板栗印度块菌菌根苗培育技术规程

ICS65.020

CCSB30

52

贵州省地方标准

DB52/T1677—2022

板栗印度块菌菌根苗培育技术术规程

TechnicalRegulationforProductionofCastaneamollissima-Tuberindicum

MycorrhizalSeedlings

2022-06-23发布2022-10-01实施

贵州省市场监督管理局发布

DB52/T1677—2022

板栗印度块菌菌根苗培育技术规程

1范围

本文件规定了板栗印度块菌菌根苗培育、接种前准备、接种、接种后管理、病害防治、检验与判断、

质量等要求。

本文件适用于板栗印度块菌菌根苗的培育及检验。

2规范性引用文件

下列文件中的内容通过文中的规范性引引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文件，

仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本

文件。

DB52/T294-2007主要造林树种苗木质量等级

3术语和定义

下列术语和定义适用于本文件。

3.1

板栗castaneamollissima

在植物分类学上隶属于双子叶植物纲（DDicotyledoneae）山毛榉目（Fagales）壳斗科（Fagaceae）

栗属（Castanea）落叶乔木或灌木，成熟果实实两侧为平面形，或内侧平面性、外侧为半圆形，或呈近圆

形，果皮红褐色、灰褐色至深褐色，长1.8cm～3.5cm，宽1.0cm～2.5cm，高1.5cm～3cm。果实营养

丰富，是我国记载最早的著名食用坚果之一。板栗作为块菌的共生宿主，根部形成菌根。

3.2

印度块菌tuberindicum

真菌分类学中隶属于子囊菌门(Ascomyycota)块菌目(Tubrales)块菌科(Tuberaceae)块菌属(Tuber)，子

实体生于地表下，球形、近球形、椭圆形或不不规则性块状，幼时紫红褐色，成熟后紫褐色、黑褐色或黑

色；表面有明显的金字塔形或多角形尖顶瘤突；产孢组织幼时白色或灰白色，随着成熟逐渐变为黄褐色、

褐色、黑褐色或黑色，由无色薄壁的交织菌丝组成；有白色、分枝、迷路状细菌脉。子囊球形、椭圆形

或不规则形，无色，常无柄；子囊孢子14.3um~45um×12um~40um，深褐色，卵圆形、长椭圆形，表

面有离散的刺。子实体成熟时营养丰富，有特殊芳香气味，与宿主共生。

3.3

宿主host

为菌根真菌提供依附和形成共生关系的植物体。

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3.4

外生菌根ectomycorrhizae

菌根真菌菌丝体侵染宿主植物尚未木栓化的营养根，并且菌根真菌菌丝体仅在植植物根的皮层细胞壁

之间延伸生长并不穿透到细胞内部，而形成的一种共生结构。主要特征是菌丝在植物物营养幼根表面形成

菌套(mantle)，同时侵入到根的皮层组织细胞间形成哈氏网(Hartignet)。

3.5

菌根性食用菌ediblemycorrhizalfungi

外生菌根真菌与植物根系建立共生关系后，能产生人类可食用的子实体的大型真菌的统称。

3.6

无外生菌根菌幼苗ectomycorrhizal-freeseedling

相对于全无菌洁净空间而言，在包含空间、容器、基质、树种、水等在内的必须条件中没有能与宿

主树种形成共生关系的大型真菌孢子（菌种）的育苗环境里，培育出的根系没有共生菌根的幼苗。

3.7

孢种液sporefluid

指用成熟块菌子实体组织研磨得到的孢子悬浮液。

3.8

菌根苗mycorrhizalseedling

块菌与板栗共培育形成的菌根苗。

3.9

单株菌根率mycorrhizalrateperplant

单株菌根苗中，培育形成的菌根量占菌根苗全部根系的百分比。

3.10

炼苗hardening-seedling

在专用温室（棚）培育的菌根苗木，先采取适当控温、控水措施，再将幼苗移移至室外，对幼苗强行

锻炼，提高其抗逆性，使其适应野外环境条件，刺激菌根活力，缩短缓苗时间的过程。

4培育无外生菌根菌幼苗

4.1种子保存

4.1.1印度块菌菌种保存：成熟的印度块菌子实体。

4.1.2带湿润泥土或洗净泥沙晾至子实体表面无水渍装入自封袋，用手排除空气或抽真空后置于

0℃～6℃低温保存≤30d。

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4.1.3板栗种子保存：选择新鲜、成熟、饱满，无虫蛀板栗。

