广西《百香果品种鉴定技术规程SSR分子标记法》编制说明

广西地方标准《百香果品种鉴定技术规程SSR分子标记法》编制说明（征求意见稿）一、制定意义及任务来源1目的意义目前，通过分子生物学和生物信息学相结合的方法在基因水平对种质资源生物多样性进行鉴定已经成为作物学领域研究热点。2015年4月，农业部印发《农作物品种DNA身份鉴定体系构建实施方案》中指出“现代种业是国家战略性、基础性核心产业，品种创新是现代种业发展的核心，品种保护与管理是品种创新的必要保障。目前，生物技术的快速发展，移动互联、大数据引发的产业变革，为品种管理向田间表型身份鉴定与室内基因型（DNA，即脱氧核糖核酸）身份鉴定相结合的方向发展提供了有力的技术支撑。因此构建品种DNA身份鉴定体系是加强种子管理、保障市场公平竞争、保护农民合法权益、提升品种创新能力和推进种业信息化发展的需要。分子标记鉴定是从DNA水平直接反映品种或亲子间的差异，不受植物发育阶段、组织器官、季节、环境和表达等条件的限制，同时DNA标记具有数量大、多态性丰富等诸多特点，现已在品种鉴定、图谱构建、基因定位等研究中广泛应用。分子标记技术之一SSR即简单重复序列（SimpleSequenceRepeat）或微卫星DNA（MicrosatelliteDNA）。它通常是指以2~5个核甘酸为单位的多次串联重复DNA序列，长度大多在100~200bp。SSR在基因组中分布广泛，由于重复次数的不同而引起不同材料间的差异，通常表现为共显性。SSR两端有一段相对保守的序列，根据保守序列设计引物进行PCR扩增就可获得SSR片段。由于SSR分布广泛，具有多态性好、表现为共显性、对DNA质量要求低且用量少的诸多特点，已经广泛应用于植物遗传多样性分析、杂种鉴定、指纹图谱构建、基因定位等方面。可以用于植物品种权的精准授权、打假与维权，为《种子法》的实施提供了可靠的技术手段。西番莲（Passifloraedulis）是西番莲科（Passifloraceae）西番莲属（PassifloraL.）植物，原产于巴西南部、巴拉圭和阿根廷北部。其又名百香果、热情果，因外形像鸡蛋又名鸡蛋果。中国自20世纪80年代左右开始引种西番莲，在我国种植已经有40多年历史，目前西番莲种植主要分布于台湾、云南、贵州、广西、广东和福建等省。广西是全国最大的百香果种植基地，据《2019年广西壮族自治区国民经济和社会发展统计公报》百香果产量31.28万吨，约占全国60%。主栽品种为“紫香一号”、“台农一号”和“满天星”（芭乐味黄金果）。有研究表明，单一品种的广泛应用，会导致品种的遗传基础狭窄、多样性下降，进而导致对逆境反应的遗传脆弱性，是各种病害严重发生的主要原因。因此，对现有栽种的西番莲进行遗传改良非常必要。植物种质资源是植物遗传研究和新品种培育的重要物质基础。利用分子标记技术对西番莲品种进行遗传多样性分析，从而方便种质资源的深入评价、研究和利用。我国已出台了一系列主要农作物品种的SSR分子标记鉴定行业标准和地方标准，而目前尚无利用SSR标记技术鉴定百香果品种真伪的方法标准。制定相应的广西地方标准，规范利用SSR标记技术鉴定百香果品种真实性，对品种管理、质量监控等方面具有重要意义，且对杂种优势群的划分、种质创新及新品种的选育等具有指导意义。2任务来源2018年由广西检验检疫标准化技术委员会提出的《百香果品种鉴定技术规程SSR分子标记法》的制定计划，2018年广西壮族自治区质量技术监督局在关于下达《2018年第一批广西地方标准制定项目计划的通知》附件文中批准将其列入2018年第一批广西地方标准制定项目计划（序号：2018-0113），由广西益谱检测技术有限公司、广西出入境检验检疫局技术中心、南宁维尔凯生物科技有限公司主要负责起草该地方标准的制定任务。二、工作概述1国内外相关研究西番莲为西番莲科西番莲多年生藤本植物,别名百香果、鸡蛋果,亦有“热情之果”(passionfruit)的雅称。西番莲的花形奇特,色彩艳丽,极具观赏价值.西番莲的嫩枝、嫩叶是一道美味的蔬菜,栽植于庭园,既可观赏、又可食用.西番莲的果实甜酸可口、止渴生津、风味浓郁、芳香怡人,已知含有超过135种香味物质,是世界上已知最芳香的水果之一,有“果汁之王”的美誉。随着人们日益认识到西番莲的重要价值,被誉为第三代新兴果树的西番莲,已在我国热带、亚热带等地区形成了一定的商业规模。随着人们生活水平的提高，对西番莲的消费需求日益增加，其种植面积亦快速增长。国内外虽然对西番莲的化学成分、药理作用、临床应用及离体培养等方面进行研究,但针对西番莲种质资源的研究上相对滞后,严重限制了西番莲种质资源的利用和开发。