《食品微生物检验技术》课件-项目一 试剂与培养基配制

1.pH指示剂的配制技术目录/Contents1pH指示剂的配制技术分类物质的量浓度溶液的配制01pH指示剂的配制分类1．酸碱指示剂指示溶液中H+浓度的变化，是一种有机弱酸或有机弱碱，其酸性和碱性具有不同的颜色。指示剂酸HIn在溶液中的离解常数Ka=[H+][In-]/[HIn]，即溶液的颜色决定于[In-]/[HIn]，而[In-]/[HIn]又决定于[H+]。01pH指示剂的配制分类2．金属指示剂络合滴定法所用的指示剂，大多是染料，它在一定pH下能与金属离子络合呈现一种与游离指示剂完全不同的颜色而指示终点。比如淀粉指示剂。01pH指示剂的配制分类3．氧化还原指示剂为氧化剂或还原剂，它的氧化形与还原形具有不同的颜色，在滴定中被氧化（或还原）时，即变色，指示出溶液电位的变化。如铬黑T指示剂、钙指示剂。02常见指示剂的配制1．甲基紫指示剂称取甲基紫10mg，加水100mL溶解即得。本指示剂有三个变色范围：第一变色范围PH=0.13~0.5，颜色由黄至绿；第二变色范围pH=1.0~1.5，颜色由绿至蓝；第三变色范围pH=2.0~3.0，颜色由蓝至紫色。02常见指示剂的配制2．甲基橙指示剂称取甲基橙0.1g，溶解于100mL水中。变色范围pH=3.1-4.4，颜色变化由红至黄色。3．溴甲酚绿（溴甲酚蓝）指示剂此指示剂有两种配制方法，一种是称取溴甲酚绿0.1g，溶于100mL20%（体积分数）乙醇中；另一种是称取溴甲酚绿0.1g，溶于100mL水中，加入0.05mol/L氢氧化钠溶液2.9mL。变色范围是pH=3.8~5.4，颜色由黄至蓝色。02常见指示剂的配制4．溴甲酚紫指示剂称取溴甲酚紫0.04g，0.01mol/LNaOH7.4g，加入蒸馏水92.6mL。溴甲酚紫pH5.2-5.6，颜色由黄变紫，常用浓度为0.04％。5．甲基红指示剂称取0.1g或0.2g甲基红，溶于100mL60%（体积分数）乙醇中即可。变色范围为pH=4.4~6.2，颜色由红至黄色。02常见指示剂的配制6．酚红指示剂称取酚红0.1g，溶于100mL20%（体积分数）乙醇中；第二种配制方法为：称取酚红0.1g溶于100mL水中，加入0.05mol/L氢氧化钠溶液5.7mL。其变色范围是pH=6.8-8.0，颜色由黄色至红色。7．酚酞指示剂称取酚酞lg，溶于100mL60%（体积分数）乙醇中。变色范围pH=8.2-10.0，颜色由无色至紫红。02常见指示剂的配制8．甲基红溴甲酚绿混合指示剂量取1g/L溴甲酚氯乙醇溶液50mL，让它再与1g/L甲基红乙醇溶液10mL混合，所制得的混合液即是甲基红溴甲酚绿混合指示剂。变色点PH=5.1，酸性色为酒红色，碱性色为绿色。9．甲基红亚甲基蓝指示剂将2g/L的甲基红乙醇溶液与1g/L的亚甲基蓝乙醇溶液等体积混合，混合液即是甲基红亚甲基蓝指示剂。其变色点是PH=5.4，酸性色为红紫色，碱性色为绿色。PH=5.2为红紫色，PH=5.4为暗紫色，PH=5.6为绿色。02常见指示剂的配制10．5g/L的铬酸钾指示剂称取铬酸钾5g，溶于100mL水即可。11．淀粉指示剂称取1g可溶性淀粉，加入10mL冷水调成悬浮液，倒入正在沸腾的100mL水中，冷却备用。12．钙红指示剂称取钙红0.1g，加水100mL，或者钙红液与乙醇按1:1等体积溶解即得。02常见指示剂的配制13．麝香草酚蓝指示剂称取麝香草酚蓝0.1g溶于100mL20%（体积分数）乙醇中；还有一种配制方法，即称取麝香草酚蓝0.1g溶于100mL水中，加入0.05mol/L氢氧化钠溶液4.3mL。第一变色范围pH=1.2~2.8，颜色由红至黄；第二变色范围pH=8.0~9.6，颜色由黄至蓝色。02常见指示剂的配制14．麝香草酚酞指示液取麝香草酚酞0.1g，加乙醇100mL使溶解，即得。变色范围pH9.3~10.5g（无色→蓝）。麝香草酚蓝指示液取麝香草酚蓝0.1g，加0.05mol/L氢氧化钠溶液4.3mL使溶解，再加水稀释至200mL，即得。变色范围pH1.2~2.8(红→黄)；15．中性红指示剂称量中性红0.04g，加入95％乙醇28mL，蒸馏水72mL，混匀即可。中性pH6.8~8颜色由红变黄，常用浓度为0.04％。02常见指示剂的配制16．孔雀绿指示液取孔雀绿0.3g，加冰醋酸100mL使溶解，即得。变色范围pH0.0~2.0，由黄色变为绿色；PH11.0-13.5，由绿色变为无色。17．甲酚红指示液取甲酚红0.1g，加0.05mol/L氢氧化钠溶液5.3mL使溶解，再加水稀释至100mL，即得。变色范围pH7.2~8.8由黄变红。02常见指示剂的配制18．刚果红指示液取刚果红0.5g,加10％乙醇100mL使溶解，即得。变色范围pH3.0~5.0由蓝变红。19．苏丹Ⅳ指示液取苏丹Ⅳ0.5g,加氯仿100mL使溶解，即得。20．间甲酚紫指示液取间甲酚紫0.1g,加0.01mol/L氢氧化钠溶液10mL使溶解，再加水稀释至100mL，即得。变色范围pH7.5~9.2由黄色变紫色。02常见指示剂的配制21．茜素磺酸钠指示液取茜素磺酸钠0.1g，加水100mL使溶解,即得。变色范围pH3.7~5.2由黄变紫。22．萘酚苯甲醇指示液取α-萘酚苯甲醇0.5g，加冰醋酸100mL使溶解，即得。