Gen-Probe结核分支杆菌检测仪介绍(Bruce)

1、,gen-probe分枝杆菌快速检测仪,分枝杆菌 :用gen-probe 产品检测程序和时间,gen-probe检测分枝杆菌试剂类型,扩增+杂交检测结核分枝杆菌复合菌: amplified mtd ( gen-probe) 临床痰标本(涂阳或涂阴) 杂交检测分枝杆菌: accuprobe gen-probe 培养阳性标本 (菌落或肉汤),mtd (amplified mycobacterium tuberculosis direct) 检测,结核分枝杆菌复合菌: m.tuberculosis 结核分枝杆菌 m.bovis 牛分枝杆菌 m.bovis bcg 牛分枝杆菌bcg m.african

2、um 非洲分枝杆菌 m.microti 田鼠分枝杆菌 m.canetti 卡氏分枝杆菌,gen-probe mtd检测,以16s rrna 为靶核酸 tma ：转录介导扩增 hpa：杂交保护分析,rna与 dna,dna 非常稳定，在死亡生物内也可存在 双链结构 rna 只存在于活细胞 非常脆弱 (rna容易受破坏) 单链结构,结核菌核酸,rna是dna的4-5倍 rrna占80%,gen-probe 扩增,3 个主要步骤 标本处理 释放 rrna tma rrna 扩增物 hpa 检测扩增物,超声波裂解,样品,细胞溶解,目标 rrna 释放,tma转录介导扩增,2条引物： 2种酶： *逆转录

3、酶(双功能:逆转录和rnase h酶) (rnase h：一种核糖核酸内切酶，特异性水解dna：rna杂交链上rna链的磷酸二酯键，产生5核苷酸，该酶对单链核酸、双链dna或双链rna没有作用) *rna聚合酶 等温扩增：42,逆转录酶,tma原理,敏 感,10 000 拷贝 rrna,dna,rna 聚合酶,(eg : e.coli),扩增产物检测：hpa技术,hpa：杂交保护分析技术 标记丫啶酯（acridinium ester）的dna 探针与 rna 扩增产物杂交，形成dna：rna双螺旋结构保护荧光物丫啶酯不被选择试剂淬灭（水解）。,hpa 步骤,丫啶酯标记的特异 dna探针与rna

4、扩增物杂交 使用生化水解方法，分离杂交及未杂交探针 检测：化学发光检测 试剂1：0.001n硝酸中含0.1%过氧化氢； 试剂2：1n naoh,杂 交,60,杂交,rrna,探针,杂交温度的影响,60,61,59,非特异结合,无杂交,假阴性高,假阳性高,选 择,60,选择试剂,ch3,n+,o,o,r,h2o2 / oh-,light,检 测,敏 感 度 比 较,化学发光10-19 mole 辐射同位素 10-18 mole 荧光 10-12 mole 比色 10-9 mole,总 结,靶核酸: rrna 等温扩增，2种酶是关键（逆转录酶(rnase h)、rna 聚合酶） 扩增原理：tma（

5、转录介导扩增） 液相杂交：hpa（杂交保护分析） 化学发光法：检测杂交信号,mtd 方法,step1：标本预处理 超声波降解标本 step2：扩增 (tma) 扩增试剂, 石腊油，经过预处理的标本-消化 95 , 15 分钟，水浴 42 , 5 分钟 -加入酶试剂，扩增 42 , 30 分钟 step3：探测 ( hpa) 加入探针试剂-杂交 60, 15 分钟-选择 60 , 15 分钟-在发光仪读数,扩增 : tma 加入试管 : 扩增试剂, 石腊油 经过预处理的标本 消化 95 , 15 分钟 水浴 42 , 5 分钟 加入 酶试剂 扩增 42 , 30 分钟,标本预处理 : 准备并（超）声波