DB22T 3679-2024普通级实验用猫 体内胚胎生产操作规程

22Operationproceduresforinvivoembryoproductionofconventionalexperimentalcat2024-12-31发布DB22/T3679—2024I本文件按照GB/T1.1-2020《标准化工作导则第1部分：标准化文件的结构请注意本文件中的某些内容可能涉及专利。本文件的DB22/T3679—20242普通级实验用猫体内胚胎生产操作规程本文件确立了普通级实验用猫体内胚胎生产技术流程，规定了普通级实验用猫体内胚胎生产过程DB22/T2591普通级实验用猫病原微生物4技术流程采集与胚胎质量鉴定。猫体内胚胎生产技术流程2供体的超数排卵与配种（见第2供体的超数排卵与配种（见第6章）1供体的选择与饲养管理（见第5章）3采胚及胚胎（见第7质量鉴定44记录与档案（见第8章）3供体的饲养环境应满足GB14925要求；超数排卵前3周~5周应加强饲养管理，可适量补充维促卵泡激素(FSH)、人绒毛膜促性腺激素(hCG)、生理盐水供体猫每隔12h,分三天递减注射，15U、15射6次，第四天注射200U的人绒毛膜促性腺激素。注射促人绒毛膜促性腺激素后立即放入种公猫进行交配，公猫和母猫交配时应提供精子活力70%以上，畸形率少于20%。利用发情母猫做台畜采集种公猫精液，符合6.2.3.2要求的精液浓度调至每毫升2000万个精子。4术前12h禁食，全身麻醉后仰卧在手术架上，手术部位备皮消毒。在距离最后一对乳房前1cm、腹中线2cm~3cm的左侧和右侧位置，分别用手术刀切开2mm小口，用腹腔镜观察卵巢排卵情况，发现排卵后用输精枪每侧子宫腔输入不少于0.5×10⁷个精子。器械：猫手术台、保定绳、兽用电动剃毛刀、手术器械、冲胚管、平浴锅等。药品：75%酒精、碘伏、生理盐水、抗生素、麻醉药、冲胚液等。配种或人工授精24h~72h从输卵管采集1细胞期～8细胞期胚胎，配种或人工授精5d~67.1.3.1术前12h禁食，全身麻醉后仰卧在手术架上，手术部位备皮消毒。7.1.3.2手术部位在距离最后一对乳房前端2cm、腹中线0.5cm的一侧位置，尽量避开血管，纵向切开1cm~2cm的刀口，将子宫角和卵巢引出体外，记录两侧卵巢排卵点或黄体数，并填写附录A。a)输卵管冲胚法：将猫用胚胎移植细管从输卵管伞部插入0.5cm,用拇指与食指扭住，另一端放入60mm平皿中。用事先抽取10mL冲胚液的注射器从子宫角端向输卵管方向把冲胚液b)子宫角冲胚法：用针头在子宫角后端(靠近子宫颈)扎1个小孔，将猫用胚胎移植管从孔导入到子宫腔内，用拇指与食指扭住，另一端放入100mm平皿中，用事先抽取10mL冲胚液的7.1.3.4采集完毕后将子宫复位，常规缝合腹腔，术后注射抗生素预防感染，注意保暖。体式显微镜下用吸卵管在35℃下捡出胚胎，标记供体名称或编号、胚胎数量及等级等。采胚记录7.2.2.1输卵管采集的胚胎，胚胎处于1细胞期~8细胞期，可用胚标准为卵裂球轮廓清晰、球体饱7.2.2.2子宫角采集的胚胎，A级和B级为可用胚胎，C级和D级不可用。胚胎分级标准如下：a)A级：胚龄与胚胎发育阶段吻合，形态完整：结构紧凑，卵裂球轮廓清晰、均匀、致密，边缘整齐；很少或没有游离细胞，变性细胞比例少于10%。b)B级：胚龄与胚胎发育阶段基本吻合，卵裂球轮廓清晰，边缘整齐，卵裂球较均匀，细胞密度