变色范围pH8.5-9.8（黄→绿）23．铬黑T指示剂取铬黑T0.1g，加氯化钠10g，研磨均匀，即得。02常见指示剂的配制24．喹哪啶红指示液取喹哪啶红0.1g，加甲醇100mL使溶解，即得。变色范围pH1.4~3.2由无色变成红色。25．溴酚蓝指示液取溴酚蓝0.1g，加0.05mol/L氢氧化钠溶液3.0mL使溶解，再加水稀释至200mL，即得。变色范围pH2.8~4.6从黄色变为蓝绿色。02常见指示剂的配制26．邻二氮菲指示液取硫酸亚铁0.5g，加水100mL使溶解，加硫酸2滴与邻二氮菲0.5g,摇匀，即得。本液应临用新制。27．钙紫红素指示剂取钙紫红素0.1g，加无水硫酸钠10g，研磨均匀，即得。28．荧光黄指示剂取荧光黄0.1g，加乙醇100mL使溶解，即得该指示剂。02常见指示剂的配制29．结晶紫指示剂取结晶紫0.5g，加冰醋酸100mL使溶解，即得。30．硫酸铁铵指示剂取硫酸铁铵8g，加水100mL使溶解，即得。31．钙紫红素指示剂取钙紫红素0.1g，加无水硫酸钠10g，研磨均匀，即得。2.常见培养基的配方及其特点目录/Contents1基础培养基培养基鉴别和选择培养基23加富培养基01基础培养基（1）马铃薯葡萄糖培养基（简称PDA）（分离培养霉菌用）

马铃薯300g蔗糖（或葡萄糖）20g

琼脂20g蒸馏水1000mLpH自然培养基的配制：将马铃薯去皮切块，加1000mL蒸馏水，煮沸10～20min。用纱布过滤，补加蒸馏水至1000mL。加入葡萄糖和琼脂，加热溶化，分装，121℃高压灭菌20min。01基础培养基

（2）牛肉膏蛋白胨培养基（培养细菌用）牛肉膏3g蛋白胨5g氯化钠10g琼脂15~20gpH7.0~7.2水1000mL121℃灭菌20min。01基础培养基（3）吲哚培养基（蛋白胨水）用于细菌靛基质试验胰酪蛋白胨10g氯化钠5gL-色氨酸0.5g蒸馏水1000mLpH7.4。121℃灭菌15min。（4）玉米粉琼脂（培养真菌用）玉米浸粉7.0g琼脂15.0gpH值6.0±0.201基础培养基（5）月桂基硫酸盐胰蛋白胨MUG培养基胰蛋白胨20.0g氯化钠5.0g乳糖5.0g磷酸氢二钾2.75g月桂基硫酸钠0.1g磷酸二氢钾2.75gpH值6.8±0.2温度25℃（6）改良山梨醇麦康凯(CT-SMAC)琼脂蛋白胨20.0g山梨醇10.0g三号胆盐1.5g氯化钠5.0g中性红0.03g结晶紫0.001g琼脂15.0gpH值7.2±0.201基础培养基（7）营养琼脂斜面蛋白胨5.0g牛肉粉3.0g琼脂15.0gpH值7.3±0.1（8）PSE琼脂（用于粪链球菌的选择性分离和计数（SN标准）蛋白胨20.0g酵母浸粉5.0g牛胆汁物10.0g柠檬酸钠1.0g氯化钠5.0g柠檬酸铁铵0.5g叠氮化钠0.25g七叶苷1.0g琼脂15.0gpH值7.1±0.201基础培养基（9）沙氏琼脂培养基（用于真菌检测）蛋白胨10.0g葡萄糖40.0g琼脂20.0gpH值5.6±0.2（10）葡萄糖琼脂胰蛋白胨10.0g酵母粉1.5g氯化钠5.0g溴甲酚紫0.015g葡萄糖10.0g琼脂12.0gpH值6.9-7.101基础培养基（11）葡萄糖胰蛋白胨琼脂胰酪蛋白胨10.0g葡萄糖5.0g琼脂15.0g溴甲酚紫0.04pH值6.7±0.1（12）LB（Luria-Bertani）培养基蛋白胨10g酵母膏5g氯化钠10g蒸馏水1000mLpH7.0。121℃灭菌20min。01基础培养基（13）麦氏（Meclary）琼脂（酵母菌）葡萄糖1g氯化钾1.8g酵母浸膏2.5g醋酸钠8.2g琼脂15-20g蒸馏水1000mL113℃灭菌20min。（14）玉米粉蔗糖培养基玉米粉60g磷酸二氢钾3g维生素B1100mg蔗糖10g七水合硫酸镁1.5g水1000mL121℃灭菌30min，维生素B1单独灭菌15min后另加。01基础培养基（15）马丁氏（Martin）琼脂培养基（分离真菌用）葡萄糖10g蛋白胨5g磷酸二氢钾1g七水合硫酸镁0.5g1/3000孟加拉红（rosebengal，玫瑰红水溶液）100mL琼脂15~20g蒸馏水800mLpH自然112℃灭菌30min。临用前加入0.03%链霉素稀释液100mL，使每毫升培养基中含链霉素30μg。01基础培养基（16）查氏（Czapek）培养基（培养霉菌用）硝酸钠2g磷酸氢二钾1g氯化钾0.5g硫酸镁0.5g硫酸亚铁0.01g蔗糖30g琼脂15~20g水1000mLpH自然121℃灭菌20min。01基础培养基（17）无氮培养基（自生固氮菌、钾细菌）甘露醇（或葡萄糖）10g磷酸二氢钾0.2g七水合硫酸镁0.2g氯化钠0.2g二水合硫酸钙0.2g碳酸钙5g蒸馏水1000mLpH7.0~7.2。113℃灭菌30min。01基础培养基（18）营养肉汤（NB）（一般细菌培养,转种,复壮,增菌等（GB标准）（19）乳糖蛋白胨培养液（“水的细菌学检查”用）（20）煌绿乳糖胆盐肉汤（BGLB）（用于大肠菌群、大肠杆菌的测定(GB2008、SN标准)）（21）BBL琼脂培养基（用于双岐杆菌分离培养（GB标准））（22）疱肉培养基基础（加入牛肉粒,用于肉毒梭菌及厌氧梭状芽孢杆菌的检验(GB标准)）（23）柠檬酸盐培养基（用于测定血清，血浆及相关液体等样本）02鉴别和选择培养基（1）伊红美蓝培养基（EMB培养基）蛋白胨10.0g乳糖10.0g磷酸氢二钾2.0g琼脂15.0g伊红0.4g美蓝0.065gpH值7.1±0.2培养基的配制：将已灭菌的蛋白胨水培养基（pH7.6）加热熔化，冷却至60℃左右时，再把已灭菌的乳糖溶液，伊红水溶液及美蓝水溶液按上述量以无菌操作加入。