利用分子标记技术对西番莲品种进行遗传多样性分析，对方便种质资源的深入评价、研究和利用尤为重要。KhétrinSilvaMaciel等利用微卫星标记（SSR）和简单序列间重复序列（ISSR）对不同海拔地区百香果的遗传多样性进行了评价（Geneticdiversityinpassionfruitplantsatdifferentaltitudes）。DianaCarolinaOrtiz•AdrianaBohorquez等利用AFLP和SSR技术在DNA水平上评价毛百香果的种内变异。从Antioquia、Boyaca、Cundinamarca、Huila和Tolima等省的哥伦比亚商业种植园收集了大约60个标本，评价哥伦比亚商业种植园紫色西番莲（百香果）个体遗传变异，不同紫百香果实材料的相似性系数在0.75~1.00之间，平均为0.96，遗传多样性较低（Evaluatingpurplepassionfruit(PassifloraedulisSimsf.edulis)geneticvariabilityinindividualsfromcommercialplantationsinColombia）。应东山、张如莲等采用SSR标记对24份西番莲材料的遗传多样性进行研究，从45对引物组合中筛选出16对扩增带清晰、重复性好的引物组合。结果表明：16对SSR引物共产生68条扩增带，其中58条为多态性条带，多态性条带比率平均为85.3%,24份材料的遗传相似系数(GS)的范围为0.09-1.0;UPGMA法聚类分析结果表明，24份西番莲种质以0.45为阀值可分为7大类。SSR标记丰富的多态性可在西番莲分子生物学领域中广泛应用。吴艳艳，田青兰等为了明确38份广西西番莲种质的亲缘关系，利用11对完全型SSR标记2份野生种和36份栽培种西番莲进行遗传多样性分析。结果表明，11对SSR标记共检测到37个等位基因，每对分子标记检测到的等位基因数为2～4个，平均数为3.37个；预期杂合度（He）为0.32～0.76，平均数为0.53；实际杂合度（Ho）为0.00～0.46，平均数为0.34；PIC为0.26～0.70，平均数为0.46。在遗传相似系数为0.67处，38份西番莲可分为8个类群，说明广西种植的西番莲种质遗传多样性丰富。百香果的SSR标记遗传多样性的相关文献资料有：1、KhétrinSilvaMaciel,PaulaAparecidaMunizdeLima,FernandoZanottiMadalon,atc.Geneticdiversityinpassionfruitplantsatdifferentaltitudes[J].AustralianJournalofCropScience,2019,13(07):1083-1093.2、Evaluatingpurplepassionfruit(PassifloraedulisSimsf.edulis)geneticvariabilityinindividualsfromcommercialplantationsinColombia评价哥伦比亚商业种植园紫色百香果(西番莲)个体遗传变异[J].GenetResourCropEvol.2012,59:1089–1099.3、FernandoH.L.Silva,PatricioR.Munoz,ChristopherI.Vincent,atc.GeneratingrelevantinformationforbreedingPassifloraedulis:geneticparametersandpopulationstructure[J].Euphytica.SpringerScience+BusinessMediaDordrecht20154、HELENALVESPENHA,GUILHERMEDASILVAPEREIRA,MARIAIMACULADAZUCCHI,atc.Developmentofmicrosatellitemarkersinsweetpassionfruit,andidentificationoflengthandconformationpolymorphismswithinrepeatsequences(甜百香果实微卫星标记的开发及重复序列长度和构象多态性的鉴定)[J].PlantBreeding2013,132:731-735.5、ZirlanePortugaldaCosta,CarladeFreitasMunhozandMariaLuciaCarneiroVieira.ReportonthedevelopmentofputativefunctionalSSRandSNPmarkersinpassionfruits(西番莲果实功能性SSR和SNP标记的研究进展)[J].daCostaetal.BMCResNotes,2017,10:445-4546、PaulaMauriBernardes,CatarinyFontanaNicoli,RodrigoSobreiraAlexandre.VegetativeandreproductiveperformanceofspeciesofthegenusPassiflora（西番莲属植物的营养和繁殖性能）[J].ScientiaHorticulturae265(2020)109193.7、GilmaraAlvarengaFachardoOliveiral,JulianoGomesPadua,JulianaLelesCosta.Cross-speciesamplificationofmicrosatellitelocidevelopedforPassifloraedulisSims.inrelatedPassifloraSpecies西番莲微卫星位点跨种扩展研究-在相近西番莲种[J].BRAZILIANARCHIVESOFBIOLOGYANDTECHNOLOGY,2013,56(5):785-792.8、G.S.Pereira,E.S.Nunes,L.D.C.Laperuta,Molecularpolymorphismandlinkageanalysisinsweetpassionfruit,anoutcrossingspecies（异交品种香百香果实的分子多态性与连锁分析.annalsofappliedbiology.2013,162:347-361.9、应东山,张如莲,王明,等.24份西番莲种质SSR分子标记分析[J].热带农业工程.2019,38(5):5-9.10、吴艳艳,田青兰,刘洁云,等.基于完全型SSR标记的西番莲（Passifloraedulis）遗传多样性分析[J].分子植物育种.2019,17(24):8178-8183.11、吴艳艳,黄伟华,黄永才,等.栽培种西番莲完全型SSR的高通量鉴定及标记开发[J].分子植物育种.2018,16(20):6738-6743.12、严佳文,解璞,袁启凤,等.紫果西番莲基因组调查及SSR特征分析[J].分子植物育种.

2020,18(24):8171-8177.13、吴田,谢江,蓝增全.西番莲基因组DNA的提取及ISSR-PCR的优化[J].西南大学学报(自然科学版).2011,33(6):25-29.2标准起草的主要工作过程2.1引物的来源本技术规范编制过程中使用的31对SSR引物主要来源于广西农科院、广西大学等科研院所和高校发表的文章和相关文献。2.2百香果品种类型的收集本实验收集了广西常见的4个百香果品种，分别是原生黄果、杂交种黄金百香果、满天星、台农1号，其主要来源于广西作物遗传改良生物技术重点开放实验室的里建种植基地（南宁-东盟经济技术开发区）。2.3技术路线与实验选取4个广西区内种植的不同百香果品种。用筛选出的31对SSR引物进行PCR扩增，用聚丙烯酰胺凝胶电泳检测，对SSR引物的扩增稳定性及多态性进行分析，并采用毛细管电泳对扩增产物进行同步分析验证。根据峰图简单易读取、多态性高、扩增稳定性高、染色体上分布均匀的原则，确定31对核心引物用于百香果品种鉴定。2.4技术验证经广西益谱检测技术有限公司、广西作物遗传改良生物技术重点开放实验室和南宁国拓生物科技有限公司等三家单位，对技术规程的可操作性和检测数据的可重现性进行了验证。三家单位分别对4个广西区内种植的不同百香果品种，用31对SSR引物的PCR扩增产物进行聚丙烯酰胺凝胶电泳检测验证，用6对SSR引物的PCR扩增产物进行毛细管电泳检测验证。经验证，《百香果品种鉴定技术规程SSR分子标记法》技术规程中的DNA提取、PCR扩增及产物检测方法具有可操作性，按照技术规程中的聚丙烯酰胺凝胶电泳条带明显，清晰可辩；毛细管电泳检测方法中扩增的PCR产物均能获得清晰、稳定的主峰，且易于识别。三、标准编制原则和标准的主要内容1标准编制原则规范性原则：本技术规范的制定符合法律法规，符合有关标准规范的要求，包括GB/T1.1-2020《标准化工作导则第1部分：标准化文件的结构和起草规则》、NY/T2594《植物品种鉴定DNA分子标记法总则》、NY/T2517-2013《植物新品种特异性、一致性和稳定性测试指南西番莲》、GB/T6682《分析实验室用水规格和试验方法》。适用性原则：本规程的全部内容具有可操作性。统一性原则：本规程与现行相关标准协调统一，不发生冲突。