间随pH 改变不明显,保留时间随pH改变 不明显(酸性环境中),方法稳定区 方法波动区(pKa+1.5) 方法稳定区,液相柱-保留值与pH的关系,液相柱-保留值与pH的关系,复杂组分的流动相pH选择技巧,色谱柱: ZORBAX Extend-C18 4.6 x 150 mm, 5 mm 流动相: 30% 缓冲液: 70% MeOH pH 7 缓冲液20 mM Na2HPO4 pH 11缓冲液 20 mM T

10、EA 流速: 1.0 mL/min 温度: RT检测器: UV 254 nm,0 5,1,2, 3,4,5,Time (min),7,6,Extend-C18 pH 7,1. Maleate 马来酸盐 2. Scopolamine 东莨菪碱 pKa 7.6 3. PseudoEphedrine 假麻黄碱 pKa 9.8 4. Doxylamine 抗敏安(多西拉敏) pKa 9.2 5. Chlorpheniramine 氯苯吡胺pKa 9.1 6. Triprol内径ine 苯丙烯啶pKa 6.5 7. Diphenhydramine 苯海拉明 pKa 9.0,Extend-C18 pH 1

11、1,0 5 10,1,2,3,4,Time (min),6,5,7,高pH下, 碱性成分的保留增加,待测物pKa+1.5以外 的流动相pH 可保证方法的稳定性,Zorbax色谱柱发展史,1973 ZORBAX SIL发明专用于HPLC分离的球状、小颗粒硅胶(专利) 1977 ZORBAX ODS单官能团, 单层键合相发明者之一 1978 ZORBAX column首先推出色谱柱的质量信誉保证 1982 ZORBAX GF-250改善了蛋白质尺寸分离的稳定性 1987 ZORBAX Rx-SIL推出适合碱性化合物的HPLC分离的全新硅溶胶技术(专利) 1990 ZORBAX StableBond

12、增强了低pH条件下键合相的稳定性(专利) 1996 ZORBAX Eclipse XDB双封端技术提高了中等pH条件下键合相的稳定性(专利) 1997 Zorbax LC/MS column 15和30 mm(3.5um)快速, 高分辨率, 高通量LC/MS色谱柱 1998 ZORBAX Bonus-RP 极性键合技术使碱性化合物的分离得到改善(专利) 1999 ZORBAX CombiHT 专为小规模组合化学样品制备设计的高通量色谱柱 1999 ZORBAX Eclipse dsDNA 用于分析双链DNA的多孔硅胶柱 1999 ZORBAX Carbohydrate 分析单, 双, 三糖和糖

13、醇的专用柱 1999 Zorbax Extend C18独特宽pH跨度, 高pH下使用的硅胶基质色谱柱(专利) 2001 Zorbax SB-aq可在低pH下(18)使用100%水相的填料(专利) 2002 Zorbax Poroshell 300SB蛋白质高速, 高效反相分离新填料 2002 ZORBAX 3.0mm 内径.3-mm 柱径溶剂节省柱 2003 ZORBAX sub 2 micron1.8um粒径的高通量, 超高速色谱柱 (5月1日上市) 2003 ZORBAX PrepHT高通量全系列制备柱-分析柱向制备柱直接放大 (6月1日上市),键合相-适用pH范围,低pH下, 分析酸性

14、, 碱性和中性组分, 峰形优异, 柱寿命长,中等pH下, 分析酸性, 碱性和中性组分, 尤其碱性组分峰形优异, 柱寿命长,中等pH下, 分析酸性, 碱性和中性组分, 可用于100%全水相, 尤其极性组分峰形优异, 柱寿命长,中高pH下, 分析酸性, 碱性和中性组分, , 尤其碱性组分峰形优异, 柱寿命长,SB-C18 80 A & 300 A pH: 18,SB-C8 80 A & 300 A pH: 18,SB-苯基 80 A pH: 18,反相色谱柱,Bonus-RP 空间位阻保护 + 三封端 80 A pH: 29,Extend-C18 80 A & 300 A pH: 211.5,Ec