摇匀后，立即倒平板。乳糖在高温灭菌易被破坏必须严格控制灭菌温度，115℃灭菌20min。02鉴别和选择培养基（1）伊红美蓝培养基（EMB培养基）蛋白胨10.0g乳糖10.0g磷酸氢二钾2.0g琼脂15.0g伊红0.4g美蓝0.065gpH值7.1±0.2培养基的配制：将已灭菌的蛋白胨水培养基（pH7.6）加热熔化，冷却至60℃左右时，再把已灭菌的乳糖溶液，伊红水溶液及美蓝水溶液按上述量以无菌操作加入。摇匀后，立即倒平板。乳糖在高温灭菌易被破坏必须严格控制灭菌温度，115℃灭菌20min。02鉴别和选择培养基（1）伊红美蓝培养基（EMB培养基）蛋白胨10.0g乳糖10.0g磷酸氢二钾2.0g琼脂15.0g伊红0.4g美蓝0.065gpH值7.1±0.202鉴别和选择培养基（2）复红亚硫酸钠培养基（远藤氏培养基）（3）SS琼脂（用于沙门氏菌，志贺氏菌的选择性分离培养）（4）卵黄琼脂培养基基础（用于肉毒梭菌、产气荚膜梭菌的分离培养（GB标准））(5)沙门氏菌显色培养基（用于沙门氏菌的显色培养，沙门氏菌显紫色）03加富培养基（1）EEM培养基（用于致病性大肠杆菌的增菌培养和肠杆菌的增菌培养）（2）肠道菌增菌肉汤（EE）（用于肠道菌的增菌培养(GB标准)）（3）MEE肉汤（用于肠道菌的选择性增菌培养(SN标准)）（4）THB培养基（用于链球菌增菌培养）（5）肠球菌肉汤（用于肠球菌增菌培养）（6）改良Giolitti-Cantobi肉汤（用于金黄色葡萄球菌的增菌培养）（7）普通肉汤培养基（用于金黄色葡萄球菌的增菌培养（SN标准））（8）胰蛋白胨大豆肉汤（增菌培养）常用培养基的制备目录/Contents1配制培养基的准备工作培养基制备培养基制备的基本程序201配制培养基的准备工作（1）水和药品的准备配制培养基用的水最好用蒸馏水，但精细的试验需要使用重蒸馏水。化学药品要用分析纯或化学纯，称量要准确，每称一种药品都必须准确记载，以便事后查对。01配制培养基的准备工作（2）器皿和用具的准备器皿种类为：不同型号的试管、烧杯、锥形瓶、三角瓶、玻璃棒、滴管、平皿、培养瓶、培养基分装器、移液管、容量瓶等。制备培养基所用的试管、烧杯、锥形瓶、三角瓶、玻璃棒、滴管、平皿、培养瓶等玻璃仪器在使用前，先要用肥皂水洗刷，再用清水反复冲洗干净，最后用蒸馏水冲一遍，晾干或烘干备用。02培养基制备的基本程序（1）培养基配方的选定（2）培养基的制备记录每制备一次培养基都要作记录，包括培养基名称，配方及其来源和各种成份的编号，还要记录好pH值、消毒温度、消毒时间和制备的日期及其制备者等，记录应复制一份，原记录保存备查，复制记录随制备好的培养基一同存放、以防发生混乱。（3）培养基成分的称取（4）培养基各成份的混合和溶化02培养基制备的基本程序（5）培养基pH的初步调整用5%的NaOH或5%HC1将培养基pH调至所需范围。（6）培养基的过滤02培养基制备的基本程序（7）培养基的分装培养基的分装，应按使用的目的和要求，分装于试管、烧瓶等适当容器内。分装量不得超过容器总容积的2/3。容器口可用垫有防湿纸的棉塞封堵，其外还须用防水纸包扎。（8）培养基的灭菌一般培养基可采用121°C高压蒸汽灭菌15分钟的方法。

（9）培养基的质量测试（10）培养基的保存将灭菌后的培养基放入37℃的恒温培养箱内培养24h，再检验灭菌效果，无污染者方可使用。

3.常用染色液的配制目录/Contents1常用染色液的配制染色液01常用染色液的配制1.吕氏碱性美蓝染色液美蓝0.3g95％乙醇30mL0.01％氢氧化钾溶液100mL将美蓝溶解于乙醇中，然后于氢氧化钾溶液混合。染色时，先将涂片在火焰上固定，待冷却后滴加染液，染1min~3min，水洗，待干，镜检。01常用染色液的配制2.奥尔特氏荚膜染色液（1）成分沙黄3g蒸馏水100mL用乳钵研磨溶解。01常用染色液的配制（2）染色法将涂片在火焰上固定，滴加染色液，并加热至产生蒸汽后，继续染3min，水洗，待干，镜检。（3）结果炭疽芽孢杆菌菌体呈赤褐色，荚膜呈黄色。01常用染色液的配制3.瑞氏染色液（2015年新法）（1）成分瑞氏色素0.1g甲醇60mL用乳钵研磨溶解01常用染色液的配制3.瑞氏染色液（2015年新法）（2）染色法①待涂片自然干燥后，滴加染色液，固定1min。②加入等量磷酸盐缓冲液，轻轻晃动玻片或采用其他方式混合，使磷酸盐缓冲液与瑞氏染液混匀静置；③再用蒸馏水从一端轻轻冲洗，待干燥后，镜检。01常用染色液的配制4.革兰氏染色法（1）染色液①结晶紫染色液结晶紫1g95％乙醇20mL1％草酸铵水溶液80mL将结晶紫溶解于乙醇中，然后与草酸铵溶液混合。01常用染色液的配制②革兰氏碘液碘1g碘化钾2g蒸馏水300mL将碘与碘化钾先进行混合，加入蒸馏水少许，充分振摇，待完全溶解后，在加蒸馏水至300mL。01常用染色液的配制③沙黄复染法染色液沙黄0.25g95％乙醇10mL蒸馏水90mL将沙黄溶解于乙醇中，然后用蒸馏水稀释。