第07章--放射免疫试验

1、临床免疫学检验技术,第七章 放射免疫试验,李会强,引言,放射免疫试验以放射性核素为特征，通过测定放射性强度评估抗原-抗体反应的强度，从而实现对待测物质的定量（或定性）分析。放射免疫试验将放射性核素的高灵敏性与抗原-抗体间的高特异性结合于一体，具有较高的分析敏感性和分析特异性。,引言,放射免疫试验创立了两种重要标记免疫分析模式即竞争性免疫分析（放射免疫分析方法）和非竞争性免疫分析（免疫放射分析方法），同时，也创立了固相吸附分离方法，以及剂量-反应曲线的数学处理模型，为酶免疫试验和发光免疫试验奠定理论和实践基础。,本章目录,第一节 放射免疫分析方法 第二节 免疫放射分析方法 第三节 两种方法比较

2、第四节 临床应用 第五节 关键因素,重点提示,放射免疫分析方法（原理） 免疫放射分析方法（原理）,第一节 放射免疫分析方法,相关知识,放射免疫分析方法 radioimmunoassay, RIA； 首个用于超微量物质定量的标记免疫分析技术； 发明人： Yalow and Berson 1959,一、分析原理,放射免疫分析方法 竞争性免疫分析模式 标记抗原和待检抗原同质 分析体系中的抗体限量,分析原理,图：放射免疫分析方法原理示意图（1）,图：放射免疫分析方法原理示意图（2）,技术（操作）要点,抗原抗体反应 标本与试剂混合并温浴 分离技术 分离结合标记物与游离标记物 发射性测量 数据处理,二、抗

3、原-抗体反应,竞争模式 平衡法 非平衡法 温浴条件 温度 酸碱度 基质,图：非平衡法,三、分离技术,非均相免疫分析 结合标记物（Bind，B） 游离标记物（Free，F） 分离方法 聚乙二醇沉淀法 双抗体法,分离技术,图：聚乙二醇-双抗体法( 特异性和低成本）,四、放射性测量和数据处理,抗原-抗体（温浴） 分离结合标记物 放射性测量 数据处理,放射性测量,放射性核素 125I 射线 测量仪器 采用计数器,图：标准曲线,实例：,第二节 免疫放射分析方法,相关知识,免疫放射分析 immunoradiometric assay， IRMA 非竞争性免疫分析 发明人：Miles and Hales 1

4、968,一、分析原理（1）,免疫放射分析 单位点法 适合测定小分子抗原 双位点法 适合测定小分子抗原,一、分析原理（2）,图：免疫放射分析（单位点法）测定原理示意图,一、分析原理（3）,图：免疫放射分析（双位点法）测定原理示意图,一、分析原理（4）,双位点法 一对互相匹配的抗体 捕获抗体（与固相载体连接） 检测抗体（标记放射性核素） 非竞争性免疫分析模式 体系中抗体保持过量,技术要点,抗原抗体反应 B、F的分离 放射性测量 数据处理,二、分离技术,固相吸附分离法 固相材料 捕获抗体将结合标记物捕获于固相材料表面，而游离标记物分布于液相中，经洗涤去除液相中的游离标记物。,固相吸附技术,固相吸附技

5、术,包被 Coating 将捕获抗体吸附于固相材料表面的过程 封闭 blocking 用高溶度蛋白溶液封闭空白结合位点,数据处理（实例）,图：标准曲线,第三节 两种方法的比较,RIA & IRMA,RIA & IRMA,放射免疫分析 液相状态的抗原与抗体反应 免疫放射分析 固相表面与液相状态之间的抗原抗体反应 抗体固相化对抗体结构和功能的影响,第四节 临床应用,历史地位,方法建立 20世纪60年代 快速发展 20世纪80年代90年代,临床应用,体内激素水平 病原体抗原或抗体 肿瘤标志物 药物测定,临床应用,现存检测项目 反三碘甲状腺原氨酸（分子量651Da）、胃泌素（分子量2098Da）、醛固

6、酮（分子量364Da）、血管紧张素-I（分子量1200Da）和血管紧张素-（分子量1046Da）,第五节 关键因素,在放射免疫试验中被测物质浓度是根据标准曲线计算得来的。标准曲线的精确度直接影响测定结果的精确度。获得准确测定结果不仅需要高质量的检测试剂，同时也需要尽可能地从实验过程中把关，需要严格和精确的操作。,关键因素,试剂盒质量 操作过程 测量过程 曲线拟合,关键因素,试剂盒 标准品 抗体 标记物,本章小结（1）,放射免疫分析以标记抗原为特点，为竞争性免疫分析模式，基于标记抗原和非标记抗原对同一抗体有相同亲合力，常采用PEG-第二抗体对B或F进行分离。放射免疫分析多用于小分子半抗原（甾体激素）的定量分析。,本章小结（2）,免疫放射分析以标记抗体为特点，为非竞争性免疫分析模式，以