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文档简介

荧光PCR检测原理,一、荧光信号的检测,荧光标记信号的产生 荧光标记基团在某波长的激发光刺激下， 产生一个更长波长的发射光,FRET？ 某荧光标记基团在激发光刺激下生成某波长的发射光，当另一屏蔽基团与其距离合适时，原发射光将会被屏蔽基团所吸收，并转化为其他波长的发射光或热能，称之为FRET。,荧光信号,荧光染料 SYBR green特异性结合双链，释放荧光信号 特异性荧光探针 Taqman双荧光标记探针 molecular Beacon荧光标记探针 荧光标记杂交双探针,Taqman,特异性荧光双标记探针 Taqman 53外切酶活性,Molecular beacon,荧光标记杂交双探针,二、典型的荧光PCR扩增曲线,阳性标本扩增曲线 阴性标本扩增曲线,Bio-rad iCycler扩增曲线,PE-5700扩增曲线,PE-7700扩增曲线,Roche LightCycler扩增曲线,三、Ct值 样本扩增曲线与阈值线交叉点的循环数,Ct值,四、荧光PCR定量的原理,Unknown,未知样本拷贝数的确定,五、荧光PCR区别于其他PCR方法 主要有以下优点 1) 全封闭反应，无需PCR后处理 2) 特异性强，灵敏度高 3) 采用对数期分析，摒弃终点数据，定量准确 4) 定量范围宽，可达到10个数量级 5) 仪器在线式实时监测，结果直观，避免人为判断 6) 可实现一管双检或多检 7

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