01常用染色液的配制（2）染色法①将涂片在火焰上固定，滴加结晶紫染色液，染1min，水洗；②滴加革兰氏碘液，作用1min，水洗；③滴加95％乙醇脱色，约30s；或将乙醇滴满整个涂片，立即倾去，再用乙醇滴满整个涂片，脱色10s；④水洗，滴加复染液，复染1min，水洗，待干，镜检。（3）结果革兰氏阳性菌呈紫色，革兰氏阴性菌呈红色。01常用染色液的配制5.耐酸性染色法（1）染色液①石炭酸品红染色液碱性品红0.3g95％乙醇10mL5％苯酚水溶液90mL将品红溶解于乙醇中，然后与苯酚溶液混合。01常用染色液的配制②3％盐酸-乙醇浓烟酸3mL95％乙醇97mL③复染液吕氏碱性美蓝染色液01常用染色液的配制（2）染色法①将涂片在火焰上固定，滴加石炭酸品红染色液，徐徐加热至有蒸汽出现，但切不可使沸腾。染液因蒸发减少时，应随时添加。染5min，倾去染液，水洗；②滴加盐酸-乙醇脱色，直至无红色脱落为止，（所需时间视涂片厚薄而定，一般为1min~3min），水洗；③加吕氏碱性美蓝染色液，复染30min，水洗，待干，镜检。（3）结果耐酸性细菌呈红色，其他细菌、细胞等物质呈蓝色。01常用染色液的配制6.柯氏染色法（1）染色液成分0.5％沙黄液0.5％孔雀绿液（2）染色法①将涂片在火焰上固定，滴加0.5％沙黄液，并加热至出现气泡，约2min~3min，水洗；②滴加0.5％孔雀绿液，复染40s~50s，水洗，待干，镜检。（3）结果布氏杆菌呈红色，其他细菌及细胞呈绿色。01常用染色液的配制7.鞭毛染色法（1）染色液的配制①甲液称丹宁酸5g、氯化高铁（FeCl3）1.5g，溶于100mL蒸馏水中，待溶解后加入1％的氢氧化纳溶液1mL和15％的甲醛溶液2mL。01常用染色液的配制7.鞭毛染色法②乙液称2g硝酸银溶于100mL蒸馏水中。在90mL乙液中滴加浓氢氧化铵溶液，到出现沉淀后，继续滴加使其变为澄清，然后用其余10mL乙液小心滴加至澄清液中，至出现轻微雾状为止（此为关键性操作，应特别小心）。滴加氢氧化铵和用剩余乙液回滴时，要边滴边充分摇荡，染液当天配，当天使用，2d~3d后基本无效。01常用染色液的配制（2）染色法在风干的载玻片上滴加甲液，4min~6min后，用蒸馏水轻轻冲净，再加乙液，缓缓加热至冒汽，维持约半分钟（加热时注意勿出现干燥面），在菌体多的部位可呈深褐色到黑色，停止加热，用水冲净，干后镜检。菌体及鞭毛为深褐色到黑色。01常用染色液的配制8．考马斯亮蓝R-250染色液考马斯亮蓝法测定蛋白质浓度,是利用蛋白质―染料结合的原理,定量的测定微量蛋白浓度的快速、灵敏的方法。01常用染色液的配制8．考马斯亮蓝R-250染色液考马斯亮蓝R-250染色液的配置方法（1L的量）：（1）称取1g考马斯亮蓝R-250，置于1L烧杯中。（2）量取250mL的异丙醇加入上述烧杯中，搅拌溶解。（3）加入100mL的冰乙醋酸，均匀搅拌。（4）加入650mL的去离子水，均匀搅拌。（5）用滤纸出去颗粒物质后，室温保存。4.缓冲液的配制目录/Contents1缓冲液的配制缓冲液01缓冲液的配制1．磷酸盐缓冲液(简称PBS)磷酸钠缓冲液是常用的一种阻碍溶液pH变化的缓冲溶液，其盐溶液中含有氯化钠，磷酸盐，磷酸盐，氯化钾和磷酸钾组成。（1）常规磷酸盐缓冲液①成分磷酸二氢钾34g，1mol/L氢氧化钠溶液175mL，蒸馏水825mL01缓冲液的配制1．磷酸盐缓冲液(简称PBS)②配置先将磷酸盐溶解于500mL蒸馏水中，用1mol/L氢氧化钠溶液校正pH为7.2后，再用蒸馏水稀释至1000mL。③稀释液取储存液1.25mL，用蒸馏水稀释至1000mL。分装每瓶100mL或每管10mL，于121℃高压灭菌15min，备用。01缓冲液的配制（2）改良磷酸盐缓冲液①成分磷酸氢二钠34g，山梨醇10.0g，磷酸二氢钠1.2g，氯化钠5.0g，蒸馏水1000mL，胆盐1.5g。②制法将磷酸钠及氯化钠溶于蒸馏水中，再加入山梨醇及胆盐，溶解后，校正PH值为7.6，分装试管。于121℃高压灭菌15min，备用。01缓冲液的配制（3）明胶磷酸缓冲液①成分磷酸氢二钠4.0g，明胶2.0g，蒸馏水1000mL。②制法加热溶解，校正PH为6.2，于121℃高压灭菌15min。01缓冲液的配制（4）磷酸-三乙胺缓冲液取磷酸约4mL与三乙胺约7mL，加50％甲醇稀释至1000mL，用磷酸调节pH值至3.2，即得磷酸-三乙胺缓冲液。01缓冲液的配制（5）PH值在2.0~8.0范围内常用磷酸盐缓冲液的配制方法①磷酸盐缓冲液(pH2.0)：甲液:取磷酸16.6mL，加水至1000mL，摇匀。乙液：取磷酸氢二钠71.63g，加水使溶解成1000mL。取上述甲液72.5mL与乙液27.5mL混合，摇匀，即得。②磷酸盐缓冲液(pH2.5)：取磷酸二氢钾100g，加水800mL，用盐酸调节pH至2.5，用水稀释至1000mL。01缓冲液的配制（5）PH值在2.0~8.0范围内常用磷酸盐缓冲液的配制方法③磷酸盐缓冲液(pH5.0)：取0.2mol/L磷酸二氢钠溶液一定量，用氢氧化钠试液调节pH值至5.0，即得。④磷酸盐缓冲液(pH5.8)：取磷酸二氢钾8.34g与磷酸氢二钾0.87g,加水使溶解成1000mL，即得。01缓冲液的配制（5）PH值在2.0~8.0范围内常用磷酸盐缓冲液的配制方法⑤磷酸盐缓冲液(pH6.5)：取磷酸二氢钾0.68g，加0.1mol/L氢氧化钠溶液15.2mL，用水稀释至100mL，即得。