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文档简介

1、第6章 蛋白质和DNA技术章末复习提升课蛋白质和DNA技术聚丙烯酰胺凝胶的优点聚丙烯酰胺凝胶电泳是以聚丙烯酰胺凝胶作为支持物的电泳方法,其优点如下:1聚丙烯酰胺没有或很少带有离子的侧基,因而其凝胶电泳作用比较小,不易和样品相互作用。2可以根据需分离物质的分子大小,选择合适的凝胶成分,使之既有适宜的空隙度,又有比较好的机械性能。3在一定浓度范围内聚丙烯酰胺对热稳定。凝胶无色透明,易观察,可用检测仪直接测定。PCR技术的基本原理类似于DNA的天然复制过程,其特异性依赖于与靶序列两端互补的引物。PCR由高温变性低温复性中温延伸三个基本反应步骤构成: 1高温变性:模板DNA经加热至95 左右,一定时间

2、后,使模板DNA双链或经PCR扩增形成的双链DNA解旋,使之成为单链,以便它与引物结合,为下轮循环作准备。2低温复性:模板DNA经加热变性成单链后,温度降至55 左右,引物与模板DNA单链的互补序列配对结合。3中温延伸:DNA模板引物结合物在耐高温的DNA聚合酶的作用下,以四种脱氧核苷酸为原料,按碱基互补配对与半保留复制原理,合成一条新的与模板DNA链互补的半保留复制链,重复循环高温变性低温复性中温延伸三个过程,就可获得更多的“半保留复制链”,而且这种新链又成为下次循环的模板。章末综合测评(六)(时间:45分钟满分:100分)一、选择题(每小题6分,共60分)1下列叙述正确的是()A蛋白质中含

3、有游离的氨基,是碱性电解质B蛋白质中含有游离的羧基,是酸性电解质C蛋白质在电场中可以向与其自身所带电荷相同的电极方向移动D蛋白质在电场中可以向与其自身所带电荷相反的电极方向移动【解析】电泳时,蛋白质会在电场作用下向与其自身所带电荷相反的电极方向移动。【答案】D2在哪项温度范围内,DNA的双螺旋结构解开()A10 20 B80 100 C20 30 D40 60 【解析】蛋白质大多不能忍受60 80 的高温,而DNA在80 以上才会变性。【答案】B3在PCR实验操作中,下列说法不正确的是()A在微量离心管中添加各种试剂时,只需一个枪头B离心管的盖子一定要盖严,防止液体外溢C用手轻弹离心管壁的目的

4、是使反应液充分混合D离心的目的是使反应液集中在离心管底部,提高反应效率【解析】在微量离心管中添加各种试剂时,每吸取一种试剂后,移液管上的枪头必须更换,确保实验的准确性;离心管的盖子一定要盖严,防止实验中脱落或液体外溢;离心10 s的目的是使反应液集中在离心管底部,提高反应效率。【答案】A4在PCR扩增实验中,引物是很重要的。下列属于引物特点的是()引物长度一般是80100个碱基对(bp)为宜DNA聚合酶能从一端延伸DNA链引物是一小段DNA或RNA引物能与DNA母链的一段碱基序列互补配对A BC D【解析】引物是一小段DNA或RNA片段,可以和DNA母链的一段碱基序列互补配对,使DNA聚合酶可

5、以延伸DNA分子。【答案】B5DNA的复制需要引物,其主要原因是()A可加快DNA的复制速度B引物可与DNA母链通过碱基互补配对结合C引物的5端有助于DNA聚合酶延伸DNA链DDNA聚合酶只能从3端延伸DNA链【解析】DNA复制需要DNA聚合酶的作用,而DNA聚合酶只能在原有的核苷酸链的3端继续添加脱氧核苷酸。【答案】D6下列操作过程的叙述中错误的是()APCR实验中使用的微量离心管、枪头、缓冲液以及蒸馏水等在使用前必须进行高压灭菌B使微量离心管内的反应液混合均匀的方法是用手指轻轻弹击管壁C检测PCR扩增效果时不必设置对照D在微量离心管中添加反应成分时,每吸取一种试剂后,取液器上的枪头都必须更

6、换【解析】检测PCR扩增效果时,必需设置对照实验,否则无法将分光光度计读数调零。【答案】C7下列有关PCR的描述不正确的是()A是一种酶促反应B引物决定了扩增的特异性CPCR反应中的目的片段一般以2n的方式积累D扩增对象是氨基酸序列 【解析】PCR是一种体外迅速扩增DNA片段的技术,它以极少量的DNA为模板,以四种脱氧核苷酸为原料,在引物作用下使耐高温的DNA聚合酶从引物的3端连接脱氧核苷酸,短时间内迅速复制上百万份的DNA拷贝,其扩增产量为y2n,y代表DNA片段扩增后的理论拷贝数,n代表循环次数;在扩增过程中,被扩增的是DNA序列,而不是氨基酸序列,因此D错误。【答案】D8“X基因”是DN

7、A分子上一个有遗传效应的片段,若要用PCR技术特异性地拷贝“X基因”,需在PCR反应中加入两种引物,两种引物及其与模板链的结合位置如图1所示。经4轮循环后产物中有五种不同的DNA分子,如图2所示,其中第种DNA分子有几个()A2B4 C6D8【解析】PCR技术扩增时,由两种引物决定所扩增的片段的特定序列,上一次循环的产物为下一次循环的模板。第一次循环形成和,第二次循环形成、四个DNA,以此类推4次循环后共形成16个DNA,其中、各一个,、各三个,共8个。【答案】D9PCR技术具有广泛的用途,下列不需使用该技术的是()A基因克隆 B遗传病诊断C组织培养 D亲子鉴定【解析】PCR技术广泛应用于基因

8、克隆、基因序列分析、遗传病诊断、古生物学研究以及刑侦破案、亲子鉴定等诸多方面,但组织培养不需要PCR技术。【答案】C10PCR技术是一种迅速扩增DNA片段的技术,对PCR过程的叙述,下列说法有误的一项是()A将反应体系加热至95 ,使模板DNA两条链之间的氢键断裂,变成单链DNA,作为互补链聚合反应的模板,这个过程称为变性B将反应体系的温度降至55 ,使两种引物分别与模板DNA链3端的互补序列互补配对,这个过程称为复性C将反应体系的温度升至72 ,在耐高温的DNA聚合酶催化下,将与模板互补的单个核苷酸加到引物上,使DNA链延伸,产生一条与模板链互补的DNA链,这个过程称为延伸D上述三个反应完成

9、后,一个DNA分子就变成了两个DNA分子,随着重复次数的增多,DNA分子就以2n的形式增加,且PCR的反应过程都是在PCR扩增仪中完成的【解析】变性、复性、延伸三个步骤构成了PCR过程的一个循环,重复这三步操作,DNA片段便呈2的指数即2n的形式增加。在1 h2 h内重复2530次循环,扩增的DNA片段数可增至106107倍以上。【答案】D二、非选择题(共40分)11(20分)随着分子生物学的发展,人们越来越重视对蛋白质的研究。测定蛋白质的相对分子质量是研究蛋白质的一项重要技术,常用的方法是凝胶(由多孔性网状物构成的颗粒,其孔能让小分子物质进出)过滤法,即在一根垂直的玻璃管中装满凝胶,然后在其

10、上端加入蛋白质混合液并用缓冲液进行洗脱。根据各种蛋白质洗脱的先后顺序可以比较它们的相对分子质量大小。不同蛋白质相对分子质量大小与洗脱液体积的关系如图所示,请回答下列问题:(1)把含有肌红蛋白(相对分子质量为16 900)、血清蛋白(相对分子质量为68 500)、牛乳球蛋白(相对分子质量为35 000)、牛胰岛素(相对分子质量为5 700)的蛋白质混合液进行凝胶过滤,最先洗脱出来的是_。(2)某蛋白质食品放置时间过久会腐败变臭,这是由于该蛋白质中_元素被细菌脱去而造成的。(3)该蛋白质若在细胞内,与某些RNA有相同的功能:都能作为_调节新陈代谢。(4)若由凝胶过滤法测得某一由2条肽链构成的蛋白质

11、的相对分子质量为m,且已知氨基酸的平均相对分子质量为n,则该蛋白质是由_个氨基酸经脱水缩合而成的。【解析】(1)凝胶过滤又称分子筛层析。层析结果是大分子物质首先被洗脱出来,而小分子物质后被洗脱出来,故血清蛋白(相对分子质量为68 500)最先洗脱出来。(2)某蛋白质食品放置时间过久会腐败变臭是由于蛋白质中的S元素被细菌脱出形成H2S而造成的。(3)酶的化学本质有蛋白质和RNA两种类型。(4)设氨基酸数目为x,据题意可列式为:mxn18(x2),解得x(m36)/(n18)。【答案】(1)血清蛋白(2)S(3)酶(4)(m36)/(n18)12(20分)玉米是重要的粮食作物,经深加工可生产酒精、

12、玉米胚芽油和果糖等。流程如下: (1)玉米秸秆中的纤维素经充分水解后的产物可被酵母菌利用发酵生产酒精。培养酵母菌时,该水解产物为酵母菌的生长提供_。发酵过程中检测酵母菌数量可采用_法或稀释涂布平板法计数。(2)玉米胚芽油不易挥发,宜选用_法或_法从玉米胚芽中提取。(3)玉米淀粉经酶解形成的葡萄糖可在葡萄糖异构酶的作用下转化成果糖。利用_技术可使葡萄糖异构酶重复利用,从而降低生产成本。(4)利用PCR技术扩增葡萄糖异构酶基因时,需用耐高温的_催化。PCR一般要经历三十次以上的循环,每次循环包括变性、_和_三步。【解析】(1)玉米秸秆中的纤维素经充分水解后的产物是葡萄糖,葡萄糖可为酵母菌的生长提供碳源。发酵过程中检测酵母菌数量可采用显微镜直接计数法或稀释涂布平板法计数。(2)不易挥发的玉米胚芽油宜选用压榨法和萃取法从玉米胚芽中提取。(3)固定化酶技术是利用物

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