开题报告-罗伟仁.ppt

1、硕 士 研 究 生 开题报告,COX2对鼻咽癌细胞粘附性的影响,广东医学院病理教研室 研究生 : 罗伟仁 导师 : 陈小毅 教授,LMP1 COX2对鼻咽癌细胞 粘附性的影响 Ecadherin(Ecad),主 要 内 容,立题依据 研究内容 技术路线 预期结果 进度安排 经费预算,一 立题依据, LMP1与鼻咽癌之间的关系 COX2与鼻咽癌之间的关系 ECAD与鼻咽癌之间的关系,EBV与鼻咽癌之间的关系, 几乎100%的NPC中有EBV基因组的 存在 NPC患者及高危人群体内有高水平 的EBV抗体 鼻咽癌上皮细胞中大多数是潜伏 感染,LMP1与鼻咽癌之间的关系(1), 其被认为唯一与细胞转化

2、相关的具 有瘤基因功能 体内外实验显示LMP1 对鼻咽癌细胞有促进生长作用 大约65 %鼻咽癌组织中表达LMP1,LMP1与鼻咽癌之间的关系(2), LMP1阳性的NPC较LMP1阴性的NPC更容易侵袭鼻咽旁的正常组织及淋巴结 LMP1通过各种诱导途径参与鼻咽癌的侵袭和转移,LMP1主要的生物学功能, 促进及维持B细胞转化和永生化 使鼠类成纤维细胞发生转化 上调C33A细胞中EGFR和A20表达 活化核转录因子NFB,LMP1的结构, LMP1 是一种完整的跨膜蛋白 包括 N 末端胞浆域,跨膜疏水结构域,羧基端胞浆域 三个不同功能的区域 羧基端胞浆域与LMP1的基本功能密切相关,CTAR1 介

3、导大约25 % 的NFB 激活 羧 基 端 CTAR2 介导大约75 % 的NFB 激活 胞 浆 域 CTAR3 介导ICAM1表达,NFB 功能, 以IB非活性 形式存在, IB 的磷酸化 引起活化 上调A20、bcl-2 、VEGF 、MMP9等,诱导端粒酶表达 有研究表明NFB可以诱导COX2的表达,COX2与鼻咽癌之间的关系, COX的分类及功能 COX2与鼻咽癌的研究,COX的分类及功能, 有两种异构酶COX1 和COX2 COX1 是结构型表达蛋白，维持机体正常的生理功能 COX2 是诱导型表达蛋白，在炎症、肿瘤的发生发展及转移中起重要作用,COX2的结构和功能, 基因长8. 3k

4、b,含有10 个外显子和 9个内含子 5非翻译区含两个NFB 结合位点 可以催化花生四烯酸产生多种PG,COX2与肿瘤, 许多癌前病变和恶性肿瘤中均有COX2的高表达 非甾体类抗炎药物可以抑制COX2的表达,参 与 机 制,PGE2 肿瘤细胞增殖 Bcl2 抑制细胞凋亡 COX2 MMP2/ECAD? 肿瘤侵袭转移 VEGF 促进血管形成,COX2 与鼻咽癌, 国内最近有研究表明在鼻咽癌组织中COX2呈高度表达 国外Yoshizaki研究结果：多数LMP1阳性的鼻咽癌组织表达COX2,COX2与LMP1, Yoshizaki 等研究:随着LMP1浓度的增大，转染LMP1的422F6细胞系中CO

5、X2的表达也增强 LMP1通过CTAR1和CTAR2激活NFB及AP1来诱导COX2表达,CTAR1 LMP1 NFB COX2 CTAR2,E-CAD 与鼻咽癌之间的关系, E-CAD的结构和功能 E-CAD与鼻咽癌的研究,E-CAD的结构,细胞外区 ：介导同质细胞粘附 E-CAD 跨膜区 : 固定膜作用 细胞内区 ：“锚”定 ，发挥信号传递 和细胞稳定作用,E-CAD的功能, 钙依赖性 ，以Ecad - Cat 复合体 形式发挥作用 介导细胞与细胞之间的粘附 起细胞骨架作用,E-CAD与肿瘤, 其表达缺失导致肿瘤细胞接触性抑制丧失 近年研究表明: E-cad与恶性肿瘤的分化程度、侵袭转移及