⑥磷酸盐缓冲液(pH6.8)取0.2mol/L磷酸二氢钾溶液250mL，加0.2mol/L氢氧化钠溶液118mL，用水稀释至1000mL，摇匀，即得。⑦磷酸盐缓冲液(pH7.0)取磷酸二氢钾0.68g，加0.1mol/L氢氧化钠溶液29.1mL，用水稀释至100mL，即得。01缓冲液的配制⑧磷酸盐缓冲液(pH7.8)：甲液：取磷酸氢二钠35.9g，加水溶解，并稀释至500mL。乙液：取磷酸二氢钠2.76g，加水溶解，并稀释至100mL。取上述甲液91.5mL与乙液8.5mL混合，摇匀，即得。⑨磷酸盐缓冲液(pH7.8-8.0)：取磷酸氢二钾5.59g与磷酸二氢钾0.41g，加水使溶解成1000mL，即得。01缓冲液的配制（6）0.2mol/L的磷酸-柠檬酸缓冲液母液A（0.2mol/L的Na2HPO4

溶液）：称取143.256g的Na2HPO4•12H2O，用去离子水定容至2L。母液B（0.1mol/L的柠檬酸溶液）：称取柠檬酸42.028g用去离子水溶解定容至2L。01缓冲液的配制（6）0.2mol/L的磷酸-柠檬酸缓冲液母液A（0.2mol/L的Na2HPO4

溶液）：称取143.256g的Na2HPO4•12H2O，用去离子水定容至2L。母液B（0.1mol/L的柠檬酸溶液）：称取柠檬酸42.028g用去离子水溶解定容至2L。01缓冲液的配制2.醋酸盐缓冲液：（1）醋酸-醋酸钠缓冲液①醋酸-醋酸钠缓冲液(pH3.7)取无水醋酸钠20g，加水300mL溶解后，加溴酚蓝指示液1mL及冰醋酸60~80mL，至溶液从蓝色转变为纯绿色，再加水稀释至1000mL，即得。01缓冲液的配制2.醋酸盐缓冲液：（1）醋酸-醋酸钠缓冲液②醋酸-醋酸钠缓冲液(pH4.6)取醋酸钠5.4g，加水50mL使溶解，用冰醋酸调节pH值至4.6，再加水稀释至100mL，即得。01缓冲液的配制（6）0.2mol/L的磷酸-柠檬酸缓冲液③pH6.6的缓冲液取727.5mL母液A，与272.5mL的母液B混匀即可。并将其放于4℃冰箱保存。01缓冲液的配制③醋酸-醋酸钠缓冲液(pH6.0)取醋酸钠54.6g，加1mol/L醋酸溶液20mL溶解后，加水稀释至500mL，即得。（2）醋酸-醋酸钾缓冲液取醋酸钾14g，加冰醋酸20.5mL，再加水稀释至1000mL，即得pH=4.3的缓冲液。01缓冲液的配制（3）醋酸-醋酸铵缓冲液①醋酸-醋酸铵缓冲液（PH3.5）取醋酸铵25g，加水25mL溶解后，加7mol/L盐酸溶液38mL，用2mol/L盐酸溶液或5mol/L氨溶液准确调节pH值至3.5(电位法指示)，用水稀释至100mL，即得。01缓冲液的配制（3）醋酸-醋酸铵缓冲液②醋酸-醋酸铵缓冲液(pH4.5)取醋酸铵7.7g，加水50mL溶解后，加冰醋酸6mL与适量的水使成100mL，即得。01缓冲液的配制③醋酸-醋酸铵缓冲液(pH6.0)取醋酸铵100g，加水300mL使溶解，加冰醋酸7mL，摇匀即得。（4）醋酸-钾盐缓冲液(pH3.0)取冰醋酸50mL，加水800mL混合后，用氢氧化钾调节pH值至3.0，再加水稀释至1000mL，即得。01缓冲液的配制3．硼酸盐缓冲液（1）硼酸-氯化钙缓冲液(pH8.0)取硼酸0.572g与氯化钙2.94g，加水约800mL溶解后,用1mol/L盐酸溶液约2.5mL调节pH值至8.0，加水稀释至1000mL，即得。01缓冲液的配制（2）硼酸-碳酸钠缓冲液(pH=10.8~11.2)取无水碳酸钠5.30g，加水使溶解成1000mL；另取硼酸1.91g，加水使溶解成100mL。临用前取碳酸钠溶液973mL与硼酸溶液27mL，混匀，即得。（3）硼酸-氯化钾缓冲液(pH9.0)取硼酸3.09g，加0.1mol/L氯化钾溶液500mL使溶解，再加0.1mol/L氢氧化钠溶液210mL，即得。01缓冲液的配制4．柠檬酸盐缓冲液取枸橼酸4.2g，加1mol/L的20％乙醇制氢氧化钠溶液40mL使溶解，再用20％乙醇稀释至100mL，即得。（1）柠檬酸盐缓冲液(pH6.2)取2.1％枸橼酸水溶液，用50％氢氧化钠溶液调节pH值至6.2，即得所需溶液。01缓冲液的配制（2）柠檬酸-氢氧化钠-盐酸缓冲液（PH2.2）

称取210g柠檬酸（C6H8O7•H2O）84g氢氧化钠NaOH，加水溶解，再用量筒量取160mL的浓盐酸，混匀，加水定容至10L即得PH=2.2的缓冲液。使用时可以每升中加入1g酚，若最后pH有变化，再用少量50%氢氧化钠溶液或浓盐酸调节，冰箱保存。01缓冲液的配制（3）柠檬酸-柠檬酸钠缓冲液取9.2mL0.1M柠檬酸和10.8mL0.1M柠檬酸钠溶液混合，即得PH=4.8的缓冲液。（4）柠檬酸-磷酸氢二钠缓冲液（PH=5.0）取10.30mL0.2MNa2HPO4液和9.70mL0.1M柠檬酸混合，即得PH=5.0的缓冲液。01缓冲液的配制（5）柠檬酸－磷酸氢二钠缓冲液(pH4.0)甲液：取枸橼酸21g或无水枸橼酸19.2g,加水使溶解成1000mL，置冰箱内保存。乙液：取磷酸氢二钠71.63g，加水使溶解成1000mL。取上述甲液61.45mL与乙液38.55mL混合，摇匀，即得。01缓冲液的配制5．