chap维生素类药物的分析.ppt

1、学习要求 掌握维生素A、维生素B、维生素C、维生素E 的化学结构、理化性质以及与分析方法间的关 系，它们的专属鉴别反应、主要的含量测定方 法与原理。 熟悉维生素A、维生素B、维生素C、维生素E 的有关物质、检查方法与原理。 了解维生素D性质和分析特点。,维生素：是维持人体正常代谢机能所必需 的微量营养物质。 脂溶性：VitA、D2、D3、 E、K1 等 水溶性：VitB族(B1、B2、B6、B12)、VitC、 叶酸、烟酸、烟酰胺,维生素的共同特点： 这些化合物或其前体化合物都在天然食物中存在；它们不能供给机体热能。也不是构成组织的基本原料，主要功用是通过作为辅酶的成份调节代谢过程，需要量极小

2、；它们一般在体内不能合成，或合成量不能满足生理需要，必须经常从食物中摄取；长期缺乏任何一种维生素都会导致相应的疾病。,维生素缺乏导致的病症,维生素A缺乏夜盲症 、干眼病 （动物内脏、富含胡萝卜素的蔬菜水果） 维生素B1缺乏脚气病 （谷类、豆类、坚果类、瘦猪肉及动物内脏 ） 维生素C缺乏坏血病 （新鲜蔬菜和水果） 维生素D缺乏小儿佝偻病与成人骨软化病 (足够的日光 、海鱼、动物内脏、蛋黄) 维生素E缺乏一般不缺乏（体内驻留时间长）。 （植物油）,R : -H 维生素A醇 -COCH3 维生素A醋酸酯 -COC15H31 维生素A棕榈酸酯,第一节 维生素A,一、结构与性质,环己烯,共轭多烯醇,结构

3、特点：,（1）环己烯+共轭多烯侧链； （2）天然VA侧链为全反式； （3）天然来源主要是鱼肝油，为醋酸酯，棕榈酸酯等,目前多由人工合成。,性质： 1、紫外吸收 具有共轭多烯侧链紫外吸收。 最大吸收波长在325328nm，随VA存在状态以及所用的溶剂，最大吸收波长的位置有所不同。 有干扰物质存在（VitA2、 VitA3、鲸醇）。,VitA2,VitA3,鲸醇,脱水,去氢,二聚体,2、 不稳定性：共轭多烯侧链易被氧化，或有金属离子存在时氧化,环氧化物,VitA醛,VitA酸,CHCl3,3. 与三氯化锑发生呈色反应（鉴别、含量测定）,4. 溶解性：不溶于水，易溶于有机溶剂和植物 油等。,条件：无

4、水、无醇,CHCl3,二、鉴别试验,1. 三氯化锑反应,蓝色,紫红,注意事项： 无水水可使三氯化锑水解成氯化氧锑 （SbOCl）白色沉淀，干扰比色。 无醇乙醇可以和碳正离子作用使其正电 荷消失。,max326nm 一个吸收峰,max350390nm 三个吸收峰,2、UV法（BP 2000）,去水VitA （VitA3）,VitA,3、TLC法 BP 杂质对照品法 显色剂：三氯化锑 USP 显色剂：磷钼酸 规定斑点颜色和Rf值,三、含量测定 UV法:三点校正法（ChP 2010 第一法） 三氯化锑比色法 HPLC法（ChP 2010 第二法）,1、为何要采用三点校正法？ 维生素A原料药中常混有杂

5、质，如维生素A2、维生素A3等，这些杂质在维生素A的最大吸收波长附近有吸收，采用三点校正法可以消除这些杂质的干扰。 2、测定原理 1）在310340nm范围内，杂质吸收呈一直线，且随波长的增大吸收度下降。 2）物质对光吸收呈加和性。,三点校正法,3、波长的选择： 一点选在维生素A的最大吸收波长处（1），其它两点选在1的两侧。 第一法（等波长差法） 波长为1=328nm、2=316nm、3=340nm； 测定对象：VA醋酸酯 第二法（等吸收比法） 波长为1=325nm、2=310nm、3=334nm； 测定对象：VA醇,4、测定方法 首先判断用哪个吸收度(A328 or A328(校正)）进行含

