动物细胞培养综合.ppt

1、细胞工程,植物组织培养,植物体细胞杂交,动物细胞培养,动物细胞融合,单克隆抗体技术,胚胎移植,核移植,植物细胞工程技术,动物细胞工程技术,所采用技术的理论基础,植物细胞工程,通常采用的技术手段,植物组织培养,植物体细胞杂交,植物细胞的全能性,植物组织培养,动物细胞培养,烧伤病人的治疗通常是取烧伤病人的健康皮肤进行自体移植，但对于大面积烧伤病人来讲，健康皮肤很有限，请同学们想一想如何来治疗该病人？,许多动物的细胞能够分泌蛋白质,如抗体等.但是,单个细胞产生的蛋白质量是很少的,怎样才能获得大量的分泌蛋白呢?,一、动物细胞培养条件 P46,1、无菌、无毒的环境 （添加一定量的抗生素，定期更换培养液）

2、 2、营养 （葡萄糖、氨基酸、微量元素、无机盐、促生长因子、动物血清、血浆等。） 3、温度和PH 36.5+（-）0.5度, 7.2-7.4 4、气体环境： O2和CO2（95%空气和5% CO2 ）,保证细胞顺利的生长增殖,二、动物细胞培养概念 P44,1、概念： 2、目的： 3、理论基础：,细胞增值,获得细胞和细胞产物,就是从动物机体内取出相关的组织，将它分散成单个细胞，然后，放在适宜的培养基中，让这些细胞生长和增殖。,三、动物细胞培养过程 P44-46,动物胚胎或幼龄动物的组织、器官,胰蛋白酶,单个细胞,加培养液,制成,细胞悬浮液,原代培养,细胞增殖,去掉组织间蛋白,传代培养,胰蛋白酶,

3、10代细胞,50代细胞,50代以后,三、动物细胞培养过程：,四、动物细胞培养技术的应用 P47,大规模生产有重要价值的生物制品，如病毒疫苗、干扰素、单克隆抗体等 为基因工程提供受体细胞 用于检测有毒物质，判断某种物质的毒性 科学家培养正常或各种病变的细胞，用于生理、病理、药理等方面的研究。,获得细胞或细胞产物,细胞的全能性,植物体,培养结果,快速繁殖、培育无病毒植株等,培养目的,葡萄糖、动物血清,蔗糖、植物激素,培养基特有成分,液体培养基,固体培养基,培养基性质,细胞增殖,原理,动物细胞培养,植物组织培养,比较项目,植物细胞和动物细胞培养的比较,细胞群体,1、动物细胞培养的正确过程是 A原代培

4、养传代培养细胞株细胞系 B原代培养传代培养细胞系细胞株 C传代培养细胞系原代培养细胞株 D原代培养细胞系传代培养细胞株,2、动物细胞培养与植物细胞培养的重要区别在于 A 培养基不同 B 动物细胞培养不需要在与菌条件下进行 C 动物细胞可以传代培养，而植物细胞不能 D 动物细胞能大量培养，而植物细胞只能培养成植株,3、下列有关动物细胞培养的叙述，正确的是 A 动物细胞培养的目的是获得大量的细胞分泌蛋白B 细胞遗传物质的改变发生于原代培养过程中C 在培养瓶中要定期用胰蛋白酶使细胞从瓶壁上脱离，制成悬浮液 D 动物细胞培养液中通常含有葡萄糖、氨基酸、无机盐、生长素和动物血清等,4、动物细胞培养技术的

5、用途有 生产有价值的生物制品，如病毒疫苗、干扰素等 生产基因工程技术中所用的受体细胞可以用于检测有毒物质培养的各种细胞可直接用于生理、病理、药理等方面的研究 A B C D,(1)容器A中放置的是动物器官或组织。它一般取自 (2)容器A中的动物器官或组织首先要进行的处理是， 然后用酶处理，这是为了使细胞分散开来。这 样做的目的是 (3)培养首先在B瓶中进行，这时的细胞培养称为。 (4)为了把B瓶中的细胞分装到C瓶中，用处 理，然后配置成，再分装。 (5)有少数的细胞能存活下来，继续传下去，一般能传到4050 代，这种传代细胞叫做。这种细胞的遗传物质与前面的细胞（相同，不同）。 （6）这种细胞传