巴比妥缓冲液（1）巴比妥缓冲液(pH7.4)取巴比妥钠4.42g，加水使溶解并稀释至400mL，用2mol/L盐酸溶液调节pH值至7.4，过滤即得。（2）巴比妥缓冲液(pH8.6)取巴比妥5.52g与巴比妥钠30.9g，加水使溶解成2000mL，即得。01缓冲液的配制5．巴比妥缓冲液（3）巴比妥-氯化钠缓冲液(pH7.8)取巴比妥钠5.05g，加氯化钠3.7g及水适量使溶解，另取明胶0.5g加水适量，加热溶解后并入上述溶液中。然后用0.2mol/L盐酸溶液调节pH值至7.8，再用水稀释至500mL，即得。01缓冲液的配制6．三羟甲基氨基甲烷缓冲液（1）三羟甲基氨基甲烷缓冲液(pH8.0)取三羟甲基氨基甲烷12.14g，加水800mL，搅拌溶解，并稀释至1000mL，用6mol/L盐酸溶液调节pH值至8.0，即得。（2）三羟甲基氨基甲烷缓冲液(pH8.1)取氯化钙0.294g，加0.2mol/L三羟甲基氨基甲烷溶液40mL使溶解，用1mol/L盐酸溶液调节pH值至8.1，加水稀释至100mL，即得。01缓冲液的配制（3）三羟甲基氨基甲烷缓冲液(pH9.0)取三羟甲基氨基甲烷6.06g，加盐酸赖氨酸3.65g，氯化钠5.8g，乙二胺四醋酸二钠0.37g，再加水溶解使成1000mL，调节pH值至9.0，即得。01缓冲液的配制7．氨－氯化铵缓冲液（1）氨－氯化铵缓冲液(pH8.0)取氯化铵1.07g，加水使溶解成100mL，再加稀氨溶液(1→30)调节pH值至8.0，即得。（2）氨－氯化铵缓冲液(pH10.0)取氯化铵5.4g，加水20mL溶解后，加浓氯溶液35mL，再加水稀释至100mL，即得。01缓冲液的配制8．甲酸钠缓冲液(pH3.3)取2mol/L甲酸溶液25mL，加酚酞指示液1滴，用2mol/L氢氧化钠溶液中和，再加入2mol/L甲酸溶液75mL，用水稀释至200mL，调节pH值至3.25~3.30，即得。9．邻苯二甲酸盐缓冲液(pH5.6)取邻苯二甲酸氢钾10g，加水900mL，搅拌使溶解，用氢氧化钠试液(必要时用稀盐酸)调节pH值至5.6，加水稀释至1000mL，混匀，即得。5.生化试剂制备目录/Contents1糖（醇）类代谢试验法生化试剂制备氨基酸和蛋白质代谢试验法2呼吸酶类试验3毒性酶类试验401糖（醇）类代谢试验法（1）试验原理：不同的细菌对各种糖醇的分解能力及所产生的代谢产物各不同，有的能分解多种糖醇，有的只能分解1-2种糖醇，有的分解糖醇只产酸不产气，有的分解糖醇能产酸产气，通过这些特点，我们可以鉴别细菌。01糖（醇）类代谢试验法糖发酵培养基主要有：液体糖发酵管、半固体糖发酵管、固体糖发酵管、双糖(或三糖)高层斜面发酵管四类。01糖（醇）类代谢试验法糖发酵试验法的具体操作方法：采用无菌操作法，首先将已分离培养的纯种细菌用接种针或者接种环移取，然后接种在糖发酵管中，如果是半固体培养基，则用接种针作穿刺接种。最后放置于36±1℃温箱内培养，经过一定时间（数小时以至二周之间）的培养，培养过程中每天观察结果，并与指示剂比对即可。01糖（醇）类代谢试验法（3）葡萄糖氧化发酵培养基（O/F）的制备称取蛋白胨2.7克，氯化钠5.0克，0.2%溴麝香酚兰0.03克，琼脂3克，0.3克KH2PO4，葡萄糖10.0克，水1000毫升。加热溶解，121℃高压灭菌20min即可。01糖（醇）类代谢试验法（2）V-P.试验的试验方法首先取3支葡萄糖蛋白胨水培养基，将它们一一编号，第1号接种大肠杆菌，第2号接产气杆菌，第3支接未知菌；然后放入37℃培养箱中培养48h，之后加入40%KOH5-10滴，再加入等量的5%α-萘酚溶液，用力振荡；最后放入37℃温箱中保温30min，以加快反应速度；保温期间注意观察培养基的颜色变化：①当发酵管出现红色者时，称为阳性，记作V-P+②当发酵管为黄色或铜绿色时，称为阴性，记作V-P-。01糖（醇）类代谢试验法（2）V-P.试验的制备方法制备方法：将3%氯化钠胰蛋白胨大豆琼脂生长物接种3%氯化钠MR-VP培养基，36℃士1℃培养48h。取1mL培养物转放到一个试管内，加0.6mL甲液，摇动。加0.2mL乙液，摇动。随意加一点肌酸结晶，4h后观察结果。阳性结果是呈伊红的粉红色。01糖（醇）类代谢试验法

3．甲基红（MR）试验（1）试验原理肠杆菌科各菌属都能发酵葡萄糖，在分解葡萄糖过程中产生丙酮酸，进一步分解中，由于糖代谢的途径不同，可产生乳酸，琥珀酸、醋酸和甲酸等大量酸性产物，可使培养基pH值下降至pH=4.5以下，使甲基红指示剂变红，即为甲基红试验阳性；有的细菌使丙酮酸脱羧后形成酮、醇类中性产物，培养液pH＞5.4，甲基红指示剂呈桔黄色，示为甲基红试验阴性。简而言之，甲基红试验原理就是检测不同细菌分解葡萄糖产酸的能力。01糖（醇）类代谢试验法（2）试验方法首先挑取少许新鲜的待测试验培养物，接种于磷酸盐葡萄糖蛋白胨水培养基中；然后放于36±1℃或30℃（以30℃较好）培养箱中培养3~5天；其中注意，从培养的第48h起，每天要取培养液1mL，加入甲基红指示剂1~2滴，立即观察结果。01糖（醇）类代谢试验法（3）结果观察与记录①呈鲜红色或橘红色为阳性，呈淡红色为弱阳性，记MR+；②呈橘黄色或黄色为阴性，记MR-。从发现阴性并培养至第5天仍为阴性，即可判定结果。