分子细胞遗传学新进展

1、分子细胞遗传学新进展,传统的细胞遗传学,细胞遗传学主要研究染色体的 亚显微结构和基因活动的关系,细胞周期的阶段,简 介,60年代早期 局限于计算染色体的数目 粗略的将染色体按照大小和着丝粒位置进行区分( groups A to G) 1970年 显带技术的建立 清楚的分辨出46条染色体,细胞遗传学的一般步骤,细胞培养 使细胞停留在分裂中期 低渗的方法使细胞膨大 固定染色体，保留核酸 将细胞滴到玻片上 用显带染色技术进行染色 在荧光显微镜下分析染色体 数20个中期分裂相进行分析 常规研究方法可区分400-600条带 高分辨率研究方法可区分650条带,细胞遗传学技术的步骤,细胞遗传学技术的步骤,细

2、胞遗传技术的步骤,有丝分裂中期的核型分析,染色体组核型分析,G-带 (Giemsa) 富含AT的区域颜色较深 优点 能看到整个基因组 显示每一单个染色体 缺点 分辨率(5-10Mb) 进行细胞培养 其他会用到的核型分析技术 R, Q, C, 和 NOR 带,染色体异常数目改变,三倍体 和 四倍体 非整倍体 +21, +18, +13, XO, XXY, 等,染色体异常结构异常,平衡改变 易位和 倒位 不平衡改变 缺失, 扩增, 环状染色体, 和等臂染色体,倒位,扩增和环形染色体,染色体缺失,缺失 看得见的 识别起来相对容易 微缺失 看不见 识别起来不是很容易,意 义,为什么开展细胞遗传学分析

3、?,(A)产前及产后遗传病,染色体异常的发生机率,出生婴儿 0.6% 先天性智力障碍（MR）患者 23% 先天性心脏病 13% SAB 夫妇 5% 死胎和 围产期死亡胎儿 6.0% 自然流产 (前三个月) 60%,染色体异常在自发性流产中的发生率,唐式综合症在活产中的发生率及与孕妇年龄的关系,新生儿染色体异常发生率,唐氏综合症,21号染色体三体, 95-97% 多余的染色体来自母亲, 唐氏综合症与母亲的年龄有关系, 确切的病因不是很了解. 活产新生儿发病率为1 /800 to 1 /1,100 , 唐氏综合症与文化、种族、社会阶层以及地理区域都没有必然的联系。 智能较正常儿童低，认知困难，发育

4、迟缓。他们也有很特殊的面貌，通常双眼距离较远、眼睛向上斜、鼻梁骨平坦，嘴、牙齿及耳朵均细小。肌张力低。,Turner 综合症,1个x染色体的全部或者部分丢失 ，只发生在女性。 是最常见的染色体异常导致的疾病 ( 活产女性新生儿发病率大约为 1 / 2500 ) 身材矮小、卵巢不发育、性幼稚、 蹼颈、 肾脏和甲状腺有问题, 骨骼畸形等 生长激素治疗, 雌激素替代治疗等,(B)白血病及实体瘤,肿瘤的分子生物学基础 1、癌基因 2、抑癌基因,基因功能与肿瘤,肿瘤中常见的癌基因种类,肿瘤中常见的癌基因扩增,常见的抑癌基因,白血病及淋巴瘤中常见的基因改变,基因组大小和分辨率,分子细胞遗传学 荧光原位杂交

5、技术 (FISH)多色 FISH (SKY 和 MFISH）比较基因组杂交 (CGH）基因微阵列 (aCGH),荧光原位杂交技术(FISH),荧光原位杂交（Fluorescence in situ Hybridization，FISH）,基本原理：应用荧光染料标记探针DNA，变性成单链后与变性后的染色体或细胞核靶DNA杂交，在荧光显微镜下观察并记录结果。,生命科学中的“钓鱼” 技术,centromere,telomere subtelomere,locus specific,whole chromosome paint,FISH技术的特点,操作简便，探针标记后稳定，可与多种技术结合， 可成功地

6、帮助细胞遗传学家做出回顾性分析,方法敏感，能迅速得到结果，24小时就可以完成检测,人员培训较快,标本来源丰富，间期细胞，分裂中期细胞、分化或未分 化细胞及死亡或存活的细胞皆可以被检测,FISH在白血病及实体瘤中的应用,（1）诊断,宫颈癌是常见的妇科恶性肿瘤之一，发病率在女性恶性肿瘤中居第二位，仅次于乳腺癌。据世界范围统计，每年估计有46.6 万左右的宫颈癌新发病例，其中80%的病例发生在发展中国家。近几年来，据一些国家和地区报道，宫颈癌的发病和死亡大致稳定，但局部有增长的趋势，特别是宫颈癌的年轻病例增加，宫颈腺癌的发病也趋于年轻化。在我国部分地区近年也出现了宫颈癌病人年纪年轻化趋势的报道,行为

7、危险因素 性生活过早、多个性伴侣、多孕多产、社会经济地位低下、营养不良及性混乱等 生物学因素 细菌、病毒和衣原体等各种微生物的感染,子宫颈癌,细胞学分级,鳞状细胞癌为主，约占95；腺癌仅为5左右；腺鳞癌少见，但恶性度最高，预后最差。,传统的宫颈癌检查及诊断程序,Cervical Pap screening,Normal,ASC-US,ASC-H,LSIL,HSIL,Repeat Pap 4 to 6 months,or,HPV Testing,HPV negative (high-risk type),HPV positive (high-risk type),Repeat Pap 12 mo

8、nths,Colposcopy,No lesion seen,Cervical pre-cancer or cancer,Repeat Pap at 6, 12 months, or HPV testing at 12 months,Treat,传统巴氏细胞学涂片14)(p16;q32); t(14;16)(q32;q23), 17p13- ( 24.7 个月) 预后中等: 13q14- (42.3 个月) 预后好: 其他 (50.5 个月),成人急性淋巴细胞性白血病的预后分类 Favorable risk ( median DFS 3 years) Normal or isolated 9p

9、/p15-p16 deletions Intermediate risk ( median DFS 19 months) 6q deletions, hyperdiploidy, and miscellaneous aberrations Unfavorable risk (median DFS 7 months) t(9;22)/BCR-ABL, t(4;11)/MLL-AF4, and t(1;19)/E2A-PBX1,Favorable risk +4,+10, and +17 or t(12;21)(TEL/AML1) Unfavorable risk 11q23(MLL) rearrangements Very unfavorable risk Hypodiploidy( 45 chrom