基本知识与技能

第1讲

生物检测技术

基本知识和基本技能黄雅琴

2基本内容6.实验记录与实验报告5.试剂配制与保存1.人员防护(重点)2.安全用水、用电、用气7.课堂总结3.实验室废液处理4.器材的清洗与使用3生物检测涉及到生物化学技术、免疫学技术、分子生物学和细胞生物学等技术，这些技术大都用到很多有毒的、易爆的、高温的及放射性的等化学试剂，而且操作过程也十分严格学习的必要性为了保证实验过程中人身安全、仪器安全及实验结果准确4

一、人员防护567一、人员防护1在实验室工作时，任何时候都必须穿着连体衣、隔离服或工作服。禁止在实验室工作区域进食、饮水、吸烟、化妆和处理隐形眼镜。2在进行可能直接或意外接触到血液、体液以及其他具有潜在感染性的材料或感染性动物的操作时，应戴上合适的手套。手套用完后，应先消毒再摘除，随后必须洗手。3在处理完感染性实验材料和动物后，以及在离开实验室工作区域前，都必须洗手。8一、人员防护4为了防止眼睛或面部受到泼溅物、碰撞物或人工紫外线辐射的伤害，必须戴安全眼镜、面罩（面具）或其他防护设备。5严禁穿着实验室防护服离开实验室，（如去餐厅、咖啡厅、办公室、图书馆、员工休息室和卫生间）。6不得在实验室内穿露脚趾的鞋子。禁止在实验室工作区域储存食品和饮料。在实验室内用过的防护服不得和日常服装放在同一柜子内。97、实验时，皮肤如果被玻璃或利器割伤，先检查伤口是否有玻璃碎片，若有玻璃碎片，需小心地拔出，然后用碘伏或生理盐水消毒，贴上创可贴或进行包扎，伤口深的要接受医生的检查处理。8、发生烧烫伤，宜尽早进行，要以冷水冲洗15-30min或用冰块冷敷，散热止痛，伤处的衣裤袜之类应剪开取下，不可剥脱。在伤口上涂以碘伏，小面积可自行包扎，大面积尽快送至医院。

一、人员防护10119、除了高温以外，液氮、强酸、强碱、强氧化剂、苯酚等物质都会灼伤皮肤，应注意不要接触，尤其防止溅入眼中。酸5%NaHCO3甘油碱大量水冲洗饱和硼酸或3%醋酸

大量水冲洗

酚用浸了甘油和酒精混合液（7：3）的棉花除去污物

一、人员防护饱和硫酸钠溶液湿敷1210、如果有毒物溅入口中，而没有下咽，应立即吐出，用大量清水冲洗口腔。如吞下毒物应立即送医院。如吸入有毒气体，应立即移至室外空气新鲜的地方，解开衣领，不能进行人工呼吸。有毒试剂，如溴化乙锭，聚丙烯酰胺，具有致癌危险，要戴手套和口罩操作。

一、人员防护1311、实验室的辐射，主要是紫外线、X射线、放射性同位素等。其中，紫外线常用于实验室和超净工作台的灭菌，但人体长期反复接受紫外线照射，会导致皮肤灼伤，视力下降，甚至诱发皮肤癌和白内障。特别是8-15周龄的发育期婴儿，受到了强辐射，会增加先天性畸形的概率。

一、人员防护1412、如果发生触电，迅速切断电源，如果触电是由断裂、掉下的电线或漏电的电器造成的,可以用干燥的物品,如木棒、扁担等,把电线挑开,或把电器推开。切断电源之前千万不能用手去拉伤者,否则救护者自己也会触电。切断电源后,要一面通知医生前来救治,一面立即查看触电者的情况。在等待医生到来的时间里,应进行胸外心脏按压和口对口人工呼吸。心肺复苏抢救要争分夺秒,不能犹豫迟疑,不能坐等,也应避免不必要的搬运病人,在医生到来之前就应开始抢救措施。