先进性原则：本规程采用目前国内外品种鉴定领域均认可的、成熟的SSR标记技术，以非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳平台为主，兼顾毛细管电泳检测平台的百香果品种鉴定技术，与田间小区鉴定方法对比，该方法的先进性在于不受环境影响和季节约束，检验周期短。2标准主要内容标准编写主要内容包括样品处理、聚合酶链式反应法（PCR）、聚丙烯酰胺凝胶电泳、毛细管电泳操作过程以及结果判定，适用于百香果种质资源真伪的检测鉴定。标准规程编制的过程主要进行了以下试验和工作：2.1原理不同品种百香果的遗传组成不同，其基因组（DNA）中SSR的重复次数存在差异，根据SSR的差异，通过PCR扩增及电泳技术可以鉴定百香果品种。2.2样品来源样品采自广西作物遗传改良生物技术重点开放实验室的里建种植基地（南宁-东盟经济技术开发区）种植的百香果嫩叶片。2.3仪器电子天平、高速冷冻离心机、水浴锅、PCR扩增仪、垂直板电泳系统、毛细管电泳仪、胶片观察灯等。2.4试剂液氮、无水乙醇、三氯甲烷、甲醛、三羟甲基氨基甲烷、DNA分子量标准、2×TaqPlusPCR预混试剂、40%丙烯酰胺/甲叉双丙烯酰胺溶液、氯化钠、氢氧化钠、硝酸银、硼酸、过硫酸铵、十六烷基三甲基溴化铵、乙二胺四乙酸二钠、四甲基乙二胺、琼脂糖、去离子甲酰胺、DNA分析仪用丙烯酰胺胶液、DNA分析仪用LIZ500分子量内标、DNA分析仪用电泳缓冲液、DNA分析仪用光谱校准基质。2.5SSR引物引物序列见表1表1引物编号及引物扩增信息序号引物名称条带大小（bp）引物退火温度（℃）引物序列（5’-3’）1PeRM1000195-10750正向：GCATGGACTTGATTTGTATATTCT反向：GAGAACAATGATGTCACTTTCATA2PeRM1000598-14050正向：TAGTGACATAACTGAAAACGCTAT反向：GAGTTACCGCTGAAGTTTTCTA3PeRM10006149-19050正向：TCATTAACATCGTAAACAAAGATT反向：AATTCGACAAGATTTACTGATACA4PeRM1000795-10650正向：GTAGTAGGAGAATATTTGAGGGAA反向：CTATTTTGTGATCCAAGGAAGT5PeRM10008105-12350正向：GTCACTATCATCCCATAAAAATTC反向：AGGTAAAATTAATATGATAAGCGAA6PeRM10009135-14550正向：GATTGATTTGTGGATGGATACT反向：CACTTGTTTCACTCGTACAATAAT7PeRM10011120-13010955正向：ATGGAGAAGACTTCAGAGTCAC’反向：AGAGATATTTTTCACTCACTGGAT8PeRM10012135-18015150正向：CTCCATATCAGATTAAGTAACCAC反向：CTCAAATAAAAACAAACCTGTTAC9PeRM10014130-14050正向：CATTTATAAAGGAATTGACAAGAA反向：CTGAGTTAATGCTGTGATTAAGAT10PeRM1001614950正向：AATTTTCTTGGCTTAAAACACTAC反向：TTGACTTCACTGCTATGGTATTAG11PeRM10017146-17650正向：AAGACACTGATAGTTCTCTGAGG反向：CAAATTATGATAAGAAACTTGGAA12PeRM10018160-17050正向：ACAGAAAAGAAAGATAAAGCAAAT反向：TTCAGTATCCAACTGAACACAC13PeRM10019142-15050正向：TGGTAGTCAATCAGAAAACTAAGA反向：GAGTTGTTAGGTCTCCTCAACTTA14PeRM10020132-14250正向：AACAGGGTATACTGTAAATCATTG反向：GTTTATTCCTTTCTCTTCTAGTGC15Pa_F-P10A1022050正向：TGGAATGTGATTTGCATGG反向：TAGGTATTGCTGGCGAAG16Pa_F+R-Contig11429050正向：CTTGCCTCTCTCCCTCTC反向：GGGTTTTGGGTTTGACAG表A.1引物编号及引物扩增信息（续）序号引物名称条带大小（bp）引物退火温度（℃）引物序列（5’-3’）17Pa_F-Contig1329350正向：CAGAAGGAAAACCAGCAAG反向：CCCCATCATCATCACTTTC18Pa_F-P7E10240-25550正向：TTAATGCCACAGCCCAAC反向：TGACCCAAAATCAAACACC19Pa_F+R-Contig80360-38055正向：TGTTCAAGCCCATCTTCG反向：GCTCTCGCTCTTGTCGTAG20Pa_F-P6H04280-29555正向：GAATAGGGTCAGCAGGAGG反向：GAGTGTGTCATCGGAGTCC21PE222353正向：GATCGGTCCTCGGTTAGAC反向：AGTCACACAGCATGAGAAATC22PE625853正向：GCAATTTCACCATCTTCTGCT反向：CCACGGTCATGGATGTTC23PE10145-15055正向：TTGCTCATTGCACTCATCCT反向：GCAGACATTTCCTGGAGCA24PE12260-29055正向：CCATAGTCCCAACAAGCATC反向：GCTGTGGACCCTAACTCAGTC25PE1326050正向：TCAGGAAGATTGCATGTTAGT反向：CTGGGTTTTGTTTATGTTGC26PE15230-27053正向：CCGTGAACCAACCATTTCTC反向：TTGCAGCACAAACAAGTCAA27PE16180-27053正向：AGGATCACCATAGAAAACCAT反向：GTTAGGTTGGCATTGCTCTT28PE18210-23050正向：GTCACTTCATTCTTCCTTTCC反向：TTAGCCCACTCAAACACAA29PE2725053正向：CACATTTGCCGTCACTGG反向：CGGCATACGATAAATCTCCTG30PA827053正向：TCTAATGAGCGGAGGAAAGC反向：CCGGATACCCACGCATTA31PA9265-32053正向：GGGCCTTTATCCATGTTTGA反向：GGAAATCCGAAAACTGGTTG表2毛细管电泳验证所用的4个百香果品种与6对引物序号百香果品种名称引物名称1台农1号PeRM100052原生黄果PeRM100073杂交种黄金百香果PeRM100094满天星PeRM100175PeRM100186Pa_F-P7E102.6操作步骤2.6.1样品采集用不锈钢剪刀采集种植的已知品种的百香果嫩叶放入塑料样品袋中，做好标识，放入0-8℃保温箱中，带回实验室，于-18℃冰箱中保存备用。2.6.2DNA的提取取2.6.1中适量百香果叶片用自来水冲洗干净，再用去离子水冲洗两遍，自然晾干后用不锈钢剪刀剪碎放入研钵中，加入液氮研磨成粉末状，分取100mg放入1.5mL离心管中，加入750µLCTAB提取溶液，涡旋振荡混匀后于65℃水浴45min~60min，期间每隔15min颠倒离心管混匀；加入500µL的三氯甲烷，颠倒混匀，12000rpm离心3min，转移上清液约0.5mL至新离心管中，加入等体积（即0.5mL）预冷至约4℃的无水乙醇，颠倒混匀，-18℃冰箱下静置1h，12000rpm离心3min，去上清液，室温下干燥沉淀。加入50µL无菌纯水于-18℃冰箱中保存备用。注：以上为推荐的DNA提取方法。其他能够达到PCR扩增质量要求的DNA提取方法也适用于本规程。2.6.3PCR扩增PCR反应体系PCR反应体系见表3。表3PCR反应体系试剂终浓度体积灭菌纯水-8.5µL2×TaqTaqPlusPCR预混试剂1×12.5µL10µmol/L正向引物0.4µmol/L1.0µL10µmol/L反向引物0.4µmol/L1.0µL25ng/µLDNA模板2.0ng/µL2.0µL总体积25.0µLPCR反应程序94℃预变性5min；94℃变性30s，退火30s（退火温度见表1推荐引物表），72℃延伸30s，35个循环；最后72℃下延伸7min。2.6.4PCR产物检测非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳检测.1聚丙烯酰胺凝胶制备在一对玻璃板间插入1.0mm宽的间隔片，在封口处注入1%琼脂糖溶液，让其凝固密封。在50mL量杯中依次加入7.5mL5×TBE缓冲液，7.5mL40%Acryl/BisSolution(29:1)，搅拌并用纯净水定容至30mL；加入200µL10%过硫酸铵和12µL四甲基乙二胺溶液，混匀后倒入凝胶板之间，随即插好样品梳，使其在50min~60min内聚合凝固，凝胶高度应不小于10cm。.2电泳将玻璃板固定于垂直电泳槽上，在电泳槽中加入电泳缓冲液，小心拔下样品梳。用加样器吸取1µL不同引物（表1）PCR产物，加入样品孔中，同时在同一块胶中加入1µLDNAmarker。