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文档简介

1、1、1 DNA重组技术的基本工具,基因工程是指按照人们的愿望，进行严格的设计，通过体外DNA重组和转基因技术，赋予生物以新的遗传特性，创造出更符合人们需要的新的生物类型和生物产品。基因工程是在DNA分子水平上进行设计和施工的，又叫做DNA重组技术。,基因工程的概念,基因工程的“ ”,指“ 限制性核酸内切酶分子手术刀 ”,不同的限切酶所形成的黏性末端不同,BACK,1.“分子手术刀”限制性核酸内切酶（限制酶） （1）来源：主要是从原核生物中分离纯化出来的。 （2）功能：能够识别双链DNA分子的某种特定的核苷酸序列，并且使每一条链中特定部位的两个核苷酸之间的磷酸二酯键断开，一种限切酶只能识别一种特

2、定的核苷酸序列,并在特定切点切割，因此具有专一性。 （3）结果：经限制酶切割产生的DNA片段末端通常有两种形式：黏性末端和平末端。,指“DNA连接酶分子缝合针”,连接“梯子”断口的“扶手”而非“梯子”中间的“踏板”,BACK,如何理解图14？,2.“分子缝合针”DNA连接酶 (1)两种DNA连接酶（EcoliDNA连接酶和T4-DNA连接酶）的比较： 相同点：都缝合磷酸二酯键。 区别：EcoliDNA连接酶来源于T4噬菌体大肠杆菌，只能将双链DNA片段互补的黏性末端之间的磷酸二酯键连接起来；而T4DNA连接酶能缝合两种末端，但连接平末端的之间的效率较低。 (2)与DNA聚合酶作用的异同:DNA

3、聚合酶只能将单个核苷酸加到已有的核苷酸片段的末端，形成磷酸二酯键。DNA连接酶是连接两个DNA片段的末端，形成磷酸二酯键。,指某些小型DNA分子,能够在宿主细胞中复制并稳定地保存,具有多个限制酶切点（每种限制酶切点最好只有一个），以便与外源基因连接,具有标记基因，便于进行筛选,基因进入受体细胞的载体“分子运输车”,BACK,不能!因为真核生物的基因编码区中有内含子，到了原核细胞中的真核基因在表达时是不能完成自动剪切的。通常采用的是人工合成法，如成熟的mRNA逆转录法、人工合成DNA法均可，这样合成的基因编码区内是没有内含子的。原核生物也没有内质网和高尔基体。,目的基因获取与基因结构,3.基因进入受体细胞的载体“分子运输车” （1）载体具备的条件： 能在受体细胞中复制并稳定保存。 具有一至多个限制酶切点，供外源DNA片段插入。 具有标记基因，供重组DNA的鉴定和选择。 （2）最常用的载体是质粒,它是一种裸露的、结构简单的、独立于细菌染色体之外，并具有自我复制能力的双链环状DNA分子。

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