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文档简介

1、DNA、RNA提取的差别,1,极性化合物，溶于水，不溶于乙醇、氯仿等有机溶剂，钠盐比游离核酸易溶于水。在酸性溶液中，DNA、RNA易水解，在中性或弱碱性溶液中较稳定。天然状态的DNA是以脱氧核糖核蛋白(DNP)形式存在于细胞核中。,核酸的理化性质,2,提取DNA、RNA总的原则:,1保证核酸一级结构的完整性；2其他生物大分子的污染应降低到最低程度；3不应存在对酶有抑制作用的有机溶剂和过高浓度的金属离子；4其他核酸分子，也应尽量去除。,3,核酸提取的基本步骤,1.材料准备2.破碎细胞或包膜内容物释放3.核酸分离、纯化4.沉淀或吸附核酸，并去除杂质5.核酸溶解在适量缓冲液或水中,4,DNA和RNA

2、提取的主要差别,DNA和RNA的降解DNA不易降解RNA易降解,5,浓盐法：有机溶剂抽提法：密度梯度离心法：,利用RNP和DNP在盐溶液中溶解度不同，将二者分离,有机溶剂作为蛋白变性剂，同时抑制核酸酶的降解作用,利用不同内容物密度不同的原理分离各种内容物,基因组DNA的提取,吸附材料结合法,6,非基因组DNA的提取,碱裂解法密度梯度离心法煮沸法,质粒DNA的提取,7,SDS法流程图（以动物组织为例）,动物组织,细胞裂解,上层溶液,组织匀浆,抽提,干燥溶解,离心洗涤,酒精沉淀,DNA溶液,基因组DNASDS法,8,RNA提取的通用方法,异硫氰酸胍/苯酚法,原理：细胞在变性剂异硫氰酸胍的作用下被裂

3、解，同时核蛋白体上的蛋白变性，核酸释放；释放出来的DNA和RNA由于在特定pH下溶解度的不同而分别位于整个体系中的中间相和水相，从而得以分离；有机溶剂抽提，沉淀，得到纯净RNA。,9,异硫氰酸胍/苯酚法,步骤:材料准备：尽量新鲜。裂解变性：异硫氰酸胍（亚硫氢胍，巯基乙醇，N-月桂肌氨酸等）。使细胞及核蛋白复合物变性，释放RNA，有效抑制核酸酶。纯化分离：苯酚，氯仿，异戊醇。苯酚/氯仿可抽提去除杂物。洗涤：70乙醇。沉淀：异丙醇、无水乙醇。乙酸钠（pH4.0）：维持变性的细胞裂解液的pH值，沉淀RNA。此外还常用氯化锂选择沉淀RNA。,RNA提取的通用方法,10,TRIzol试剂提取RNA、DNA,TRIzol试剂有多组分分离作用,最大特点是可同时分离一个样品的RNADNA蛋白质TRIzol使样品匀浆化,因同时含有RNase抑制剂可保持RNA的完整性.加入氯仿离心后,溶液分为水相和有机相水相：RNA-异丙醇沉淀回收；中间层：DNA-乙醇沉淀回收；有机相：蛋白质-异丙醇沉淀回收,11,NaI法提取外周血细胞基因组DNA,实验结果：260=0.123Abs;280=0.086AbsRatio=1.43实验结果分析：D

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