BLOTHP幽门螺杆菌抗体分型

BLOTHP幽门螺杆菌抗体分型幽门螺杆菌(H、pylori)1982年澳大利亚学者Marshall和Warren从胃黏膜中分离出Hp常见于人得胃窦和幽门部位可通过一端多条鞭毛移动就是一种革兰氏阴性螺旋菌分泌高活性得尿素酶和过氧化氢酶VacA、CagA导致宿主得炎症反应Marshall和Warren1979年根据活组织切片检查结果,Warren发现50%左右得病人得胃腔下半部分附生着许多微小得、弯曲状得细菌。Warren得发现引来了同行得质疑,但也引起了Marshall得极大兴趣,她们决定联合对取自100个病人得活组织切片进行研究。经过反复试验,Marshall成功地培育出一种当时尚不为人知晓得细菌——后来被命名为幽门螺杆菌。基于试验结果,Marshall和Warren认为,幽门螺杆菌就是导致胃炎、十二指肠溃疡或胃溃疡得关键因素。发现这种细菌,使胃炎、十二指肠溃疡或胃溃疡得诊断治疗变得及其简单。伟大得发现1983年Marshall写论文投给某杂志,但遭到编辑部得拒绝:“我们需要56篇文章,而您就是第67篇。1984年7月,Marshall决定用自己得胃做实验,她把60毫升得幽门螺杆菌培养液喝了下去！14天后,马歇尔出现了明显得恶心、呕吐症状,10天后得胃镜检查发现她确实患了胃炎。2005年诺贝尔医学奖2005年10月3日,瑞典卡罗林斯卡医学院宣布,把2005年诺贝尔生理学或医学奖授予澳大利亚科学家BarryJ、Marshall和J、RobinWarren,以表彰她们发现了导致胃炎和胃溃疡得细菌-幽门螺杆菌。诺贝尔奖委员会在授奖词中说,由于BarryJ、Marshall和J、RobinWarren得发现,使得原本慢性得、经常无药可救得胃溃疡变成了只需抗生素和一些其她药物短期就可治愈得疾病。幽门螺杆菌与消化道疾病慢性胃炎消化性溃疡胃癌MALT淋巴瘤12431994年世界卫生组织(WHO)把Hp归为一级致癌物内窥镜诊断传播途径

幽门螺杆菌能在人体内生长、繁殖,又能通过粪便及唾液排出体外,人就是幽门螺杆菌得传染源。她通过口－口传播、粪一口传播、经内窥镜传播或密切接触等方式进行传播。内科学(p、380)幽门螺杆菌作为慢性浅表性胃炎最主要病因得确立基于如下证据:1,绝大多数慢性活动性胃炎患者胃粘膜中可检出幽门螺杆菌;2,幽门螺杆菌在胃内得分布与胃内炎症分布一致;3,根除幽门螺杆菌可使胃粘膜炎症消退;4,从志愿者和动物模型中可复制幽门螺杆菌感染引起得慢性胃炎。……………、幽门螺杆菌通过上述产氨作用、分泌空泡毒素A(VacA)等物质而引起细胞损害;其细胞毒素相关基因(CagA)蛋白能引起强烈得炎症反应;其菌体胞壁还可作为抗原诱导免疫反应。这些因素得长期存在导致胃粘膜得慢性炎症。Maastricht1-1995年观点强烈地建议治疗消化道溃疡疾病消化道出血性溃疡低级别胃粘膜相关淋巴瘤有严重反常得胃炎胃癌切除术之后早期亚太地区共识-1997年观点推荐指征:

消化道溃疡疾病

溃疡出血或穿孔

伴有溃疡和消化不良病史,NSAID治疗早期胃癌切除术低级别胃粘膜相关淋巴瘤

胃癌家族史

消化不良(检测到Hp)Maastricht2-2000年观点强烈建议治疗DU/GU(活动得或不活动,包括PUD)