电泳选用的电压梯度为1~5V/cm，2×TaqPlus预混试剂的蓝色指示带从上到下分别到达胶板1/2、2/3处（大约1h）后结束电泳。.3银染显色将附着凝胶的玻璃板用去离子水冲洗30s~60s后，将凝胶放入方形不锈钢盘中，加入染色液覆盖凝胶，轻摇5min~10min进行染色；倒掉染色液，用去离子水快速漂洗，放入显色液中，轻摇至显色出清晰带纹；取出凝胶用去离子水冲洗两遍，沥干后进行拍照。毛细管电泳检测.1PCR产物样品准备分别取等体积的稀释后不同引物（表2）PCR扩增产物溶液混合，从混合液中吸取1µL按序号加入到DNA分析仪专用96孔板孔中，板中各孔分别再加入0.1µLDNALIZ500分子量内标和8.9µL去离子甲酰胺。将样品在PCR仪上95℃变性5min，取出，迅速置于碎冰块上，冷却10-15min。将整个96孔板置于离心机中，离心10s后放置到DNA分析仪上待检。.2电泳检测按照仪器操作规程，编辑样品表及运行程序，执行运行程序，仪器自动给出检测结果，保存并记录数据。2.7数据记录与统计样品每个SSR位点的等位变异采用扩增片段长度的形式表示。对于非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳检测方法，将每个扩增位点的等位变异与相应的对照品种的等位变异片段大小进行比较，确定待检样品在该位点的等位变异。对于毛细管电泳检测方法，通过使用对照品种，消除同型号不同批次间或不同型号DNA分析仪间可能存在的系统误差，使用片段分析软件读取待检样品在该位点的等位变异。纯点结合的等位变异大小数据记为X/X，其中X为该位点等位变异的大小；杂合位点的等位变异大小数据记录为X/Y，其中X、Y分别为该位点上的2个等位变异的大小，小片段数据在前、大片段数据在后。缺失位点在等位变异大小数据记录为0/0。示例1：样品在某个位点上仅出现1个等位变异，大小为160bp，则该位点的等位变异数据记录为160/160。示例2：样品在某个位点上仅出现2个等位变异，大小为160bp、165bp，则该位点的等位变异数据记录为160/165。2.8判定方法当待检样品和对照品种间差异位点数≥2，则判定为“不同品种”；当待检样品和对照品种间差异位点数=1，判定为“近似品种”；当样品间差异位点数=0，判定为“极近似品种或相同品种”。2.9结果与记录2.9.1用非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳和毛细管电泳检测，结果见附件原始记录图谱。广西益谱检测技术有限公司结果原始记录图谱（见附件1）广西作物遗传改良生物技术重点开放实验室结果原始记录图谱（见附件2）南宁国拓生物科技有限公司结果原始记录图谱（见附件3）四、制定标准的原则和依据，与现行法律、法规的关系，与有关国家标准、行业标准的协调情况。本标准的编制依据现行的法律、法规和国家强制性标准，与这些文件中的规定不存在矛盾，协调一致。五、重大意见分歧的处理结果和依据无六、提出标准强制实施或推荐实施的建议和理由本项标准的制订，已经实验室的验证，可作为推荐性地方标准，用于百香果种质资源真伪的检测鉴定。广西地方标准《百香果品种鉴定技术规程SSR分子标记法》编写组2022.4.18附件1：广西益谱检测技术有限公司结果原始记录及图谱1.非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳M123456789101112131415161718192021222324M252627282930313233343536M123456789101112131415161718192021222324M252627282930313233343536图1.不同百香果品种SSR扩增产物电泳结果备注：百香果品种顺序依次为：台农1号、原生黄果、杂交种黄金百香果、满天星引物名称：1-4：PE2，5-8：PE6，9-12：PE10，13-16：PE12，17-20：PE13，21-24：PE18，25-28：PE15，29-32：PE16，33-36：PE27。M12345678910111213141516M17181920212223242526272829303132333435363738394041424344M12345678910111213141516M17181920212223242526272829303132333435363738394041424344图2.