15、lipse XDB 双封端,Eclipse XDB-C18 80 A pH: 29,Eclipse XDB-C8 80 A pH: 29,Eclipse XDB-苯基 80 A pH: 29,StableBond 空间位阻保护,Poroshell 300SB-C18 实心核多孔壳 pH: 18,SB-CN 80 A & 300 A pH: 18,SB-C3 80 A & 300 A pH: 18,Zorbax 产品系列,SB-AQ 空间位阻保护 80 A pH: 18,可使用 100%水相,Extend 双齿键合+双封端,低pH,中pH,高pH,安捷伦HPLC色谱柱维护保养,Zorbax色谱柱

16、=高柱效 +长寿命,min,0,0.5,1,1.5,2,Norm.,0,10,20,30,40,50,色谱柱: ZORBAX SB-C18 4.6 x 30 mm, 1.8um 流动相: 60% 甲醇: 40 水 流速: 1mL/min 温度: 室温 检测: UV 254 nm,柱效 进样次数 #3 #4 166356138 10068576372 20068826381 30068956381 40068836294 50068156312 60066876236 70066536115 80066956221 90067816300 68106302 1300 68586528 20346

17、8236343,1,2,3,4,样品 尿嘧啶 苯酚 4-Cl-硝基苯 甲苯,色谱柱柱内体积和平衡时间,单次样品运行时间 = 分析时间 + 色谱柱平衡时间 色谱柱平衡时间 = 10倍柱内体积 流速,清洗液相色谱柱,冲洗色谱柱-用比流动相更强的溶剂,反相色谱柱 用以下溶剂至少各25mL冲洗色谱柱(分析柱) 不含缓冲盐的流动相 100%甲醇 100%乙腈 75%乙腈+25%异丙醇 100%异丙醇 100%二氯甲烷 * 100%己烷* *若使用己烷或二氯甲烷冲洗色谱柱, 则在重新使用反相 流动相以前, 必须用异丙醇冲洗色谱柱 !,正相色谱柱 用以下溶剂至少各50mL冲洗色谱柱(分析柱) 50%甲醇+5

18、0%三氯甲烷 100%乙酸乙酯,0.12mm内径管线用于毛细管HPLC中2.1内径色谱柱 0.17mm内径管线用于分析型HPLC中2.14.6内径色谱柱 0.25mm内径管线用于半制备型HPLC中9.4内径色谱柱 0. 5mm内径管线用于制备型HPLC中21.2内径色谱柱,连接管线与接头,色谱柱: StableBond SB-C18, 4.6 x 30 mm, 3.5 mm 流动相: 85% H2O with 0.1% 三氟乙酸 : 15% ACN 流速: 1.0 mL/min 温度: 35C,50 mL 柱外体积（管线）,样品: 1. 苯丙胺酸 2. 5-苯基-3, 6-二氧-2-哌嗪乙酸

19、3. Asp-Phe 4. 天冬甜素,HPLC常用的色谱柱接头,Troubleshooting LC Fittings, Part II. J. W. Dolan and P. Upchurch. LC/GC Magazine 6:788 (1988),HPLC常用的色谱柱接头,活塞杆与密封圈,蓝宝石活塞杆 1/包装部件号：5063-6586 活塞杆密封圈 （Vespel聚酰亚胺用于反相）2/包装部件号：5063-6589 *己烷对Vespel聚酰亚胺有溶涨作用 活塞杆密封圈 （聚乙烯用于正相）2/包装部件号：0905-1420,样品: 尿嘧啶 苯酚 N, N-二甲基苯胺,更换前 更换后,塔板