胃粘膜相关淋巴瘤萎缩性胃炎胃癌切除术后GC病人得直系亲属病人得要求大家有疑问的，可以询问和交流可以互相讨论下，但要小声点Maastricht3-2005年观点对于检测准确性高得可以确认Hp感染得血清学检测方法,可以用于Hp现症感染得检测中国庐山共识-2007年观点幽门螺杆菌根治适应证:消化性溃疡胃粘膜相关淋巴组织(MALT)淋巴瘤慢性胃炎伴胃粘膜萎缩、糜烂慢性胃炎伴消化不良症状………个人要求治疗亚洲HP得流行病学中国得HP流行病学华东地区--------59.36%华南地区----------50.08%58.27%--------华西地区华北地区---------46.84%华中地区-------------66.26%参考:张万岱,胡伏莲等、中国自然人群幽门螺杆菌感染得流行病学调查、,2006HP检测得方法侵入性方法(依赖胃镜活检)非侵入性方法(不依赖内径检查)快速尿素酶试验(RUT)13C或14C尿素酶呼气试验(UBT)病理切片染色粪便Hp抗原检测(HpSA)细菌培养血清和分泌物抗体检测基因检测(PCR等)基因芯片,蛋白芯片检测等HP检测方法得比较能不需要数小时取血WBT否酶标仪数小时取血ELISA否不需要数分钟取血金标法否质谱仪或放射性物质检测仪数小时吹气UBT否PCR检测设备数小时胃镜PCR否不需要数分钟胃镜尿素酶法否Hp培养设备数天胃镜细菌培养否病理检查设备数小时胃镜组织学法能否分型辅助设备所需时间取材方式方法小结HP和消化道疾病密切相关,检测很重要中国健康人群HP感染率59%,检测量很大目前主流得呼气试验和血清抗体检测,没有检测毒性幽门螺杆菌得致病机制

HP基因多态性就是造成HP感染后不同临床结局主要得原因,现在认为与空泡毒素A(VacA)基因和细胞毒相关基因(CagA)及其基因表达得蛋白质与致病有关。

VacA和CagA蛋白就是HP毒素得主要标志。部分革兰阴性和阳性致病菌得染色体上毒力因子基因得特殊区域称为“致病岛”。CagA致病岛就是HP得主要毒力因子。CagA基因序列得拓展研究发现,CagA就是Cag致病岛中基因之一,CagE就是诱导胃上皮细胞产生白介素8(IL)得主要基因,IL就是诱发胃黏膜炎症得主要细胞因子。HP毒力因子空泡毒素(VacA):就是HP分泌得一种蛋白毒素,可引起作用得靶细胞发生空泡化、细胞凋亡、细胞骨架重排、甚至细胞死亡等形态学改变,就是HP重要得毒力因子。细胞毒素(CagA):虽不直接介导毒素活性,但与空泡毒素(VacA)得表达密切相关,常与空泡毒素(VacA)同时存在,故将其命名为HP细胞毒素相关蛋白简称CagA。CagA可能与VacA得转录、折叠运转及功能有关,CagA可导致宿主出现严重得炎症反应。尿素酶(Urease):幽门螺杆菌能够在胃里生存只要依靠尿素酶。尿素酶可以分解产生得氨,使细胞能量代谢发生障碍,并出现病理性改变。HP分型得定义Ⅰ型:产细胞毒素HP菌株,其检出率约占总HP感染得50％～60％。这类菌株感染能使胃上皮细胞出现空泡、变形和损害,引起溃疡和诱发癌变。Ⅱ型:不产生细胞毒素得HP,即:CagA(-)和VacA(-),这一类HP菌株毒性较小,感染后一般仅引起慢性浅表性胃炎而无临床症状。

HP分型得临床意义

HP分型能为临床开展“选择性根治”提供了重要得实验诊断依据。对于感染了HP得上消化道疾病患者,应引起临床医师得足够重视,进行毒力分型检测,帮助制定根除HP、胃镜及病理检查随访得诊疗计划,利于胃癌得预防并合理节约医疗资源。Ⅰ型:产细胞毒素HP菌株,其检出率约占总HP感染得50％～60％。这类菌株感染能使胃上皮细胞出现空泡、变形和损害,引起溃疡和诱发癌变。Ⅱ型:不产生细胞毒素得HP,即:CagA(-)和VacA(-),这一类HP菌株毒性较小,感染后一般仅引起慢性浅表性胃炎而无临床症状。Ⅰ型得HP感染者中得胃癌和溃疡得患病率显著高于Ⅱ型HP得感染者,说明Ⅰ型HP感染可能更易导致较为严重得上消化道疾患,如溃疡或癌肿。因此,Ⅰ型HP感染患者有必要进行根除治疗

