《疫学凝集反应》PPT课件.ppt

1、凝集反应安阳工学院10生物技术,凝集反应（agglutination）,是指颗粒性抗原，例如细菌、红细胞、螺旋体、细胞性抗原，或可溶性抗原（或抗体）与载体颗粒结合成致敏颗粒后，与相应的抗体（或抗原）在适量的电解质存在的条件下，经一定时间后凝聚成肉眼可见的凝集现象。,凝集反应的类型,根据凝集反应中抗原的性质，反应的方式分为： 直接凝集反应 间接凝集反应 间接凝集抑制反应 协同凝集反应,直接凝集试验： 玻片凝集试验：ABO血型 试管凝集试验：外斐试验，肥达试验 间接凝集试验： 正向间接凝集试验 反向间接凝集试验 间接凝集抑制试验 协同凝集试验 简介血凝试验 胶乳凝集试验 明胶凝集试验,凝集反应的特

2、点,颗粒性抗原 致敏颗粒 （可溶性抗原或抗体与载体颗粒结合） 电解质的存在 肉眼可见的凝集现象,凝集反应的发生分两阶段：,抗原抗体的特异结合 出现可见的颗粒凝集,直接凝集反应,细菌、螺旋体和红细胞等颗粒抗原，在适当电解质参与下可直接与相应抗体结合出现凝集，称为直接凝集反应。参加反应的颗粒性抗原称为凝集原（agglutinogen），抗体称为凝集素（agglutinin） 。 常见的方法有玻片法和试管法,玻片凝集试验ABO血型鉴定,玻片凝集试验为定性试验，一般用已知抗体作为诊断血清，与受检颗粒抗原，如菌液或红细胞抗原各加一滴在玻片上，混匀，数分钟后即可用肉眼观察凝集结果，出现凝集颗粒的为阳性。此

3、法简便，快速，适用于从病人标本中分离得到的菌种的诊断或分型，也可用于红细胞ABO血型的鉴定。,【实验原理】 人类ABO血型抗原主要有A和B两种，根据红细胞表面这两种抗原的有无可把血型分为四种。据此，将抗A和抗B抗体分别与待测红细胞混合，抗A或（和）抗B抗体与红细胞表面上的相应抗原结合而引起红细胞凝集，据其凝集情况便可判定出受试者的血型。,【实验材料】 1ABO标准血清：抗A分型试剂和抗B分型试剂各1支。 21ml生理盐水的试管1支 3. 一次性采血针1枚、白瓷板1块、一次性毛细吸管1支、75酒精棉球和灭菌干棉球,【实验方法】 1.用酒精棉签消毒被检者手指尖端，以采血针刺破皮肤，稍加挤压，使血液

4、流出。滴1至2滴血液于含有生理盐水的试管内，摇匀，制成血球悬液。用干棉球止血。 2取洁净载玻片1块，将抗A、B分型试剂分别加1滴于白瓷板的两个圆孔内。 3. 用毛细吸管吸取血球悬液，在白瓷板的两个圆孔内各加一滴,并充分混匀，放置510分钟。 4.观察红细胞有无凝集发生。如有凝集，可见红细胞凝集成块；无凝集，红细胞呈均匀分散。 5.记录凝集情况，判定受检者的血型。,试管凝集试验,多用于半定量试验，原则上是用定量抗原悬液与一系列倍比稀释的受检血清混合，在保温静置后观察结果，以判定受检血清中有无相应抗体及其效价。 常有肥达试验，外-斐试验，交叉配血试验等。,间接凝集反应 将可溶性抗原或抗体先吸附于适

5、当大小的颗粒性载体表面（这种载体与免疫无关），然后与相应抗体或抗原结合，在适量的电解质存在下，出现特异性凝集现象，称为间接凝集反应。 根据载体的不同可将间接凝集反应分为：间接血细胞凝集试验、间接乳胶凝集试验（及间接乳胶凝集抑制试验）和金黄色葡萄球菌协同凝集试验等。,载体的种类及处理方法,常用载体有：红细胞（O型人红细胞，绵羊红细胞）、聚苯乙烯胶乳颗粒、明胶颗粒、离子交换树脂、活性炭、火棉胶等。 处理方法：颗粒表面的处理（醛化、鞣化、化学处理）,间接凝集反应的类型,1. 正向间接凝集反应 2. 反向间接凝集反应 3. 间接凝集抑制反应 4. 协同凝集反应,血凝试验,可在微量滴定板或试管中进行，将

6、标本倍比稀释，一般为1:64，同时设不含标本的稀释液对照孔。在含稀释标本1滴的板孔（或试管）中，加入0.5致敏红细胞悬液1滴，充分混匀，置室温12小时，即可观察结果。凡红细胞沉积于孔底，集中呈一圆点的为不凝集（）。如红细胞凝集，则分布于孔底周围。根据红细胞凝集的程度判断阳性反应的强弱，以凝集的孔为滴度终点。,血凝反应强度示意图,1（正向）间接凝集反应,用抗原致敏载体以检测标本中的相应抗体,2反向间接凝集反应,用特异性抗体致敏载体以检测标本中的相应抗原。,3间接凝集抑制反应,诊断试剂为抗原致敏的颗粒载体和相应的抗体，用于检测标本中是否存在与致敏抗原相同的抗原。检测方法为将标本先与抗体试剂作用，然

7、后再加入致敏的载体，若出现凝集现象，说明标本中不存在相同抗原，抗体试剂未被结合，因此仍与载体上的抗原起作用。如标本中存在相同抗原，则凝集反应被抑制。,间接凝集抑制反应原理示意图,4协同凝集反应,协同凝集反应与间接凝集反应的原理相类似，但所用载体既非天然的红细胞，也非人工合成的聚合物颗粒，而是一种金黄色葡萄球菌。它的菌体细胞壁中含有A蛋白SPA具有与IgG的Fc段结合的特性，因此当这种葡萄球菌与IgG抗体连接时，就成为抗体致敏的颗粒载体。如与相应抗原接触，即出现反向间接凝集反应。协同凝集反应也适用于细菌的直接检测。,间接凝集反应的应用,间接凝集反应具有快速、敏感、操作简便、无需特殊的实验设备等特点，而且能用于抗原或抗体的测定，因此在临床检验中广为应用。,（一）抗原的检测,反向间接凝集试验可用于检测病原体的可溶性抗原，也可用于检测各种蛋白质成分。 间接凝集反应的敏感度虽较沉淀反应高，但低于新发展的各种标记免疫测定。 例如检测乙型肝炎表面抗原（HBsAg）的间接血凝试验敏感度一般在25ng/ml，对献血员的筛检已不符合要求。,（二）抗体的检测,可用于检测细菌、病毒、寄生虫等感染后产生的抗