20、数USP拖尾因子 (5%) 1.36701.45 2.104571.09 3.100851.00,活塞杆与密封圈,检测器用灯,检测器用灯,检测器用灯,1. DAD的氘灯替代VWD的氘灯 关闭灯电源, 冷却5min以上 将lamp设定的VWD configuration的灯类型改为2140-0590 2. 灯能量测试 以水为流动相 灯预热10min以上 在化学工作站Diagnosis状态下进行波长校准, 将紫外灯的使用时间归零,DAD的氘灯替代VWD的氘灯,DAD故障诊断与维护,要进行DAD故障诊断, 单击DAD图标, 然后选择Show Module Test选项, 进入DAD测试选项画面,DA

21、D故障诊断测试共有8项内容： DAD Self-Test DAD Intensity Test DAD Cell Test,常做的DAD维护： 更换灯 清洗或更换流动池窗,Diagnosis界面故障原因分析,故障选择框,可能原因框,诊断过程故障分析 样品分析过程中故障分析,在Diagnosis画面中为用户提供了在诊断过程或样品分析过程中出现的问题以及可能的原因,样品溶剂溶解强度,样品溶剂溶解能力强于流动相导致色谱峰峰形问题：裂分峰或宽峰,中性分析时为何要使用缓冲液？,色谱柱: ZORBAX Eclipse XDB-C8, 4.6 x 75 mm, 3.5 m 流动相: 44% A : 56%

22、甲醇 流速: 1.0 mL/min 温度: 25C 检测: UV 250 nm,含缓冲液的流动相可改善保留, 分离和色谱峰峰形.,样品: 1. ketoprofen 2. ethyl paraben 3. hydrocortisone 4. fenoprofen 5. propyl paraben 6. propranolol 7. ibuprofen,A = pH 7.0水,A = pH 7.0 水+25 mM 磷酸缓冲液,增加缓冲液浓度减少拖尾,色谱柱:ZORBAX Eclipse XDB-C8 4.6 x 150 mm, 5 mm 流动相:40% 磷酸盐缓冲液 60% ACN 流速:1.

23、5 mL/min. 温度:40C,USP Tf 1.62 1.65 1.63 1.77 1.83 1.12,10 mM 磷酸盐 pH 7.0,USP Tf 1.41 1.50 1.33 1.39 1.36 1.00,25 mM 磷酸盐 pH 7.0,在中等pH下, 离子强度较高, 能有效掩蔽硅羟基的二次作用减少拖尾,样品: Tricyclic Antidepressants （三环抗抑郁剂） 1. Desipramine（脱甲丙咪嗪） 2. Nortriptyline（去甲替林） 3. Doxepin（多塞平） 4. Imipramine（丙咪嗪） 5. Amitriptyline（阿米替林）

24、 6. TrImipramine（三甲丙咪嗪）,TEA对碱性成分峰形的影响,0 2.5 5.0,Time (min),1,2,3,4,5,色谱柱: ZORBAX Eclipse XDB-C8, 4.6 x 150 mm, 5 mm 流动相: 85% 25 mM Na2HPO4 : 15% ACN 流速: 1.0 mL/min. 温度: 35C,USP TF 5% 1. 1.29 2. 1.33 3. 1.63 4. 2.35 5. 1.57,No TEA,10 mM TEA,USP TF 5% 1. 1.19 2. 1.18 3. 1.20 4. 1.26 5. 1.14,pH 7,样品: 1

25、. Phenylpropanolamine （去甲麻黄碱） 2. Ephedrine（麻黄素） 3. Amphetamine（苯丙胺） 4. MethAmphetamine（脱氧麻黄碱） 5. Phenteramine （苯丁胺）,竞争酸对酸性组分的峰形的影响,色谱柱:ZORBAX StableBond SB-C18 4.6 x 150 mm, 5 mm 流动相:40% A: 60% ACN 流速:1.0 mL/min. 温度:室温 样品: Ibuprofen（异丁苯丙酸） pKa 4.4,pH 3 5 mM NaH2PO4,Tf = 1.8,pH 3 5 mM NaH2PO4 1% 乙酸,p