不同百香果品种SSR扩增产物电泳结果备注：百香果品种顺序依次为：台农1号、原生黄果、杂交种黄金百香果、满天星引物名称：1-4：PeRM10001，5-8：PeRM10005，9-12：PeRM10006，13-16：PeRM10007，17-20：PeRM10008，21-24：PeRM10009，25-28：PeRM10011，29-32：PeRM10012，33-36：Pa_F+R-Contig114，37-40：Pa_F-Contig13，41-44：PeRM10014。M1234567891011121314151617181920M21222324252627282930313233343536M1234567891011121314151617181920M21222324252627282930313233343536M1234567891011121314151617181920M21222324252627282930313233343536M1234567891011121314151617181920M21222324252627282930313233343536图3.不同百香果品种SSR扩增产物电泳结果备注：百香果品种顺序依次为：台农1号、原生黄果、杂交种黄金百香果、满天星引物名称：1-4：PeRM10016，5-8：PeRM10017，9-12：PeRM10018，13-16：PeRM10019，17-20：PeRM10020，21-24：Pa_F-P10A10，25-28：Pa_F+R-Contig80，29-32：Pa_F-P6H04，33-36：Pa_F-P7E10。M12345678M12345678图4.不同百香果品种SSR扩增产物电泳结果备注：百香果品种顺序依次为：台农1号、原生黄果、杂交种黄金百香果、满天星引物名称：1-4：PA8，5-8：PA9。2毛细管电泳图谱图1台农1号基于引物PeRM10005的扩增产物毛细管电泳检测图谱图2原生黄果基于引物PeRM10005的扩增产物毛细管电泳检测图谱图3杂交种黄金百香果基于引物PeRM10005的扩增产物毛细管电泳检测图谱图4满天星基于引物PeRM10005的扩增产物毛细管电泳检测图谱图5台农1号基于引物PeRM10007的扩增产物毛细管电泳检测图谱图6原生黄果基于引物PeRM10007的扩增产物毛细管电泳检测图谱图7杂交种黄金百香果基于引物PeRM10007的扩增产物毛细管电泳检测图谱图8满天星基于引物PeRM1007的扩增产物毛细管电泳检测图谱图9台农1号基于引物PeRM10009的扩增产物毛细管电泳检测图谱图10原生黄果基于引物PeRM10009的扩增产物毛细管电泳检测图谱图11杂交种黄金百香果基于引物PeRM10009的扩增产物毛细管电泳检测图谱图12满天星基于引物PeRM10009的扩增产物毛细管电泳检测图谱图13台农1号基于引物PeRM10017的扩增产物毛细管电泳检测图谱图14原生黄果基于引物PeRM10017的扩增产物毛细管电泳检测图谱图15杂交种黄金百香果基于引物PeRM10017的扩增产物毛细管电泳检测图谱图16满天星基于引物PeRM10017的扩增产物毛细管电泳检测图谱图17台农1号基于引物PeRM10018的扩增产物毛细管电泳检测图谱图18原生黄果基于引物PeRM10018的扩增产物毛细管电泳检测图谱图19杂交种黄金百香果基于引物PeRM10018的扩增产物毛细管电泳检测图谱图20满天星基于引物PeRM10018的扩增产物毛细管电泳检测图谱图21台农1号基于引物Pa_F-P7E10的扩增产物毛细管电泳检测图谱图22原生黄果基于引物Pa_F-P7E10的扩增产物毛细管电泳检测图谱图23杂交种黄金百香果基于引物Pa_F-P7E10的扩增产物毛细管电泳检测图谱图24满天星基于引物Pa_F-P7E10的扩增产物毛细管电泳检测图谱附件2：广西作物遗传改良生物技术重点开放实验室结果原始记录及图谱1.非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳M123456789101112131415161718192021222324M252627282930313233343536M123456789101112131415161718192021222324M252627282930313233343536图1.不同百香果品种SSR扩增产物电泳结果备注：百香果品种顺序依次为：台农1号、原生黄果、杂交种黄金百香果、满天星引物名称：1-4：PE2，5-8：PE6，9-12：PE10，13-16：PE12，17-20：PE13，21-24：PE18，25-28：PE15，29-32：PE16，33-36：PE27。