xx本科医学毕业论文范文

1、xx本科医学毕业论文范文 红芪(Radix Hedysari)，为豆科岩黄芪属植物多序岩黄芪Hedysarumpolybotrys Hand.-Mazz的干燥根，为甘肃特产名贵药材，在临床上主要用于补气固表， 利尿托毒， 排脓， 敛疮生肌。红芪中含有氨基酸、有机酸、-谷醇、红芪多糖、微量元素等众多的生物活性物质1。近年来研究发现，红芪多糖的活性成分具有增强机体免疫力、抗肿瘤、抗衰老、治疗糖尿病等作用1，2。特别是我们近几年的研究发现，经 7%乙醇沉淀部分药理作用尤为明显。由于多糖为大分子化合物，分离纯化比较困难，而蛋白质的脱除是后期结构鉴定的关键之一，为了提高多糖的得率、纯度及活性，本实验对这

2、部分多糖进行了脱蛋白方法的研究，结合TLC、GC、IR等方法对 HPS-2 的结构进行了初步的分析，以期为红芪多糖的进一步研究提供理论基础。 红芪，购自甘肃武都;牛血清白蛋白、考马斯亮蓝 G-25(西安周鼎国生物技术有限责任公司);单糖对照品(中国药品生物制品检定所);Sephadex G-25(上海长征制药厂);硅胶 G(青岛海洋化工厂);其它试剂均为分析纯。 CR22G 型离心机(日本日立);UV-17 型紫外仪(日本岛津);GC-Clarus 5型气相色谱仪(美国 PerkinElmer公司);红外光谱仪(Nicolet NEXUS 67);BS-1A 自动部分收集器、HL-2 恒流泵(

3、上海沪西分析仪器厂有限公司);美国Waters6型高效液相色谱仪，配 Waters2414型示差折光检测器。 2.1 红芪多糖的提取纯化路线其流程如下。 2.1.1 提取红芪药材粉碎超声脱脂热水提取3次合并提取液减压浓缩后离心取上清液乙醇沉淀有机溶剂洗剂透析减压浓缩冷冻干燥得粗多糖 HPS。 2.1.2 纯化粗多糖液脱蛋白、色素Sephadex G-25柱层析洗脱液透析浓缩冷冻干燥精制红芪多糖 HPS-2。 2.2 蛋白质和多糖含量的测定蛋白质含量测定采用考马氏亮蓝法3，多糖含量采用苯酚-硫酸法4。 2.3 脱蛋白方法 称取一定量的粗多糖，加入适量蒸馏水，6加热溶解，备用。本实验采用 3种脱蛋

4、白的方法。 2.3.1 Sevag法取粗多糖溶液，加入等体积的氯仿-正丁醇(V/V为 41)试剂，混合振摇 3 min，离心除去沉淀，透析后醇沉，冷冻干燥，即得脱蛋白多糖。 2.3.2 三氯乙酸法取粗多糖溶液，加入多糖溶液体积 .1倍量的三氯乙酸，低温(4)剧烈振摇 3 min，离心除去沉淀，透析后醇沉，冷冻干燥，即得脱蛋白多糖。 2.3.3 三氯乙酸-正丁醇法 取粗多糖溶液，加入等体积的三氯乙酸-正丁醇(V/V为 11)试剂，振荡 1 min，静置分层，收集下层水溶液，透析后醇沉，冷冻干燥，即得脱蛋白多糖。 2.4 红芪多糖的精制将一定量的脱蛋白多糖，溶解于适量蒸馏水中。过氧化氢除色素，减压

5、浓缩，经醇沉、离心、冷冻干燥得红芪多糖1(HPS-1)，取适量的 HPS-1，蒸馏水溶解后，Sephadex G-25柱分离，蒸馏水洗脱，流速 .8 ml/min，每 3 ml收集1份，苯酚-硫酸法跟踪检测，绘制洗脱曲线，合并主峰流出液，减压浓缩至一定体积，冷冻干燥得 HPS-2。 2.5 纯度鉴定用 HPLC法，TSK-gel G25PW色谱柱，示差折光检测器，流动相为双蒸水，流速 1. ml/min，检测器温度35，样品浓度4 mg/ml，进样量5 l。同时取该样品溶液在 24 nm范围内进行紫外扫描。 2.6 气相色谱参照文献5，多糖样品经 _水解后制备糖腈乙酸酯衍生物，以单糖的糖腈乙酸

6、酯衍生物为对照品进行 GC分析。色谱条件: OV-11毛细管柱(5 m. 32 mm)，载气为N2 ，流速 5 ml/min，分流比 41，FID氢火焰检测器，汽化室温度 25，检测器温度 28。程序升温:11(保持 5 min)(5/min) 28 (保持 2 min)。进样量 .4 l。 2.7 薄层色谱6取 15mg HPS-2，三氟醋酸 _水解，水解产物溶于 1 ml蒸馏水中，以标准单糖为对照，分别取样品水解液和单糖对照液在含磷酸二氢钠的硅胶G薄层板上点样，上行二次展开，展开剂: 醋酸乙酯冰醋酸甲醇水=12332(V/V);自然风干后显色，显色剂: 苯胺-邻苯二甲酸溶液，烘箱中 15

7、加热 51 min显色。 2.8 红外光谱测定 取 2 mg HPS-3，KBr压片，测定红外光谱。 3.1 脱蛋白方法的选择以蛋白脱除率和多糖损失率为指标，比较 Sevag法、三氯乙酸法和三氯乙酸-正丁醇法的脱蛋白效果(见图1)。Sevag法的多糖损失率最低，但脱蛋白率也最低;三氯乙酸-正丁醇法的脱蛋白率最高，多糖损失率最低;三氯乙酸法的脱蛋白率达 3%以上，但多糖损失最高。综合各方面的因素，本实验选取三氯乙酸-正丁醇法脱除红芪多糖中的蛋白质。 3.2 红芪多糖分离纯化红芪多糖经Sephadex G-25柱层析纯化分离的洗脱曲线(见图2)。仅出现 1个洗脱峰， 收集主峰， 透析， 浓缩，冷冻干燥， 得到 HPS-2。 3.3 纯度鉴定HPS-2的紫外扫描在 2628nm处吸收峰消失，三