菊花组织培养.ppt

1、菊花的组织培养,植物的组织培养,是指在人工培养基上，离体培养植物的器官、组织、细胞，并使其生长、增殖、分化以及再生植株的技术。,组织培养：,思考,(一).植物组织培养的基本过程,一、基础知识,1.植物体在个体发育过程中将形成不同的细胞和组织原因是？,细胞分化,2.植物组织培养的原理是什么？,植物细胞具有全能性,1.细胞的分化,概念：,在个体发育中，相同细胞的后代在形态、结构、生理功能上发生稳定性差异的过程 .,特点：,原因：,持久性、稳定性、全能性,基因在特定的时间和空间条件下的选择性表达的结果.,2.细胞的全能性,定义：,生物体的细胞具有使后代细胞形成完整个体的潜能的特性.,原理：,生物体的

2、每一个细胞都包含有该物种所特有的全套遗传物质（全套基因）,10 个,14,200多种,生物体的每一个体细胞都含有该物种所特有的全套遗传物质（全套基因）,基因的选择性表达,植物组织培养的基本过程是怎样的？,离体的植物组织或细胞 (外植体),脱分化,愈伤组织,再分化,胚状体(根、芽),植物体,外植体：从活植物体上切下进行培养的那部分细胞、组织或器官.,脱分化：由高度分化的植物器官、组织或细胞产生愈伤组织的过程，又称去分化。,愈伤组织：离体的植物器官、组织或细胞通过脱分化形成的疏松而无规则的，高度液泡化的呈无定形状态的,未分化的薄壁细胞,2-3周，愈伤组织开始形成。,再分化：愈伤组织继续培养，重新分

3、化成根和芽等器官的过程。,3-5周之后，诱导出的新叶片和芽。,(二)影响植物组织培养的因素,1、外植体的选取,不同植物的组织培养难度 _ 同一种植物的不同组织培养难度_,差别很大,不同,如菊花的组织培养，一般选择_植株茎_。,未开花,上部新萌生的侧枝,对于同一种植物材料，材料的_、 _等也会影响实验结果。,年龄,保存时间的长短,阅读教材，思考影响植物组织培养的因素有哪些？,2、培养基的配制,常用的一种培养基为_,其主要成分包括：,：C、H、O、N、P、K、Ca、Mg、S ：B、Mn、Cu、Zn、Fe、Mo、I、Co _ ：甘氨酸、烟酸、肌醇、维生素、蔗糖等 _ ：生长素、细胞分裂素、赤霉素等,

4、MS培养基,大量元素,微量元素,有机物,植物激素,3、不同植物激素使用顺序和使用量,不同植物激素使用顺序,细胞分裂,细胞不分化,分化频率,不同植物激素使用量,4、环境因素：,不同的植物对各种条件的要求往往 不同 。,如进行菊花的组织培养，一般将 pH控制在_左右； 温度控制在_ ； 并且每天用日光灯照射_ 。,5.8,1822 ,12h,5、消毒,在培养的整个过程中，都需要是一个无菌环境。,1、实验操作流程,制备MS固体培养基,外植体消毒,接 种,培 养,栽 培,移 栽,二、实验操作,2、实验具体操作,（1）.制备MS固体培养基,实验室一般使用_保存的配制好的培养基母液来制备,配制各种母液,配

5、制母液时，大量元素浓缩_ ，微量元素浓缩_ 。常温保存。激素类、维生素类以及用量比较小的有机物可以按照_的质量浓度单独配制母液。用母液配制培养基时，需要根据各种母液的浓缩倍数，计算用量。,1mg/ml,4,10倍,100倍,配制培养基。,按配方称取琼脂、蔗糖以及各种母液，配制MS培养基。,植物激素,在菊花组织培养中，可以不添加_ ，原因是菊花茎段组织培养_ 。,比较容易,灭菌,将分装好的培养基连同其他器械一起进行 _。,高压蒸汽灭菌,此时的组织或细胞为离体的，即细胞所生活的环境为液体有机物营养环境，而不是能体现其整个植物体的光能自养。,高等植物是光能自养型生物，为什么在植物组织培养过程中还需要

6、提供有机物培养基？,思 考,？,（2）.外植体消毒,选取菊花茎段时，要取 _。,流水冲洗,酒精,无菌水,氯化汞,无菌水,消毒流程：,浓度_ 摇动_次 时间_s,浓度_ 时间_min,至少清洗_次 漂净_,生长旺盛的嫩枝,70%,23,67,0.1%,12,3,消毒水,外植体的生理状态是成功进行组织培养的重要条件之一。生长旺盛的嫩枝生理状况好，容易诱导脱分化和再分化。,思 考,？,在选取菊花茎段的时候，为什么要选取生长旺盛的嫩枝？,不是。对外植体进行表面消毒时，既要考虑到消毒效果，又要考虑到植物的耐受能力。,在外植体消毒过程中，是不是强度越大越好，为什么？,思 考,？,（3）.接种,前期准备：用

7、_消毒工作台，点燃酒精灯。所有工作都必须在酒精灯旁进行，器械使用前后都要用_灭菌。,接种操作：插入外植体时_端朝上，每个锥形瓶接种_个外植体。,70的酒精,火焰灼烧,形态学上,68,（4）.培养,接种后的锥形瓶最好放在_中培养。培养期间定期进行_，温度控制在_，并且每天用日光灯光照_h。,无菌箱,1822,12,消毒,在培养过程中，是脱分化、再分化的过程，随着芽和根的形成，就具有了自养的能力，是由细胞到一个个体的演变过程,培养过程中为什么需要进行光照？,思 考,？,（5）.移栽,移栽生根的试管苗之前，应先打开封口膜，在培养间生长几日；然后用流水清洗_，将幼苗移植到_等环境中生活一段时间，进行壮

8、苗。最后进行露天栽培。,根部培养基,消过毒的蛭石或珍珠岩,（6）栽培,幼苗移栽后，每天观察并记录幼苗的生长情况，适时浇水、施肥，直至开花.,植物组织培养所利用的植物材料体积小、抗性差，对培养条件的要求较高。用于植物组织培养的培养基同样适合于某些微生物的生长，如一些细菌、真菌等的生长。而培养物一旦受到微生物的污染，就会导致实验前功尽弃，因此要进行严格的无菌操作。,思 考,？,在植物组织培养的过程中，为什么要进行一系列的消毒、灭菌，并且要求无菌操作？,1、培养基的灭菌（高压蒸汽灭菌） 2、外植体的消毒（酒精、氯化汞） 3、接种的无菌操作（酒精、酒精灯灼烧） 4、无菌箱中的培养； 5、移栽到消过毒的环境中生存一段时间。,在整个操作过程中，是如何来实现无菌环境的？,思 考,？,2. 是否完成了对植物组织的脱分化和再分化 3. 是否进行了统计、对照与记录 4. 生根苗的移栽是否合格,1. 外植体在培养过程中可能会被污染，你认为造成污染的原因有哪些？,培养基灭菌不彻底；外植体消毒不彻底；接种中被杂菌污染；锥形瓶密封性差等。,三、结果分析与评价,一般说来，容易