一、人员防护1516二、安全用水、用电、用气

------------------用水1、实验过程中注意蒸馏水和双蒸水的制备过程及储存，防止水被污染，同时保持仪器的正常运转和安全。2、用水完毕关闭水龙头。若实验室停水，一定要关闭水龙头。3、用水要远离电源开关以及用电设备，以防漏电。17181、实验室内的电气设备的安装和使用管理，必须符合安全用电管理规定。2、手上有水或潮湿，请勿接触电器用品或设备，严禁使用水槽旁的电器插座，防止漏电或触电。3、必须掌握实验室的仪器，设备的性能和操作方法，严格按操作规程操作。设备用毕，一定要关闭电源开关，拔掉电源插座。二、安全用水、用电、用气

------------------用电194、电器插座请勿接太多插头，以免电流负荷过大，引起火灾。二、安全用水、用电、用气

------------------用电201、使用气瓶时，严格按照说明书上的正确顺序打开，开启气门时应站在气压表的一侧，不能对准总阀，以防阀门冲出，使用完毕，按顺序关闭阀门。2、气瓶内气体不可用尽，以防倒灌。二、安全用水、用电、用气

------------------用电213、高压灭菌锅使用注意事项：⊙应由受过良好培训的人员负责高压灭菌器的操作和日常维护。⊙每次使用前，检查水位，加入蒸馏水到正常水位线。⊙在打开盖子前，确认压力已归于“0/npa”以下。⊙所有要高压灭菌的物品都应放在空气能够排出并具有良好热渗透性的容器中；灭菌器柜腔装载要松散，以便蒸汽可以均匀作用于装载物。⊙高压灭菌液体时，由于取出液体时可能因过热而沸腾，一定要选择慢排气，且要小心，以防被烫伤。⊙应当注意保证高压灭菌器的安全阀没有被高压灭菌物品中的纸等堵塞。二、安全用水、用电、用气

------------------用电22三、实验室废液处理化学性污染生物性污染放射性污染：同位素标记探针有机物污染无机物污染：强酸、强碱的污染，重金属污染，氰化物污染等。其中汞、砷、铅、镉、铬等重金属的毒性不仅强，且有在人体中有蓄积性。有机试剂污染：有机溶剂有机样品污染：如农药、黄曲霉毒素、亚硝胺等。生物废弃物污染：检验实验室的标本，如血液、尿、粪便、痰液和呕吐物等；检验用品，如实验器材、细菌培养基和细菌阳性标本等。生物细菌毒素污染：生物实验室的通风设备设计不完善或实验过程个人安全保护漏洞，会使生物细菌毒素扩散传播，带来污染，甚至带来严重不良后果。23化学类废物：一般的有毒气体可通过通风橱或通风管道，经空气稀释排出。大量的有毒气体必须通过与氧充分燃烧或吸收处理后才能排放。

废液应根据其化学特性选择合适的容器和存放地点，通过密闭容器存放，不可混合贮存，容器标签必须标明废物种类、贮存时间，定期处理。一般废液可通过酸碱中和、混凝沉淀、次氯酸钠氧化处理后排放，有机溶剂废液应根据性质进行回收。三、实验室废液处理24生物类废物：液体废物一般可加漂白粉进行氯化消毒处理。固体可燃性废物分类收集、处理、一律及时焚烧。固体非可燃性废物分类收集，可加漂白粉进行氯化消毒处理。满足消毒条件后作最终处置。

1.一次性使用的制品如手套、帽子、工作物、口罩等使用后放入污物袋内集中烧毁。

2.可重复利用的玻璃器材如玻片、吸管、玻瓶等可以用1000-3000mg/L有效氯溶液浸泡2-6h．然后清洗重新使用，或者废弃。

3.盛标本的玻璃、塑料、搪瓷容器可煮沸15min.或者用1000mg/L有效氯漂白粉澄清液浸泡2-6h，消毒后用洗涤剂及流水刷洗、沥干；用于微生物培养的，用压力蒸汽灭菌压力灭菌30min，趁热将琼脂倒弃处理。