26、H 2.5 0.1% 三氟乙酸,Tf = 1.0,Tf = 1.09,A:,乙酸和三氟乙酸均能作为竞争酸填加至流动相中 三氟乙酸由于所需浓度较低, 可作为首选,色谱柱技术 5988-6467EN 流动相对色谱的影响(TE40),液相色谱柱: ZORBAX Eclipse XDB-C8 色谱柱尺寸: 4.6 x 50 mm 3.5m 部件号: 935967-906,UV: 254 nm 流速: 1 mL/ min. 室温,Uracil Butylparaben Naphthalene Dipropylphthalate Acenaphthene,尿嘧啶 尼帕尔金丁酯 萘 二丙基邻苯二甲酸酯 苊,

27、刻度混合: Dial-a-Mix A: 水 B: 甲醇, 用泵抽取50% B,体积比混合: Vol/Vol 250 mL水 + 250 mL甲醇, 用泵抽取100%混合液,定容混合: Mix-to-Mark 250 mL甲醇, 用水定容至500 mL, 用泵抽取100%混合液,预混合（重量比混合）: Premixed (w/w) 200 g甲醇 + 200 g水, 用泵抽取100%混合液,改变流动相配比方式, 可增加柱效 （提高灵敏度）,液相分析-小诀窍,提高柱温，可增加柱效（提高灵敏度） 减小柱内径，可增加柱效（提高灵敏度） 缩短检测器响应时间，可增加柱效（提高灵敏度） 减小柱外体积，可增加

28、柱效（提高灵敏度） 使用超纯硅胶，可增加柱效（提高灵敏度） 使用高能量氘灯，可增加柱效（提高灵敏度） 使用中孔透光氘灯，可增加柱效（提高灵敏度） 改变流动相pH ，可增加柱效（提高灵敏度） 改变有机相% ，可增加柱效（提高灵敏度） 改变键合相 ，可增加柱效（提高灵敏度） 改变有机添加剂 ，可增加柱效（提高灵敏度） 改变流动相配比方式 ，可增加柱效（提高灵敏度）,生化 多肽- 5988-6316EN 升温对于反相 HPLC分离强疏水肽的影响 (B27) Polypeptide,流动相: A: 含0.05%三氟乙酸的水 B: 含0.05%三氟乙酸的乙腈 2% B / min 进样量: 100L (

29、50g的6M脲/5%乙酸) UV: 210 nm 流速: 1 mL/min 室温,液相色谱柱: ZORBAX StableBond-C18 色谱柱尺寸: 4.6 x 250 mm 5m 部件号: 880975-902,室温 300C 400C 500C 600C 700C,提高柱温，可增加柱效（提高灵敏度）,环保,样品: 除草剂 流动相: 52/48 0.1 M乙酸钠/甲醇, pH 6 流速: 0.45 mL/min 温度: 40, 90 检测: UV,除草剂: 柱温的影响 Herbicides: Effect of Column Temperature,1. 西玛津 2. 敌草隆 3. 扑灭

30、津 4. 扑灭净 5. 异丙甲草胺,1. Simazine 2. Diuron 3. Propazine 4. Prometryn 5. Metolachlor,液相色谱柱: Zorbax StableBond-C18 色谱柱尺寸: 4.6 x 150 mm, 5m 部件号: 883975-902,目录P625,40,90,提高柱温，可增加柱效（提高灵敏度）,生物制药,液相色谱柱: Zorbax 300 StableBond-C3 色谱柱尺寸: 4.6 x 150 mm, 5m 部件号: 883995-909,肽类/蛋白质: 升温对分离的影响 Peptides/Proteins: Effect

