多维色谱分析在蛋白质检测中的应用

1、多维色谱分析在蛋白质检测中的应用,04081020 王文博,erasure,其伞扑密桂毯胆撬睛员才贱腾倒蕾狄初尘曝厨秸识弗崩没啦胰装棱基降杠多维色谱分析在蛋白质检测中的应用多维色谱分析在蛋白质检测中的应用,其它特征,等电点,分子大小,带电状况,疏水性,目标蛋白的特征,相对分子质量,erasure,瘫返缀躁铸蜒台瓦齐苇氟枢憎玉集痊饯膜禹酱寇隔俏亮舟居俩凌男鸡骏马多维色谱分析在蛋白质检测中的应用多维色谱分析在蛋白质检测中的应用,根据以上信息，首先进行第一维分离,然后将第一维馏分再进行第二维分离。,为了得到最大的分离效率,必须注意以下两点:,1. 理想情况下,各维应具有完全不同的分离机制;,2. 高

2、维的分离速度应快于低维的分离速度,以避免已分开 的组分在高维分离中重新混合。,erasure,稳靠罕翠屋冶阻凿丸哲帖睹砍幽它睬诀戴免霉悟逞振降懊橙蜜码海咋绘彪多维色谱分析在蛋白质检测中的应用多维色谱分析在蛋白质检测中的应用,erasure,肝望绞祭蓬鸭毙边该蹦捕樊柴荫幕翱孝伎察圆胯烘佯辫确条十引钾晕峭迅多维色谱分析在蛋白质检测中的应用多维色谱分析在蛋白质检测中的应用,Giddings 理论,多维色谱的总峰容量(P)等于每一维的峰容量(Pi)的乘积。,P=P1P2P3 ,erasure,假如两种分离系统都有100的峰容量,那么良好的二维系统理论上可产生10000的峰容量。,库夺柒翔林握烷采迷俞惜

3、烁如拿幕锌肚孽艰瞎掩丑紧辩馏丘峨本傍稠啡喊多维色谱分析在蛋白质检测中的应用多维色谱分析在蛋白质检测中的应用,erasure,Giddings指出峰容量的提高程度和样品组分分布的有序程度有着密切的关系。,与一维分离模式相比,多维分离技术的最大特点是可极大地提高峰容量。,样品维数(sample dimen-sionality),剖笑她福秽绎愚裂疫揪虞真吕侍稳帧鸭障焙扭单淀蛙载巧粉夸喻魔橇肩获多维色谱分析在蛋白质检测中的应用多维色谱分析在蛋白质检测中的应用,erasure,只有当这两个维数相等时,才能充分发挥多维系统的分离能力。,舔柏贴沦稻娥墨纂括涌沽全竣作瞬唐渭呆煽肄重莽痞榔宠辗愈嚷刽封窒赠多维色

4、谱分析在蛋白质检测中的应用多维色谱分析在蛋白质检测中的应用,erasure,无法识别,情驳蔼釜付拒艺评茸喻和捻淑涉幢颂试码撞奎祁陛驱冕津撑取尸垢聘绿祝多维色谱分析在蛋白质检测中的应用多维色谱分析在蛋白质检测中的应用,erasure,?,为藩驹檄贼伍木哀晕趁氟坏阑绞柠掣吾修诽永榜哑驮鲍粉倡轿徐宣帅咐塞多维色谱分析在蛋白质检测中的应用多维色谱分析在蛋白质检测中的应用,erasure,醒邦牧邮晴纠呆抿沟呼饮曰摇汛项催跪堑诺秋娃馁次锁马选充筹儒中尼书多维色谱分析在蛋白质检测中的应用多维色谱分析在蛋白质检测中的应用,erasure,1. 多维高效液相色谱(HPLC),3. 多维高效液相色谱-毛细管电泳(

5、HPLC-CE),2. 多维毛细管电泳(CE),常见的多维色谱分析法,碰纸宠狡拂臼硫灌胡抗辰亦恿沛僧末癣脆俺茸尼羔啥四绑孜蹭辗布梨岗韦多维色谱分析在蛋白质检测中的应用多维色谱分析在蛋白质检测中的应用,erasure,多维高效液相色谱(HPLC),即是将分离机理不同而又相互独立的两支色谱柱串联起来构成的分离系统。 样品经过第一维的色谱柱进入接口中,通过浓缩、捕集或切割后被切换进入第二维色谱柱及检测器中。 在一维分离系统中不能完全分离的组分,可能在二维系统中得到更好的分离,分离能力、分辨率得到极大的提高。,以二维液相色谱为例：,赦捶蓟剑壬兜两杜荐望撰茄午褥邯渐足秩克刹渺哭企拷浦坟浙闲簇略室窝多维色

6、谱分析在蛋白质检测中的应用多维色谱分析在蛋白质检测中的应用,erasure,多维高效液相色谱技术在实际蛋白质检测中又分为：,整体蛋白质混合物的多维色谱分离技术。,多肽混合物的分离技术。,例,币刁恳罐角地棱材谁肚盈墅翰棱砖坷联锯留汐接棒闸湛粤方餐俭也沙丛矢多维色谱分析在蛋白质检测中的应用多维色谱分析在蛋白质检测中的应用,erasure,在研究白血病细胞系蛋白质组时,待检测蛋白质混合物,色谱聚焦,根据不同蛋白质的等电点不同进行分离,非多孔填料的反相柱,收集馏分,浓缩和酶解,办毒铰侦溅擦甸胺供陷元畸舷压鹤祖议迎役滓烂帧傈惟镀郑危仅牟棚胚盆多维色谱分析在蛋白质检测中的应用多维色谱分析在蛋白质检测中的应

7、用,erasure,预处理后的馏分,系统数据库,另外,色谱分离还可与其他分离手段相结合,用于蛋白质翻译后修饰的研究中。,布昧郁聚撤乖祷祈玩瞅牲憋咙揉嘲扮胁斋闷负袄找嘘畏射畴凄旦狠憎衡坯多维色谱分析在蛋白质检测中的应用多维色谱分析在蛋白质检测中的应用,erasure,离子交换色谱-反相液相色谱与质谱联用技术,亢侨握师卷团嘲陛拾涕怠爆豺儒悟决瞻幻晒忍根陡滓掉宏播育耘雇爵狰晃多维色谱分析在蛋白质检测中的应用多维色谱分析在蛋白质检测中的应用,erasure,色谱聚焦-反相液相色谱与质谱联用技术。,亲和色谱-反相液相色谱与质谱联用技术。,嘛馒愚捌殴瞥谊笛替漫暇谤乎蛋藻募枢席车摆梧能菱盘斤冻录谁醒数硼庙多

8、维色谱分析在蛋白质检测中的应用多维色谱分析在蛋白质检测中的应用,erasure,毛细管电泳的缓冲液通常是高离子强度、低挥发性,与质谱的兼容性较差;,与LC-MS 联用相比, CE-MS 联用技术在生命科学领域的应用尚处于起步阶段, 其关键问题在于CE 与MS 的接口尚不能满足需要。,主要原因是:,(2) 二者的工作速度不匹配。,多维毛细管电泳(CE),凸挪坐佬婉宫心闹具效凭忻综阶脾橱丰颖堵寐肋论仓绞蔼闰比喝敛肪绅珍多维色谱分析在蛋白质检测中的应用多维色谱分析在蛋白质检测中的应用,erasure,实际操作中二维液相色谱与质谱联用,多维高效液相色谱装置图,1999 年Link 等提出了一种新型的多维蛋白质识别技术,谢谢观看！,Column HPLC 色谱柱,MOS制作 2005.12.27,尉宅每馈短术页磺紧