槐花米中芸香的提取及槲皮素的制备与检识.ppt

1、实验二槐花米中芸香苷的提取及槲皮素的制备与检识,目的要求,学习和掌握芸香苷的提取及检测技术 学会利用芸香苷的水解作用制备糖类及苷元,实验原理,芸香苷俗称芦丁。广泛存在于植物界中，现已发现含芦丁的植物至少在70种以上，如烟叶、槐花、荞麦和蒲公英中均含有。尤以槐花米（为植物槐树的未开放的花蕾）和荞麦中含量最高，可作为大量提取芦丁的原料。 芦丁是由槲皮素（Quercetin）3位上的羟基与芸香糖脱水缩合形成的苷。芸香糖（Rutinose）为葡萄糖（Glucose）与鼠李糖（Rhamnose）组成的双糖。,实验原理,纯品为浅黄色粉末或极细的针状结晶，含有三分子的结晶水，熔点为174-178。微溶于水，

2、易溶于醋酸乙酯等, 不溶于丙酮、乙醚、氯仿、石油醚，溶于碱而呈黄色。,实验原理,芦丁具有维生素P样作用。有助于保持及恢复毛细血管的正常弹性，主要用作防治高血压病的辅助治疗（但不能降压）剂，亦可防治因缺芦丁所致的其它出血症。多作口服，也可作注射用。,实验原理,提取芦丁的方法很多，目前我国多采用碱提取- 酸沉淀法。该法的提取原理是依据芦丁结构中含有酚羟基，能与碱反应生成盐而溶于水中，向此盐溶液中加入酸，则芦丁游离析出。此外，还可以采用水或醇提取法。,芸香苷的提取,方法：水提取法,方法 ：碱溶酸沉法,芸香苷的提取 （粗提）,芸香苷的提取（精制）,槲皮素精制品,芸香苷的水解,芸香苷、槲皮素及糖的检识,

3、实验名称 实验试剂 现象 芸香苷 槲皮素 Molish反应 10%-萘酚乙醇 紫色环 无现象 溶液-浓硫酸 盐酸-镁粉反应 盐酸-镁粉 红色紫红色 醋酸镁反应 1醋酸镁甲醇 黄色荧光（紫外灯） 溶液（滤纸） 三氯化铝反应 1三氯化铝乙 黄色荧光 醇溶液（紫外灯） 锆-柠檬酸反应 2二氯氧锆甲醇溶液 黄色并 黄色 2柠檬酸甲醇溶液34滴 褪色 不褪色,芸香苷、槲皮素及糖的检识,1、酸性试验： 取小试管8支，每4支一组，第一组每管中加入芸香苷1mg，第二组每管中加入槲皮素1mg，每组四管中分别加入稀氨水、5%碳酸氢钠水溶液、5%碳酸钠水溶液、1%氢氧化钠水溶液各2 ml，振摇后观察各管溶解情况。溶

4、解的溶液应呈黄色。再加浓盐酸数滴酸化，黄色褪去或变浅，并有沉淀析出或产生混浊。,芸香苷、槲皮素及糖的检识,2、Molish反应： 取试样1 mg置小试管中，加乙醇0.5 ml溶解，加-萘酚试剂12滴，摇匀。倾斜试管，沿管壁徐徐注入浓硫酸约0.5 ml静置。观察两层溶液的界面变化，出现紫色环者为阳性，表示样品分子中含有糖的结构（糖和苷类均呈阳性反应），比较芸香苷和槲皮素的不同。,芸香苷、槲皮素及糖的检识,3、盐酸-镁粉反应： 取芸香苷1 mg，加乙醇2 ml，在水浴上加热溶解，加镁粉约50 mg，滴加数滴浓盐酸，溶液由黄色渐变红色者表示有黄酮类化合物。以同法试验槲皮素。 如用锌粉代替镁粉，则芸香

5、苷（3-羟基与糖结合成苷）仍有作用，而槲皮素（黄酮醇类）不呈还原显色反应。因此可区别两者。,芸香苷、槲皮素及糖的检识,4、三氯化铝反应： 取样品1 mg溶于甲醇中，加1%三氯化铝甲醇溶液23滴，黄酮类呈鲜黄色，并有荧光。 5、锆-柠檬酸反应： 取样品1 mg，加甲醇2 ml，在水浴上加热溶解，再加2%二氯氧锆甲醇溶液34滴，凡有3-羟基或5-羟基的黄酮即呈鲜黄色。然后加2%柠檬酸甲醇溶液34滴，有3-羟基的黄酮黄色不褪。比较芸香苷和槲皮素的不同。,芸香苷、槲皮素及糖的检识,6、Fehling试验： 取试样数mg，溶于0.5 ml热水中，加斐林氏试剂甲、乙等量混合液2 ml，沸水浴上加热，如产生

6、氧化亚铜的暗红色或黄色沉淀表示有还原糖或其它还原性物质。充分加热作用后滤去沉淀，滤液滴加浓盐酸酸化，在水浴上加热水解，水解液以10% NaOH 中和，再进行斐林氏试验，此时显阳性反应者表示样品为糖苷化合物。比较芸香苷和槲皮素的不同。,注意事项,1在提取前应将槐花米略捣碎，使芸香苷易于被热水溶出。 2在提取过程中，加入硼砂的目的是使其与芸香苷分子中的邻二酚羟基发生络合，既保护了邻二酚羟基不被氧化破坏，又避免了邻二酚羟基与钙离子络合（芸香苷的钙络合物不溶于水），使芸香苷不受损失，提高收得率。,1、计算芦丁的得率 2、计算槲皮素的得率 3、记录芦丁的检测结果,实验结果,3本实验直接用沸水由槐花米中提取芸香苷，收得率稳定，且操作简便。如用碱溶酸沉法提取，加入石灰乳可以达到碱性溶解的目的，又可除去槐花7米中所含的大量粘液质，但应严格控制其碱性pH89，不可超过pH10。如pH值过高，加热提取过程中芸香苷可被水解破坏，降低收得率。加酸沉淀时，控制pH34,不宜过低，否则芸香苷可生成yan