31、 of Elevated Temperature,样品: 多肽 流动相: A = 5: 95, 乙腈 : 水, 0.10%三氟乙酸 (V/V%) B = 95: 5, 乙腈 : 水, 0.085%三氟乙酸 (V/V%) 梯度: 在 20 min内 15-53%, 后运行时间 12 min 流速: l.0 mL/min 温度: 室温 -60 检测: UV 215 nm,1. 亮氨酸脑啡呔 2. 血管紧张素II 3. 核糖核酸酶A 4. 牛胰岛素 5. 细胞色素C 6. 溶菌酶 7. 肌红蛋白 8. 碳酸酐酶,1. Leucine Enkephalin 2. Angiotensin II 3. R

32、nase A 4. Insulin(BOV) 5. Cytochrome C 6. Lysozyme 7. Myoglobin 8. Carbonic anhydrase,目录P611,提高柱温， 可增加柱效 （提高灵敏度）,生物制药,液相色谱柱: Zorbax StableBond-C8 色谱柱尺寸: 150 mm, 5m,减小毛细管内径来提高 低浓度样品的检测灵敏度 Reducing Capillary ID to Improve Sensitivity for Concentration-Limited Samples,流动相: 60%乙腈/40%水 流速: 内径 0.3 mm-4 uL

33、/min 内径 0.5 mm-10 uL/min 内径 1.0 mm-50 uL/min 内径 4.6 mm-1.0 uL/min 温度: 室温 检测器: UV 254 nm 样品: 200 ng联二苯 (100 nl),目录P611,减小柱径，可增加柱效（提高灵敏度）,色谱柱技术 5988-6454EN 使用小体积色谱柱对于检测器响应时间的重要性 (TE32),液相色谱柱: ZORBAX StableBond-C18 色谱柱尺寸: 4.6 x 15 mm 3.5m 部件号: 831975-902,流动相: 乙腈: 1%甲酸=32: 68 UV: 254 nm 流速: 1.0 mL / min

34、. 30C 进样量: 5 L,响应时间: 4.0秒 响应时间: 2.0秒 响应时间: 1.0秒 响应时间: 0.5秒 响应时间: 0.1秒,尿嘧啶 乙酰水杨酸 N-乙酰苯胺,Uracil Acetylsalicylic acid Acetanilide,缩短检测器响应时间，可增加柱效（提高灵敏度）,色谱柱技术 5988-6428EN 不同硅胶类型比较 (TE1),流动相: 含0.05%甲醇的二氯甲烷,液相色谱柱,toluene benzanilide phenol benzyl alcohol,Zorbax Sil Spherisorb Zorbax Rx-Sil,甲苯 N-苯甲酰苯胺 苯酚

35、苯甲醇,使用高纯硅胶， 可增加柱效 （提高灵敏度）,有机化学 5988-6366EN pH对苯胺取代物分析的影响 (ORCH1),流动相 25mM磷酸: 甲醇=58: 42 流速: 1 mL/min 22C,液相色谱柱: ZORBAX StableBond-C18 色谱柱尺寸: 4.6 x 150 mm 5m 部件号: 883975-902,对位甲氧基苯胺 间位苯甲胺 3-氨基-苯甲腈 对位氯苯胺 间位氯苯胺 邻位氯苯胺,p-anisidine m-toluidine 3-amino-benzonitrile p-chloroaniline m-chloroaniline o-chloroan

36、iline,pH: 2.5 pH: 7.0,改变流动相pH， 可增加柱效 （提高灵敏度）,生化 肽 5988-6293EN 三氟乙酸浓度对于反相肽的分离的影响 (B10) Peptide,流动相: A: 水和三氟乙酸 B: 乙腈和三氟乙酸 0 - 30% B （30 min.内） 流速: 1 mL/min UV: 254 nm 进样量: 6uL 十肽菌素标样S1-S5（疏水性有略微差异） 40C,液相色谱柱: ZORBAX 300 SB-C8 色谱柱尺寸: 4.6 x 150 mm 5m 部件号: 883995-906,1.0%三氟乙酸,0.05%三氟乙酸,0.25%三氟乙酸,改变流动相pH，