M12345678910111213141516M17181920212223242526272829303132333435363738394041424344M12345678910111213141516M17181920212223242526272829303132333435363738394041424344图2.不同百香果品种SSR扩增产物电泳结果备注：百香果品种顺序依次为：台农1号、原生黄果、杂交种黄金百香果、满天星引物名称：1-4：PeRM10001，5-8：PeRM10005，9-12：PeRM10006，13-16：PeRM10007，17-20：PeRM10008，21-24：PeRM10009，25-28：PeRM10011，29-32：PeRM10012，33-36：Pa_F+R-Contig114，37-40：Pa_F-Contig13，41-44：PeRM10014。M1234567891011121314151617181920M21222324252627282930313233343536M1234567891011121314151617181920M21222324252627282930313233343536图3.不同百香果品种SSR扩增产物电泳结果备注：百香果品种顺序依次为：台农1号、原生黄果、杂交种黄金百香果、满天星引物名称：1-4：PeRM10016，5-8：PeRM10017，9-12：PeRM10018，13-16：PeRM10019，17-20：PeRM10020，21-24：Pa_F-P10A10，25-28：Pa_F+R-Contig80，29-32：Pa_F-P6H04，33-36：Pa_F-P7E10。M12345678M12345678图4.不同百香果品种SSR扩增产物电泳结果备注：百香果品种顺序依次为：台农1号、原生黄果、杂交种黄金百香果、满天星引物名称：1-4：PA8，5-8：PA9。2.毛细管电泳图谱图1台农1号基于引物PeRM1005的扩增产物毛细管电泳检测图谱图2原生黄果基于引物PeRM1005的扩增产物毛细管电泳检测图谱图3杂交黄金百香果基于引物PeRM10005的扩增产物毛细管电泳检测图谱图4满天星基于引物PeRM10005的扩增产物毛细管电泳检测图谱图5台农1号基于引物PeRM1007的扩增产物毛细管电泳检测图谱图6原生黄果基于引物PeRM1007的扩增产物毛细管电泳检测图谱图7杂交黄金百香果基于引物PeRM10007的扩增产物毛细管电泳检测图谱图8满天星基于引物PeRM10007的扩增产物毛细管电泳检测图谱图9台农1号基于引物PeRM1009的扩增产物毛细管电泳检测图谱图10原生黄果基于引物PeRM1009的扩增产物毛细管电泳检测图谱图11杂交黄金百香果基于引物PeRM10009的扩增产物毛细管电泳检测图谱图12满天星基于引物PeRM10009的扩增产物毛细管电泳检测图谱图13台农1号基于引物PeRM10017的扩增产物毛细管电泳检测图谱图14原生黄果基于引物PeRM10017的扩增产物毛细管电泳检测图谱图15杂交黄金百香果基于引物PeRM10017的扩增产物毛细管电泳检测图谱图16满天星基于引物PeRM10017的扩增产物毛细管电泳检测图谱图17台农1号基于引物PeRM10018的扩增产物毛细管电泳检测图谱图18原生黄果基于引物PeRM10018的扩增产物毛细管电泳检测图谱图19杂交黄金百香果基于引物PeRM10018的扩增产物毛细管电泳检测图谱图20满天星基于引物PeRM10018的扩增产物毛细管电泳检测图谱图21台农1号基于引物Pa_F-P7E10的扩增产物毛细管电泳检测图谱图22原生黄果基于引物Pa_F-P7E10的扩增产物毛细管电泳检测图谱图23杂交种黄金百香果基于引物Pa_F-P7E10的扩增产物毛细管电泳检测图谱图24满天星基于引物Pa_F-P7E10的扩增产物毛细管电泳检测图谱附件3：南宁国拓生物科技有限公司结果原始记录及图谱1.非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳M123456789101112131415161718192021222324M252627282930313233343536M123456789101112131415161718192021222324M252627282930313233343536图1.不同百香果品种SSR扩增产物电泳结果备注：百香果品种顺序依次为：台农1号、原生黄果、杂交种黄金百香果、满天星引物名称：1-4：PE2，5-8：PE6，9-12：PE10，13-16：PE12，17-20：PE13，21-24：PE