4.1.4无菌水清洗后用浓度为5‰的高锰酸钾溶液浸泡种子10min，进行表面消毒，采用灭菌沙，一

层种子覆一层沙进行层积贮储。

4.2育苗设施

在专用育苗温室或大棚培育菌根苗，育育苗室（棚）门、窗应具有防虫网，有顶窗通风条件；育苗室

（棚）外顶应有可开关的遮光率≥80%的遮阳网，内应有可开关的保温膜；有空中喷灌设施，喷头距育

苗床床面150cm～180cm；育苗床床面距地面≥60cm高。

4.3基质准备

育苗基质草炭：珍珠岩：河沙（或山砂）按体积比6:3:1混合，加入无菌水拌均匀，含水率25%～30%，

装袋，在121℃、110kPa的高温高压下灭菌2h后冷却到室温待用。

4.4育苗盘及盆钵消毒

用5‰高锰酸钾溶液浸泡2h，取出后用无菌水洗去浸泡液。

4.5种子消毒及播种

板栗种子用无菌水选法除去泥沙和霉烂种子后放入30%双氧水中3min～5min或洁尔灭中30min～40

min消毒，捞起用无菌水洗净药液，播入消毒后盆钵或育苗盘中，表面覆土2cm～3cm，用无菌水浇灌。

4.6培育无外生菌根菌幼苗

播种后的容器置于温室（棚）中培育60d～150d，幼苗长至3片～5片真叶，主根系长度≥5cm或拥

有3条～5条侧根，无外生菌根菌幼苗达到接种要求。

5接种前准备

5.1制种用块菌子实体消毒

印度块菌成熟子实体于常温室内，洗净表面，置于75％酒精中3s～5s,用滤纸吸干表面的酒精，

用无菌小刀削去子实体表皮，切成约1cm×1cm小方块。

5.2配制孢种原液

搅拌机用75%酒精擦拭后，用无菌水冲洗，反复3次，每次称取切成小块的子实体65g放入准备好的

搅拌机，加入无菌水400mL～500mL，搅拌机8000rpm/min～19000rpm/min粉碎10s～30s，加入无菌

水配制成浓度为10%的孢种原液，装入已灭菌的瓶中密封，宜随制随用或容器密封置于0℃～4℃低温

保存，5d内用完。

5.3配制接种基质

将准备好的基质加入无菌水拌均匀，用石灰或Ca(OH)2将pH值调到pH6.5～pH7.5，含水率25%～30%。

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6接种

6.1配制接种用孢种液

将制备的10%孢种原液用冷却无菌水稀释到1%～3%，pH值调到pH6.5～pH7.5,置于敞口容器。

6.2接种

板栗无外生菌根菌幼苗根部置于稀释的孢种液中没过茎基部，浸泡15min～25min；配制好的基质

装入底径≥8.5cm、口径≥10cm、高度≥18cm容器，基质总量占容器的1/2～2/3，孢种液浸根的苗木

植于容器中，覆土，土层距容器口2cm～3cm，定根水浇无菌水，置于育苗温室内培养。

7接种后管理

7.1水

培养初期应用无菌水浇灌，保持基质湿润，基质湿度最适25%～28%；接种培养30d～70d随机抽检，

目测有菌根形成,浇灌的水即可换为洁净自来水至棚外炼苗。

7.2温度

室内温度最适20℃～25℃，夏季控温≤32℃；冬季控温≥1℃。

7.3湿度

室内相对湿度最适60%～70%。

8病虫害防治

菌根苗初发白粉病时，用0.5mol/L浓度石灰水喷洒有病植株或移除病株。

9检验

9.1抽样

9.1.1采取随机抽样方法，用DB52/T294-200074.1.2方法，按表1规则抽样。

表1苗木检测抽样数量

苗木株数检测株数

500～100050

1001～10000100

10001～50000250

50001～100000350

100001～500000500

500001及以上750

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9.2抽检时间

9.2.1第一次抽检：苗木接种后30d～60d开始进行检查，感染其他杂菌应立即移除。

9.2.2第二次抽检：接种后120d～180d，检验菌根量的多少，菌根率＜40%或无菌根的应在第二年2

月～4月或7月～8月两个时间段进行第二次接种。

9.2.3第三次抽检：定植前的抽检，检验菌根发育情况，菌根发育良好，菌根率≥40%的菌根苗可野外

移栽定植。

9.3检测方法与判断

9.3.1随机抽检：育苗期间不定期随机抽检，目测带土苗木生长到基质表面的根部，有菌根时，再用

≥20倍手持放大镜观察菌根的发育形态正常、无污染，放回容器继续培育；无菌根形成或菌根量少补

接孢种，污染的则移除、废弃。

9.3.2镜检：每隔30d～60d随机抽取菌根苗，取菌根切片显微镜检测菌根，切片应具有块菌菌根的形

态结构。

9.3.3分子检测：剪切镜检合格菌根苗的菌根，进行DNA检测，序列比对，有污染和非块菌菌根的移

除、废弃。

9.3.4菌根率计算：菌根苗接种12个月后炼苗，炼苗期间采用随机区组计数法计算菌根率。计算方法

如下：

a)制作计数板：计数板上的小方格，随机选1/4染深颜色，

b)