6、预后密切相关,E-CAD 与鼻咽癌, 有报道显示鼻咽癌组织中Ecad表达缺失 Huang等报道Ecad的表达与鼻咽癌淋巴结转移呈负相关,LMP1 、COX2、 E-CAD, Chi-NeuTsai等最近研究发现LMP1可以通过诱导Ecad启动子甲基化下调其表达 BaileyT发现在COX2 高表达细胞中,细胞粘附因子Ecad缺失,本课题研究所在, 在鼻咽癌组织和细胞中 COX2和Ecad两者表达关系怎样 LMP1能否通过诱导COX2从而下调Ecad的表达 COX2对鼻咽癌细胞的粘附性有何影响,思路简图 表达性 LMP1 COX2 ECAD 运动性 粘附性,COX2抑制剂,COX2抑制剂分类,非

7、选择性COX抑制剂 消炎痛 阿斯匹林 选择性COX1抑制剂 SC560 氟布洛芬 选择性COX2抑制剂 塞来昔布 尼美舒利,COX2抑制剂抑癌作用, 已有研究表明COX2抑制剂对多种实验肿瘤有预防和治疗作用 腺瘤性息肉、结肠癌等,COX2抑制剂抑癌机制,抑制肿瘤增殖 诱导细胞凋亡 抑制血管形成 抑制侵袭转移 调节细胞免疫,二 研究内容（1）, 鼻咽癌原发灶及转移灶中LMP1、COX2 、Ecad的表达 鼻咽癌细胞系中检测LMP1、COX2、Ecad的表达,研究内容（2）, 在体外细胞应用塞莱昔布(COX2特异抑制剂),观察COX2、Ecad的表达 检测瘤细胞运动和粘附性改变,三 技术路线, 分

8、组 技术路线图 检测方法,分 组 (1), 临床标本：分慢性鼻咽炎、低分化鼻咽癌、鼻咽癌淋巴结转移灶三组，每组各30例 鼻咽癌细胞系:分CNE1、CNE1-G、CNE1-GL、CNE2Z四组,分 组 (2), 塞莱昔布体外实验: 分CNE1、CNE1-G、CNE1-GL、CNE2Z四组;分别给予塞莱昔布40 umol/L 的浓度 检测同一细胞系塞莱昔布（）/ （）情况下，其运动性和粘附性的改变,技术路线图如下,体外实验,CNE1-G,CNE1-GL,CNE-2Z,塞莱昔布(-),塞莱昔布(+),免疫组 化,蛋白印迹,RT-PCR,细胞运动粘附实验,LMP1 COX2 ECAD,ECAD,细胞运

9、动、粘附性,慢性炎,原发灶,转移灶,免疫组 化,LMP1 COX2 ECAD,综合结果分析 COX2对细胞粘附的影响,CNE1,临床病理,检测方法, LMP1的检测 免疫组织化学 Western blot COX2的检测 免疫组织化学 Western blot Ecad的检测 免疫组织化学 RT-PCR法 Western,四 预期结果(1), 在临床标本中, LMP1与 COX2表达成正相关;与Ecad成负相关 在鼻咽癌细胞系中,LMP1诱导下,COX2表达升高及Ecad表达降低,预期结果(2), 塞莱昔布体外抑制COX2作用下, Ecad表达升高,说明LMP1通过上调COX2来抑制Ecad的表达 细胞运动、粘附实验中, 塞莱昔布(+) /(-)组的同一鼻咽癌细胞系的运动及粘附性有统计学意义,五 进度安排,2004.10-2004.12 收集资料、写综述、开 题报告 2005.1-2005.3 培养和转染细胞 收集病理标本 2005.4-2005.10 体外、临床实验及完成相关 检测指标