荧光偏振免疫分析

1、荧光偏光免疫分析-by沈未、荧光偏光(fluorescence polarization，FP )通常在：垂直方向(、)的偏光下激发荧光分子，然后放射偏光的垂直方向(、)和a多生物学检查，因为数据分析和相关物理残奥仪的解释容易、FP值以比例，一般通过mP表示(1P=1000mP )。 在分子未固定即完全偏振的情况下，FP值为P0=1000 mP，在理论上的最大值即一个分子可以自由运动的系统中，根据分子的运动速度的快慢，荧光偏振值约为0 500 mP之间另一方面，当待测样品中竞争抗原的浓度增加时，荧光标记抗原以游离的形式存在于样品中，FP值降低，通常在30-60 mP下完全被抑制，FPIA是均匀

2、的竞争免疫分析方法，反应完全在溶液体系中，不与结合的抗体结合。 实验操作过程非常简单，只需将抗体、荧光标记抗原和抗原放入反应杯，经过几分钟甚至几秒钟的温度培养就可以直接测定，很快就可以得到被测定抗原的浓度。 组蛋白对DNA荧光偏振度的影响，1 .制备的DNA-组蛋白复合物： -DNA(48kbp )用荧光染料YOYO-1标记，碱基对染料分子的比为10:1； 用Bis-Tris缓冲液(50mmol/L、pH6.6)稀释组蛋白溶液。 组蛋白浓度是DNA的10500倍的DNA/YOYO-1溶液(6.5 pmol/L )和稀释的组蛋白溶液一起保温(37 )培育3h，反应液体积为2mL。 组蛋白对DNA

3、荧光偏振度的影响，2 .荧光偏振度测定：用MOS-450/CD进行测定，是标准的荧光偏振度测定模式。 在测量荧光偏振度的情况下，偏振弹性调制器自动地设定为半波长模式，由此使用在水平分量和垂直分量之间以100 kHz的频率变换激发光的Bio-Kine软件(Bio-Logic )从2个散射信号实时地校正荧光强度和荧光偏振度， 组蛋白对DNA荧光偏振度的影响，3. DNA-组蛋白复合物荧光偏振度根据组蛋白和DNA浓度比变化的关系曲线，组蛋白对DNA荧光偏振度的影响，4 .图表的解释：在溶液中单独存在时，DNA分子随机卷曲， 有弹性的配置在对应于一定偏振度值的组蛋白的作用下，DNA分子凝聚的DNA-组

4、蛋白分子更密，呈现更小的配置，复合体分子比DNA分子旋转快，可能对应于小的荧光偏振度值。 荧光偏振研究的一般步骤，1 .确定最佳荧光标记物2 .确定公式的各种残奥仪3 .倍比稀释结合物基于不同的FP值确定最佳稀释比，使其结合能力与FP值呈线性关系4 .创建标准曲线5 .分析结果，验证实验预测荧光偏振免疫分析的优点，1 .不需要均匀系统、清洗操作，能够大幅减少试剂的使用量。 2 .检查速度快，自动化方便，适用于快速筛选检查。 3、荧光标记抗原均匀性好，性质稳定，可长期保存，方法重现性好。 4.FP值为一个比，与其他荧光检测技术相比，不易受溶液颜色和机器灵敏度变化的影响，实验结果稳定，可靠性高。

5、5 .通过使用不同发光波长的荧光素进行多标记检查，可以进行多目标的同时定性定量分析。 像四甲基若丹明一样，由于激发、发射光谱和荧光素的重叠较少，相互之间几乎没有干扰，目前正在应用于多标记检查。 荧光偏振免疫分析的缺点是1. FPIA比ELISA法灵敏度低。 一般来说，FPIA的检出极限为0.1-10ng/mL-1左右。 2.FPIA易受样品基质(例如与基质蛋白质的非特异性结合)、背景荧光和光散射的影响。 3.FPIA的检测信号的背景高，检测范围(窗口)窄，信噪比(S/N )低。4. FPIA对荧光标记物的纯度要求很高，需要更复杂的纯化工艺。 5. FPIA检查需要特定的分析仪器，或在通常的荧光分光光度校正中追加测量偏光附件。 因此，比通常的酶标记物价格要高。 本实验室研究的思路是：当研究对象为与核酸(DNA/