（4）试验中所用培养基和试剂的制备①磷酸盐葡萄糖蛋白胨水培养基的制备称取蛋白胨5g，葡糖糖5g，磷酸氢二钾2g，加入蒸馏水1000mL，充分溶解后调pH7.0-7.2，过滤。分装于试管中，每管10mL，121℃灭菌30min。01糖（醇）类代谢试验法②甲基红试剂称取甲基红（Methylred）0.04g，溶于60mL的95％乙醇中，再加入40mL的蒸馏水即可。02氨基酸和蛋白质代谢试验法（1）原理某些细菌能分解蛋白胨中的色氨酸，生成吲哚。吲哚的存在可以用显色反应来表现。吲哚与对二甲基氨基苯甲醛结合，形成玫瑰吲哚，此物质为红色化合物。也就是说，这一试验反应原理包括两个过程，一个是色氨酸分解反应，一个是吲哚反应。02氨基酸和蛋白质代谢试验法（2）试验方法先找取3支胰蛋白水培养基，分别编号，1号接种大肠杆菌，2号接种产气杆菌，第3支接未知菌；然后将三个培养基放于37℃培养箱中培养1~2天；培养完成后，沿试管壁滴加数滴吲哚试剂于培养物液面，观察结果。若结果呈现玫瑰红色，则为阳性反应，记吲哚试验阳性；若结果无红色者，则为阴性反应，记作吲哚阴性。02氨基酸和蛋白质代谢试验法（2）试验方法先找取3支胰蛋白水培养基，分别编号，1号接种大肠杆菌，2号接种产气杆菌，第3支接未知菌；然后将三个培养基放于37℃培养箱中培养1~2天；培养完成后，沿试管壁滴加数滴吲哚试剂于培养物液面，观察结果。若结果呈现玫瑰红色，则为阳性反应，记吲哚试验阳性；若结果无红色者，则为阴性反应，记作吲哚阴性。02氨基酸和蛋白质代谢试验法（2）试验方法与结果①琼脂穿刺法培养基为三糖铁培养基、含硫酸亚铁(或醋酸铅)的半固体培养基两种。操作方法：将试验细菌用接种针沿着管壁穿刺接种到含醋酸铅或硫酸亚铁培养基中，经37℃培养24h-48h后，观察结果。结果：培养基变成黑色则为阳性。当产生硫化氢量少时，为了便于观察结果，在穿刺接种培养时，一定要沿培养基管壁进行。02氨基酸和蛋白质代谢试验法（2）试验方法与结果②醋酸铅试纸法培养基为含胱氨酸的半固体培养基，还需要准备一个浸有醋酸铅的滤纸条。操作方法：待检菌穿刺接种培养基，悬挂醋酸铅纸条，于37℃培养箱中培养24h-48h。结果：如果试纸呈现黑色，则为阳性。此方法比较敏感。02氨基酸和蛋白质代谢试验法3.尿素酶（Urease）试验（2）试验方法挑取大量培养18h~24h的待试菌，浓密涂布接种于尿素琼脂斜面上，不要到达底部，留底部作变色对照。在培养2h、4h和24h三个时间点时，分别观察一次结果。如果培养基变为粉红色则为阳性，颜色不变者即为阴性。倘若初步判断为阴性，则应该继续培养至4天，作最终判定。02氨基酸和蛋白质代谢试验法（3）尿素琼脂培养基的制备①成分蛋白胨1g，琼脂20g，氯化钠5g，葡萄糖1g，磷酸二氢钾2g，0.4%酚红溶液3mL，20%尿素溶液100mL，蒸馏水1000mL。pH7.2±0.1②培养基的配制在蒸馏水或去离子水100mL中，加入上述所有成分（除尿素和琼脂外），混合均匀并校正pH，121℃灭菌15min。冷至50～55℃，加入经除菌过滤的尿素溶液。尿素的最终浓度为2%，最终pH应为7.2±0.1。03呼吸酶类试验（三）呼吸酶类试验1.氧化酶试验（1）试验原理氧化酶使细胞色素C氧化，氧化型细胞色素C再使盐酸二甲基对苯二胺氧化，生成由玫瑰红色变成暗紫色的醌类化合物，它再和α-萘酚结合生成吲哚酚蓝。03呼吸酶类试验（三）呼吸酶类试验（2）试验方法用滴管直接滴加1%盐酸二甲基对苯二胺试剂在培养物上，滴加量为1-2滴；再加入1%α-萘酚-乙醇液1-2滴，于30秒内判定试验结果。如果在30秒内呈现蓝色反应，则为阳性，记作+；如果不变色或为粉红色者，为阴性，记作-。03呼吸酶类试验2.过氧化氢酶试验（1）原理某些细菌能够分泌过氧化氢酶，当加入过氧化氢以后，可将过氧化氢分解生成水和氧气，产生气泡，此为阳性反应。03呼吸酶类试验2.过氧化氢酶试验（2）试验方法取下固体培养基上的新鲜菌落一环，放置在一个干净玻璃片上或者试管上，向其上滴加3%过氧化氢液数滴，立即观察结果。若产生气泡，就是阳性，记为+，若不产生气泡，则为阴性，记-。03呼吸酶类试验3.硝酸盐还原试验（1）原理某些细菌具有还原硝酸盐的能力，能将硝酸盐还原为亚硝酸盐。在酸性条件下，亚硝酸盐可以生成亚硝酸，亚硝酸与对氨基苯磺酸作用，生成重氮苯磺酸，而重氮苯磺酸又与α-萘胺作用，生成红色的化合物，呈红色反应，为阳性反应。03呼吸酶类试验（2）试剂A试剂是对氨基苯磺酸试剂：将对氨基苯磺酸0.8g，溶解于2.5mol/L，乙酸溶液100mL中；B试剂是α-萘胺试剂：将甲萘胺0.5g溶解于2.5mol/L乙酸溶液100mL中。03呼吸酶类试验（3）试验方法取新鲜的纯培养物待检菌，接种在硝酸盐培养基上，于36±1℃培养箱中培养1~4天，每天取2mL培养液，加入等量的A、B试剂混合物各二滴，混和均匀，立即观察结果。若结果是红色，则为阳性，记+；若无红色出现，即为阴性，记-。03呼吸酶类试验4.氰化钾试验（1）原理氰化钾是细菌呼吸酶系统的抑制剂，它能与呼吸酶作用，让酶失去活性，从而抑制细菌的生长，但有的细菌在一定浓度的氰化钾存在时，仍能生长，依此来鉴别细菌。03呼吸酶类试验4.氰化钾试验（2）试验方法取下1环已培养20h~24h的营养肉汤培养液，将其接种到对照培养基及氰化钾培养基内，立即用橡胶塞塞紧，放置于36±1℃培养箱中，培养24h~48h，观察结果。