6、量计算。 第一法：供试液浓度为915IU/ml，溶剂为环己烷，在300、316、328、340、360nm五个波长处测定吸收度。 1）最大吸收波长在326329nm之间，计算吸收度比值Ai /A328，并与规定值相减，差值不超过0.02，则用A328计算含量。,2）如果最大吸收波长在326329nm之间，5个波长下的差值有一个或几个超过0.02，这时先计算A328（校正）：,A328（校正）=3.52（2 A328 - A316 - A340）,A328（校正）- A328 -100% A328,再计算,若所得的数值在3%，则仍用A328计算含量； 若所得的数值在-15%-3%之间，则用A32

7、8（校正）计算含量； 若所得的数值小于-15%或大于+3%，或最大吸收波长不在326329nm之间，则应采用第二法测定。,三点校正法第一法步骤小结： ：最大吸收波长是否在326-329nm间 符合- ，不符合第二法 ： 测定指定波长吸收度 ：计算（A指定波长/A328）比值,并与规定值比较 符合- ，不符合 ： 计算校正吸收度，并与实测值比较，判断是否需要校正 ：计算328nm处样品的E 1cm1% ：计算效价及标示量的百分含量,维生素A醋酸酯的换算：IU/g = E 1cm1% 1900,IU/丸 标示量% = 100% 标示量,第二法 （皂化法，适用于维生素A醇）,第一法无法消除杂质干扰时

8、用此法,5、讨论 1）维生素A醋酸酯的吸收度校正公式是用直线方程式法推导而来：维生素A醇的吸收度校正公式是用相似三角形法推导而来。 2）在应用三点校正法时，除其中一点在最大吸收波长处测定外，其余两点均在最大吸收峰的两侧进行测定。如果仪器波长精度不准确时，会产生较大误差。因此，在测定前务必要校正波长，并可用全反式维生素A进行测定，比较测定结果和比值是否与对照品相符合，以进一步核对仪器波长是否准确。测定的样品应不得少于两份。 3）中国药典（2010年版）收载的维生素A软胶囊采用三点校正法测定。,VitAD胶丸中VitA的含量测定 精密称取本品(规格10000VitAIU/丸)装量差异项下（平均装量

9、0.08262g/丸）的内容物 0.2399g 至250ml量瓶中，用环己烷稀释至刻度，摇匀；精密量取2.0ml，置另一20 ml量瓶中，用环己烷稀释至刻度，摇匀。以环己烷为空白，测定最大吸收波长为328nm，并在下列波长处测得吸收度，求本品中维生素A的含量。,A300 ：0.354 A316 ：0.561 A328 ：0.628 A340 ：0.523 A360 ：0.216,A300 /A328 ：0.555 A316/A328 ：0.907 A328/A328 ：1.000 A340/A328 ：0.811 A360/A328 ：0.299,规定比值,A300 /A328 ：0.564

10、A316/A328 ：0.893 A328/A328 ：1.000 A340/A328 ：0.833 A360/A328 ：0.344,0.555 0.907 1.000 0.811 0.299,+ 0.01 0.01 0 + 0.02 + 0.04, ,= = = = =,优点：简便、快速 缺点：呈色不稳定 （510s内） 水分干扰（反应需要无水条件） 专属性差（有关物质的干扰） 三氯化锑有腐蚀性（注意安全）,max 618nm620nm,2、 三氯化锑比色法(标准曲线法),3、HPLC法（ChP2010新增的分析方法） 适用于维生素A醋酸酯原料及其制剂中维生 素A的含量测定。,第二节 维生

11、素E,一、结构与性质 名称：消旋生育酚醋酸酯 母核：苯骈二氢吡喃衍生物 苯环上有一乙酰化的酚羟基 侧链：脂肪烷烃,化学性质： 1、易溶于有机溶剂，不溶于水 2、UV:284nm(乙醇) 3、酯键易水解 4、对氧敏感，易氧化,橙红色,二、鉴别,1. 硝酸反应（chp2010）,取本品约30mg，加无水乙醇10ml溶解后，加硝酸2ml，摇匀，在75加热15分钟，溶液应显橙红色。,生育红（橙红色）,生育酚,HNO3,强氧化剂,2.三氯化铁联吡啶反应,红色,生育酚,对-生育醌,弱氧化剂,3. UV法,284nm,254nm,4. TLC法,薄层板 硅胶G,展开剂 环己烷 -乙醚（4 ：1）,显色剂 硫