37、 可增加柱效 （提高灵敏度）,食品分析 5988-6360EN 流动相强度对单糖和二糖分离的影响 (FD4),流动相: 乙腈/水如图 流速: 1 mL/min 示差折光检测器,液相色谱柱: ZORBAX NH2 色谱柱尺寸: 4.6 x 250 mm 5m 部件号: 880952-708,果糖 葡糖 蔗糖 Palatinose 海藻糖 异麦芽糖,Fructose Glucose Saccharose Palatinose Trehalulose Isomaltose,乙腈/水 70/30 乙腈/水 75/25,改变有机相%， 可增加柱效 （提高灵敏度）,色谱柱技术 5988-6468EN 有机

38、改性剂和pH对于选择性的影响 (TE5),流动相: 25 mM磷酸缓冲液 流速: 1.0 mL/min. 22C,液相色谱柱: ZORBAX StableBond-CN 色谱柱尺寸: 4.6 x 150 mm 5m 部件号: 883975-905,anisidine m-toluidine 4-cl-aniline 3-aminobenzonitrile 3-cl-aniline 2-cl-aniline,甲氧基苯胺 间位苯甲胺 4-氯-苯胺 3-氨基苯甲腈 3-氯-苯胺 2-氯-苯胺,42%甲醇 ：58%缓冲液 30%甲醇 ：70%缓冲液,pH 2.6,pH 3.0,改变有机相%， 可增加柱

39、效 （提高灵敏度）,色谱柱技术 5988-6453EN ZORBAX Eclipse系列色谱柱的选择性 (TE31),液相色谱柱: ZORBAX Eclipse XDB-Phenyl 色谱柱尺寸: 4.6 x 150 mm 5m 部件号: 993967-912,流动相: 甲醇 : 水=70: 30 UV: 254 nm 流速: 1.0 mL / min. 室温,Zorbax Eclipse XDB-苯基 Zorbax Eclipse XDB-C8 Zorbax Eclipse XDB-C18,尿嘧啶 苯酚 4-氯-硝基苯 甲苯 萘,Uracil Phenol 4-Cl-nitrobenzene

40、 Toluene Naphthalene,改变键合相， 可增加柱效 （提高灵敏度）,生物制药,液相色谱柱: Zorbax Extend-C18 色谱柱尺寸: 2.1 x 150 mm, 5um 部件号: 773700-902,三氟乙酸和氢氧化铵用于肽类 RP-HPLCESI-MS分离的选择性比较 Selectivity Comparison of TFA and NH4OH for Peptide RP-HPLCESI-MS Analysis,流速: 0.25 mL/min. 温度: 25 梯度: 5-60% B in 20 min. LC/MS: 正离子, ESI- Vf 70V, Vcap

41、 4.5 kV, N2- 35 psi, 12 L/min., 300 样品: 4L (各50 ng),三氟乙酸条件: A- 0.1%三氟乙酸水溶液 B-0.085%三氟乙酸 80%的乙腈溶液,NH4OH条件: A- 20 mM NH4OH水溶液 B- 20 mM NH4OH 80%的乙腈溶液,目录P613,改变有机添加剂， 可增加柱效 （提高灵敏度）,生化 肽 十肽菌素 5988-6299EN 酸对于反相肽的分离的影响(B16) decapeptide,流动相: A: 含相应的酸的水相 B: 含相应的酸的乙腈 0%-30% B（30 min.内） 进样量: 6L肽标样 UV: 254 nm 流速: 1 mL/min 40C,液相色谱柱: ZORBAX 300 SB-C8 色谱柱尺寸: 4.6 x 150 mm 5m 部件号: 883995-906,十肽菌素 S1 十肽菌素 S2 十肽菌素 S3 十肽菌素 S4 十肽菌素 S5,decapeptide S1 decapeptide S2 decapeptide S3 decapeptide S4 decapeptide S5,0.1% 三氟乙酸,0.025 M H3PO4,改变有机添加剂， 可增加柱效 （提高灵敏度）,色谱柱