当对照管中有菌生长，同时试验管也有菌生长时，为阳性，记作+；当对照管中有菌生长，而试验管中无菌生长为阴性，记作-。04毒性酶类试验1．溶血试验（1）原理某些细菌在代谢过程中能产生溶血素，可使人或动物的红细胞发生溶解，不同的细菌有不同的溶血反应，借此可鉴别细菌。（2）试验方法方法有平板法和试管法两种，这里只介绍试管法。先把待检菌培养液与2%的羊血球等量混合，然后于36±1℃培养16h-18h，观察其结果。如果溶血，培养液可出现透明状，即为阳性，记作+；如果无溶血现象，则为阴性，记作-。04毒性酶类试验2．血浆凝固酶试验（1）原理致病性葡萄球菌能产生血浆凝固酶，可使血浆中的纤维蛋白原转变成纤维蛋白，附着在细菌的表面，形成凝块；或作用于血浆凝固酶原，使它成为血浆凝固酶，从而使抗凝的血浆发生凝固现象，为阳性。04毒性酶类试验2．血浆凝固酶试验（2）试验方法以试管法为主。即找灭菌小试管3支，向三个试管中各加入1:1体积的血浆－无菌水0.5mL，1支加入被检菌株的营养肉汤培养液0.5mL；其余2支作对照管，其中一支加入金黄色葡萄球菌的营养肉汤培养液0.5mL作阳性对照；另一支加入0.9％氯化钠溶液0.5mL作空白对照。将3个试管同时放在37℃恒温箱或水浴中培养，每0.5h观察一次，4h内无凝固现象者，观察直至24小时。04毒性酶类试验2．血浆凝固酶试验（3）试管法的结果观察与记录空白对照管的血浆流动自如，阳性对照管血浆凝固。若试验管血浆凝固，则为阳性；如果三管均无凝固现象，即为阴性。本试验法所用到的试剂和培养基在血清学反应里介绍过，此处不再赘述。6.物质的量浓度溶液的配制目录/Contents1物质的量浓度溶液的配制物质的量浓度溶液的配制01物质的量浓度溶液的配制（1）计算与称量所称固体质量或量取液体的体积，用托盘天平或电子天平称量固体或用量筒量取液体。（2）溶解或稀释在烧杯中溶解，并用玻璃棒搅拌。（3）转移待溶液冷却到室温，将烧杯中的溶液沿玻璃棒注入容量瓶中。01物质的量浓度溶液的配制（4）洗涤用少量蒸馏水洗涤烧杯内壁和玻璃棒2~3次，并把洗涤液全转移到容量瓶中。（5）定容向容量瓶中加入蒸馏水，在距离刻度2~3cm时，改用胶头滴管滴加蒸馏水至凹液面的最低点与刻度线相平。（6）摇匀并贴签盖好瓶塞，把容量瓶倒转和摇动多次，使得溶液混合均匀。贴好标签，并注明溶液的名称和浓度。01物质的量浓度溶液的配制物质的量浓度溶液的配制关键程序01物质的量浓度溶液的配制操作程序：以配制0.5mol·L－1的NaCl溶液250mL为例01物质的量浓度溶液的配制（4）洗涤用少量蒸馏水洗涤烧杯内壁和玻璃棒2~3次，并把洗涤液全转移到容量瓶中。（5）定容向容量瓶中加入蒸馏水，在距离刻度2~3cm时，改用胶头滴管滴加蒸馏水至凹液面的最低点与刻度线相平。（6）摇匀并贴签盖好瓶塞，把容量瓶倒转和摇动多次，使得溶液混合均匀。贴好标签，并注明溶液的名称和浓度。01物质的量浓度溶液的配制3．误差分析配制溶液时能引起误差的一些操作7.血清学反应试剂制备目录/Contents1基本概念pH指示剂的配制技术血清学鉴定2血清学反应常用试剂和培养基的制备301基本概念血清是指血液凝固析出的淡黄色透明液体。血清蛋白是指为避免抗凝剂的干扰，血液中许多化学成分的分析，都以血清为样品。血清学检验就是利用抗原-抗体反应的显著特异性，进行细菌的鉴别和血清学定型。细菌菌体或鞭毛等抗原的特异性抗体的存在，使得人们可以建立一些快速方法来检测以食品为载体的病原。01基本概念血清学检验指根据抗原与相应的抗体在适宜的条件下，能在体外发生特异性结合的原理，在体外用已知抗体（或抗原）检测抗原（或抗体）。01基本概念

2.血清学反应的一般特点（1）抗原抗体的结合具有特异性，当有共同抗原体存在时，会出现交叉反应。（2）抗原抗体的结合是分子表面的结合，这种结合虽相当稳定，但是可逆的。01基本概念

2.血清学反应的一般特点（3）抗原抗体的结合是按一定比例进行的，只有比例适当时，才能出现可见反应。（4）血清学反应大体分为两个阶段进行，但其间无严格界限。反应速度慢，需几分、几十分以至更长时间。01基本概念3.血清学检验的类型血清学试验可分为血清学鉴定和血清学诊断两部分。血清学试验既可定性，又可定量。用已知抗体（即含特异抗体的免疫血清或单克隆抗体等）检测标本中或分离培养物中未知细菌的种、型或细菌抗原，称为血清学鉴定；而用已知细菌或特异性抗原检测患者血清中有无相应抗体及其效价的动态变化，作为某些感染性疾病的辅助诊断，称为血清学诊断。02血清学鉴定1．凝集反应（1）直接凝集反应①玻片凝集法方法是取已知抗体（诊断血清）滴加在载玻片上，直接从培养基上刮取待检菌混匀于诊断血清中，数分钟后，如出现细菌凝集成块或肉眼可见的颗粒，即为反应阳性。02血清学鉴定1．凝集反应（1）直接凝集反应②试管凝集法此法是一种定量试验方法。多用已知抗原来检测血清中有无相应抗体及其含量。常用于协助诊断某些传染病及进行流行病学调查。02血清学鉴定（2）间接凝集反应法此反应法是指将可溶性抗原或抗体吸附于某种与免疫无关一定大小的颗粒载体表面，制成致敏载体，再与相应抗体或抗原作用，在电解质存在的适宜条件下，被动地使致敏载体凝集的反应。02血清学鉴定（2）间接凝集反应法间接凝集反应主要可分为正向间接凝集试验