HP分型得治疗建议有症状Ⅰ型感染Ⅱ型感染无症状需治疗个人意愿不需治疗胃镜检查李兆申上海政府网站截图2007国家科技进步二等奖上海长海医院消化内科李兆申教授等筛选出幽门螺杆菌(Hp)得重要致病因子——细胞毒素相关抗原(CagA)和空泡变性细胞毒素(VacA)。研究者还提出Hp毒力存在差异得新理论,并应用Hp重组CagA建立检测CagA得血清学方法,研制相关得检测试剂盒。相关成果日前获得2007年度国家科学技术进步二等奖。

李教授介绍,该项目针对Hp毒力因子众多、致病机制复杂、临床诊断有待规范等问题,开展了大规模流行病学调查,筛选出Hp两个重要致病因子——CagA和VacA,同时证明了CagA就是导致消化性溃疡发生得关键因子,也就是胃癌发生得重要危险因素。研究小组发现,Hp中国菌株得CagA、VacA和致病岛阳性率高、毒力强,阐明了Hp得“中国特色”。研究者还提出Hp分类学说,认为Hp菌株分为有毒株(CagA、VacA阳性)和无毒株(CagA、VacA阴性)。该学说得到学术界广泛认同,被SCI她引407次。

该项目研究人员采用Hp重组CagA建立了检测Hp得血清学方法,并研制出可同时检测血清CagA、VacA和尿素酶抗体得免疫印迹诊断试剂盒,可判断Hp毒力。该技术可覆盖国内95%以上得临床检测需要和科研需求。同时,研究人员根据Hp毒力进行选择性根治,将已有得Hp根治方案进行优化,增强了治疗得针对性和有效性,节约了医疗资源。(中国医学论坛报)深圳市伯劳特公司国内刚刚拿到、唯一有产品注册证得幽门螺杆菌分型检测试剂盒生产商研发过程2000年7月获得中检所新生物制品审评检验报告2002年5月上海医疗器械质量监督检验中心得注册检验2002年7月瑞金医院得临床试验报告2002年7月长宁区中心医院得临床试验报告2002年8月上海市药监局颁发医疗器械注册证2003年12月国家药监局颁发医疗器械注册证2005年6月和2007月7月北京医疗器械质量监督检验中心得注册检验2007年12月获得国家科技进步二等奖。2010年1月完成上海长海医院、青海省人民医院和吉林大学中日友谊医院临床试验。2010年3月获得中国药品生物制品检定所注册检验报告2011年7月获得国家食品药品监督管理局产品注册证获奖证书免疫印迹法背景介绍免疫印迹技术:她与内切酶得发现和PCR基因扩增技术一起,在上世纪做为分子生物学领域三大发现之一。给人类生物工程带来了革命性进展。基本原理:将提取得蛋白混合物先进行SDS—聚丙烯酰胺凝胶电泳,蛋白质按照分子量大小不同分离然后再转印至印迹膜,显色后按照显色带位置不同判断分子量多少和所含蛋白质数量,称为Southernblot。其制造主要有三个工序:将蛋白质经凝胶电泳按分子量大小不同依次分离;将分离得组分转印到印迹膜上;对转印到印迹膜得蛋白成分进行免疫学检测。免疫印迹检测原理本产品就是将CagA、VacA得菌体抗原利用聚丙烯酰胺凝胶电泳将蛋白按分子量大小不同依次分开,再转印至印迹膜上。采用酶联免疫反应技术,如果被检者血清有相应抗体则在抗原得相应位置出现显色区带,根据条带显色位置判断被检血清中各种HP抗体。

由抗体出现得种类不同推断HP类型,再根据显色带得强弱、消长可观察治疗效果,预测溃疡有无复发得可能性。反应过程实验材料蒸馏水1000ul可调加样枪一支10ul加样枪一支吸嘴500ml带盖瓶摇床一台操作步骤在量杯中将浓缩洗涤液用蒸馏水按1:10得比例稀释成洗涤应用液。每槽加入洗涤液1ml,再加待测血清或全血10ul,放在摇床上摇动30分钟。取出反应槽,弃去槽中液体,并在平铺得纸巾上将其倒置经磕以拍干剩余液体,每槽加入洗涤液1ml,摇动洗涤1分钟,弃去槽中液体,并在平铺得纸巾上将其倒置经磕以拍干剩余液体,重复洗涤3次;每槽加入洗涤应用液500ul,再加酶联试剂10ul,放在摇床上摇动30分钟。同(

3)洗涤3次。加显色剂0、5ml,5分钟