腊肠中亚硝酸盐测定

1、腊肠中亚硝酸盐测定（盐酸萘乙二胺法）一、实验目的：1通过本实验掌握亚硝酸盐的测定方法，理解盐酸萘乙二胺法的原理。2掌握亚硝酸盐测定的样品预处理方法及分光光度法测定亚硝酸盐的操作要点。3熟悉分光光度计的使用。二、实验原理：制品中加入的亚硝酸盐产生的亚硝基与肌红蛋白反应，生产色泽鲜红的亚硝基肌红蛋白，使肉制品有美观的颜色。同时亚硝酸盐也是一种防腐剂，可抑制微生物的增殖。亚硝酸盐在弱酸性条件下，与对氨苯磺酸发生重氮化反应生成重氮盐，此重氮盐再与盐酸萘乙二胺发生偶合反应，生成紫红色化合物。其颜色深浅与亚硝酸含量成正比，故可比色测定。三、仪器、试剂与材料：仪器：分光光度计、组织捣碎机、移液管、容量瓶、滤

2、纸、漏斗、漏斗架、分析天平、电炉。材料：腊肠试剂： 亚铁氰化钾溶液(106 g/L)：称取5.3g亚铁氰化钾溶于水，并稀释至50mL。 乙酸锌溶液(220 g/L)：称取11g乙酸锌，加1.5mL冰醋酸溶于水，并稀释至50mL。 饱和硼砂溶液(50 g/L)：5g硼酸钠溶于100mL热蒸馏水中，冷却备用。 对氨基苯磺酸溶液（4 g/L）：称取0.8g对氨基苯磺酸，溶于200mL20%的盐酸溶液中，闭关保存。（配制方法：取20ml盐酸溶液缓缓加到100ml水中。） 盐酸萘乙二胺溶液（2 g/L）：称取0.2g盐酸萘乙二胺，溶于100mL蒸馏水中，混匀后置于棕色瓶中，避光保存。 硝酸钠标准溶液（1

3、250ug/ml）:准确称取0.1250g于110120干燥恒重的亚硝酸钠，加水溶于100ml容量瓶中，加水稀释至刻度，混匀。亚硝酸钠标准使用液：（5.0ug/ml）:临用前吸取亚硝酸钠标准溶液1.00ml，置于250ml容量瓶中，加水稀释至刻度。四、实验步骤：1.样品处理将绞碎混匀的腊肠，称取6.0g-8.0g（精确至0.0001g）试样，置于50mL烧杯中，加入6.3mL饱和硼砂溶液，不断搅拌均匀。然后以70左右的热水约150mL分3次将加试样洗入250mL容量瓶中，置于沸水浴中加热15min，取出后冷却至室温，加入5.0mL亚铁氰化钾溶液，摇匀，再加入5.0mL乙酸锌溶液，以沉淀蛋白质。

4、加水至刻度，摇匀，放置0.5h，除去上层脂肪，上清液用滤纸过滤，弃去初滤液30mL，滤液备用。2.亚硝酸钠标准曲线绘制准确量取0.00、0.50、1.00、1.50、2.00、2.50mL亚硝酸钠标准使用液（相当于0.00、2.54、5.08、7.62、10.16、12.70g亚硝酸钠），分别置于50mL容量瓶中。分别加入2mL对氨基苯磺酸溶液（4g/L），混匀，静置3-5min后各加入1mL盐酸萘乙二胺溶液（2g/L），并以水定容到50ml，混匀，静置15min。用10mm比色皿，以试剂空白为参比，在538nm波长下测定吸光度,以测得的各比色液的吸光度及对应的亚硝酸钠含量制作标准曲线。3.样

5、品中亚硝酸盐的测定取40ml待测样液于50ml的容量瓶中，加2ml 0.4%对氨基苯磺酸溶液，混匀，静置3-5min后各加入1ml 0.2%盐酸萘乙二胺溶液（2g/L），并以水定容到50ml，混匀，静置15min。用10mm比色皿，以试剂空白为参比，在538nm波长下测定吸光度,记录吸光度。从标准曲线上查的相应的亚硝酸钠含量，计算试样中亚硝酸盐（以亚硝酸钠计）的含量。五、数据记录与处理数据记录表1 亚硝酸钠标准使用液吸光度值012345样品样品亚硝酸钠标准溶液（mL）0.000.501.001.502.002.5040ml待测液40ml待测液亚硝酸钠含量（ug）0.002.545.087.6210.1612.7040ml待测液40ml待测液A538nm数据处理：1 以吸光度A为纵坐标，总含亚硝酸盐量（gml）为横坐标，求得回归方程为：A=*C+*R=*2 通过回归方程求得容量瓶的未知样亚硝酸盐的含量：将Ax= 代入回归方程A= 得到Cx=3 计算样品中亚硝酸盐的含量：样品中亚硝酸盐按下式计算：式中：X试样中亚硝酸盐的含量（mg/kg）； V1试样处理液总体积（mL）； V2测定用样液体积（mL）； m试样质量（g）； A试样测定液中亚硝酸盐的质量（g）。m为样品质量，g六、说明与注意事项：1.样品加入硼