6、至50代后一般不能再传，但有少数细胞遗传物质发生改变，带有 细胞的特征，有可能在培养条件下无限制的传下去。,胚 胎或幼龄动物组织器官,剪碎,胰蛋白,使每个细胞都能与培养液接触,原代培养,胰蛋白酶,悬浮液,细胞株,相同,癌,动物体细胞核移植技术和克隆动物,动物体细胞核移植概念:,将动物的一个细胞的细胞核，移入一个已经去掉细胞核的卵母细胞中，使其重组并发育成一个新的胚胎，这个新胚胎最终发育成动物个体。 用核移植的方法得到的动物称为克隆动物,核移植,胚胎细胞核移植,体细胞核移植（难度高）,受体细胞：M期的卵母细胞,、动物的克隆与植物克隆一样吗？,不,、用动物体细胞进行克隆的过程,其实际操作过程是什么

7、？,动物克隆过程的实际是细胞核移植,、阅读课本P48，简述高产牛体细胞核移植过程,思考题,、核在进行体细胞核移植之前，为何要去掉受体卵母细胞的核？,为使核移植动物的遗传物质全部来自有利用价值的动物提供的细胞。,、用于核移植的供体细胞一般都选用传代10代以内的细胞，为什么？,10代以内的细胞保持一般保持正常二倍体的核型，未突变,3、细胞核移植生产的克隆动物是对体细胞供体动物进行了100%的复制吗？为什么？,不是，克隆动物绝大部分DNA来自供体细胞核，但核外还有少部分DNA（如线粒体DNA）来自受体卵母细胞,克隆动物的研究意义,1.克隆动物作为生物反应器，生产医用蛋白 2.改良动物品种 3.治疗人

8、类疾病，作为供体 4.保护濒危动物,体细胞核移植技术存在的问题：,许多克隆动物表现出遗传和生理缺陷，如体型过大，异常肥胖，发育困难，脏器缺陷，免疫失调等。,动物细胞融合与单克隆抗体,如果将牛的细胞与植物细胞杂交，得到绿色的小奶牛，那岂不是只要晒晒太阳就可以挤出牛奶啦！,动物细胞也能融合吗？,动物细胞融合 1.定义： 2.原理： 3.融合方法： 4.意义： 5.应用：,细胞膜具有流动性,生产单克隆抗体,1、动物细胞融合过程,不同DNA的两个细胞,灭活病毒诱导细胞融合,融合后的细胞进行有丝分裂,主要用于制备,单克隆抗体,获得杂种植株,用途,物理、化学方法,（同左）,灭活的病毒,物理（离心、振动、电

9、刺激）,化学（聚乙二醇）,诱导方法,使细胞分散后诱,导细胞融合,去除细胞壁后诱,导原生质体融合,细胞融合的方法,细胞膜的流动性,细胞膜的流动性、,植物细胞全能性,原理,动物细胞融合,植物体细胞杂交,比较项目,植物、动物细胞融合的比较,设计方案： 一个B淋巴细胞只分泌一种特异性抗体 小鼠骨髓瘤细胞能无限增殖,如何获得化学性质单一、特异性强的抗体？,杂种细胞,二、单克隆抗体,1.传统获取抗体方法： 缺点：,反复注射，血清中获取,动物细胞融合技术,B 、BB 、B瘤 、瘤瘤 、瘤,只有杂交细胞才能活,动物细胞培养,单克隆抗体制备过程,获得产生相应抗体的B淋巴细胞,2.制备过程： 获取效应B细胞，骨髓瘤细胞 通过什么方法获得效应B细胞？怎样能得到足够多的骨髓瘤细胞？ 人工诱导融合：关键： 方法： 结果： 用特定的选择培养基筛选出杂交瘤细胞 此细胞特点：,体外进行细胞培养,膜的融合,BB B B瘤 瘤瘤 瘤,迅速大量增