12、酸（105 5）,VitE Rf = 0.7,三、检查：游离生育酚,硫酸铈滴定液（0.01mol/L） 指示剂：二苯胺（亮黄灰紫）,2. 试剂,1. 原理：利用游离生育酚的还原性，将硫酸铈还原成硫酸亚铈,3、方法,取本品0.10g，加无水乙醇5ml溶解后，加二苯胺试液1滴，用硫酸铈液（0.01mol/L）滴定，消耗硫酸铈液（0.01mol/L）不得过 1.0ml。,四、含量测定,1. GC法（ChP2010）,载气N2 固定液硅酮（OV-17） 担体硅藻土或高分子多孔小球 柱温265 检测器FID 内标正三十二烷,色 谱 条 件,适用性试验,n 500， R2,2、JP-RP-HPLC法,样品

13、 dl生育酚 固定相十八烷基硅烷键合硅胶 流动相甲醇-水（49 ：1） 检测波长292nm R2.6 RSD0.8%,色 谱 条 件,原理：利用生育酚的易氧化性,指示剂：二苯胺（亮黄灰紫）,3、铈量法,氨基嘧啶环CH2噻唑环(季铵碱),Cl- HCl,第四节 维生素B1,一、结构与性质,3. 硫色素反应,4. 碱性：嘧啶环 伯氨，噻唑环 季铵,可与酸成盐 与生物碱 含量测定 非水碱量法,1. 溶解性：易溶于水，水溶液呈酸性 2. UV:246nm(盐酸液),1. 硫色素反应（维生素B1专属反应）,二、鉴别试验,H+,H+,2. 沉淀反应,H+,3、硝酸铅反应,4、氯化物反应,三、含量测定,1.

14、 非水溶液滴定法（ChP2010）,喹那啶红亚甲蓝 （紫红天蓝）,加入醋酸汞的目的消除氢卤酸盐对非水滴定的干扰。,2. UV法,246nm,3. 硫色素荧光法,NaOH,自学-维生素D: 了解杂质检查中麦角甾醇的检查； 2. 初步掌握正相高效液相色谱法的应用。,L抗坏血酸,第五节 维生素C,一、结构与性质,1. 强还原性：烯二醇结构,50,2. 结构与糖类相似，具糖的性质- 糖类的显色反应,3. UV特征(243nm),4. 溶解性：易溶于水，水溶液呈酸性。,5.酸性：一元酸,C3OH，pKa = 4.17,C2OH，pKa = 11.57,6. 水解反应：与碱反应,二、鉴别试验,1. 与氧化

15、剂的反应,1) 与AgNO3反应(ChP2010),2)与2，6 - 二氯靛酚反应(ChP2010),氧化型,玫瑰红色,（还原型）,3) 与碱性酒石酸铜反应（USP）,4) 与KMnO4反应,2. 糖类的反应,糠醛：,3. UV,0.01mol/L HCL液中，max243nm,指示剂：淀粉指示液,三、含量测定 1. 碘量法（ChP2010）,取本品约0.2g，精密称定，加新沸过的冷水100ml与稀醋酸10ml使溶解，加淀粉指示液1ml，立即用碘滴定液（0.1mol/L）滴定，至溶液显蓝色，在30秒内不褪。每1ml碘滴定液(0.1mol/L)相当于8.806mg的C6H8O6,酸性环境：减慢V

16、itC被O2氧化速度 新沸冷H2O：赶走水中O2 立即滴定：减少O2的干扰 附加剂干扰的排除：,片剂 滑石粉 过滤,注射剂 抗氧剂 丙酮,Na2SO3 NaHSO3 Na2S2O3 Na2S2O5,2. 2，6 - 二氯靛酚滴定法,自身指示剂 终点法,（1）酸性环境（HPO3-HAc）：,稳定VitC,（2）快速滴定（2min内 ）：,防止其他还原性物质干扰,（3）剩余比色测定,（4）缺点,需经常标定,贮存一周,干扰多 氧化力较强,（5）专属性比碘量法高，多用于维生素C 制剂的分析。,不稳定,在三氯醋酸或盐酸存在下，经水解、脱羧、失水后，加入吡咯即产生蓝色产物的药物应是 A. 氯氮卓 B. 维生素A C. 普鲁卡因 D. 盐酸吗啡 E. 维生素C,习 题,中国药典（2005年版）采用以下何法测定维生 素E含量 A. 酸碱滴定法 B. 氧化还原法 C. 紫外分光光度法 D. 气相色谱法 E. 非水滴定法,下列药物的碱性溶液，加入铁氰化