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文档简介

实验八黄瓜愈伤组织悬浮培养（一）实验目的掌握悬浮培养的基本过程，熟悉悬浮培养的基本原理和主要应用。（二）实验原理植物细胞悬浮培养是指将游离的植物细胞按一定密度，悬浮在液体培养基中进行培养的方法。在植物细胞悬浮培养中，细胞易黏附成团，形成聚集体。植物细胞的聚集有两种形式：一种发生在培养前期，年幼的细胞迅速分裂，新细胞不能及时分开，便积聚在一起；另一种发生在培养后期，特别是在对数生长后期，由于多糖及蛋白质的分泌，细胞容易相互黏附，甚至还黏附在容器壁上。一个高质量的细胞悬浮培养体系必须是悬浮培养物分散性良好，细胞和细胞团均一性好，培养物生长迅速。

建立良好的植物细胞悬浮培养体系应注意以下方面：选择疏松易碎、生长良好的愈伤组织作为接种体。悬浮培养基一般要添加水解酪蛋白、椰乳、脯氨酸等有机添加物。液体培养容易造成pH下降，要添加pH缓冲剂或及时更换培养基（3-5d）。及时继代，一般1-2周。（三）实验材料和用具

实验材料：黄瓜愈伤组织实验药品：灯用酒精、70％酒精、2％次氯酸钠、无菌水。培养基：MS10：MS（不含琼脂）+2.0mg/L2,4-D+0.4mg/LIAA+0.4mg/L6-BA+0.8mg/LKT+0.4mg/LGA3+0.1%水解酪蛋白实验用具：无菌室、无菌滤纸、无菌培养皿、烧杯、解剖刀、镊子、剪刀、酒精灯、酒精棉花、滴管、记号笔、废液罐、火柴、光照培养箱。（四）实验步骤

进入无菌室，用70％乙醇擦洗双手和工作台面，点燃酒精灯。选取色泽新鲜、质地疏松、生长速度快的愈伤组织约2g，用镊子轻轻夹碎，置盛有20ml液体培养基的三角瓶中。每组6瓶。恒温摇床上以120r/min，25℃、弱光或黑暗条件下培养。

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