5.尿、唾液、血液等生物样品，加漂白粉搅拌后作用2-4h，倒入化粪池或厕所。或者进行焚烧处理。三、实验室废液处理25放射性废弃物：

一般实验室的放射性废弃物为中低水平放射性废弃物，将实验过程中产生的放射性废物收集在专门的污物桶内，桶的外部标明醒目的标志半衰期短(如：碘131、磷32等)的废弃物，用专门的容器密闭后，放置于专门的贮存室，放置十个半衰期后排放或者焚烧处理。半衰期较长(如：铁59、钴60等)的废弃物，液体可用蒸发、离子交换、混凝剂共沉淀等方法浓缩，装入容器集中埋于放射性废物坑内。三、实验室废液处理26四、器材的清洗与使用1清洗①玻璃器材：初次使用：新的玻璃仪器表面常附着有游离的碱性物质，可先用肥皂水洗刷再用自来水洗净，然后浸泡在1%-2%盐酸溶液中过夜（不少于4h），再用自来水冲洗，最后用蒸馏水冲洗3次，在烘箱内烘干备用。已使用过：先用自来水洗刷附着的试剂、蛋白质等物质，再选用大小合适的毛刷蘸取洗衣粉，将器材内外（特别是内壁）细心刷洗，用自来水冲洗干净，蒸馏水冲洗3次，烘箱内烘干备用。需要灭菌的器材，用牛皮纸或报纸包装好，于121℃高压蒸汽灭菌21min，取出于烘箱内烘干备用。27②塑料器材：多为一次性使用的，也有反复使用的。自来水浸泡冲洗→晾干→3%HCl或2%NaOH溶液浸泡过夜→自来水冲洗→双蒸水冲洗3次→晾干→紫外线照射灭菌四、器材的清洗与使用28四、器材的清洗与使用③橡皮器材：自来水浸泡冲洗→洗衣粉加热煮沸10min→蒸馏水煮沸2次（每次15min）→单蒸水冲洗3次→晾干→紫外线照射灭菌29四、器材的清洗与使用④金属器材：

用自来水冲洗干净，蒸馏水冲洗3次，烘干后用牛皮纸或报纸包装好，于121℃高压蒸汽灭菌21min，取出于烘箱内烘干备用。

常见的有：接种针，镊子，解剖刀等30四、器材的清洗与使用2、使用常见的有：量筒、烧杯、试管、容量瓶、培养皿、移液管、移液器、干燥箱、离心机、天平、酶标仪、高压灭菌锅、超净工作台、电泳仪、PCR仪、光学显微镜等。31观看视频学习移液器的使用四、器材的清洗与使用32五、试剂配制与保存1、称量

固体试剂用玻璃纸，在托盘天平和电子天平上称取。

液体试剂或母液根据需求量的大小，用移液器、移液管或量筒量取。观看视频学习电子天平的使用33五、试剂配制与保存2、配制试剂配制中的溶剂一般为蒸馏水，特殊试剂或非水为溶剂的试剂要注明清楚。蒸馏水的水质必须符合规定，无污染。将水加入试剂，用玻璃棒或磁力搅拌，耐高温稳定的试剂也可以加热助溶。343、灭菌一般的化学试剂、培养基或其它试剂，要用高压灭菌锅湿热灭菌20-30min。活性物质，如酶液、细胞培养液、维生素及抗生素等的配制需要通过在超净台上过滤灭菌。五、试剂配制与保存354、试剂的保管①所有药品都有明显标签，标明药品名称、质量规格及配制日期；最好还有危险性质的明显标志。标签日久会受腐蚀气体损坏，甚至全部剥落，如果不及时换新标签，就会变成无名物，有误用的危险。注上生产日期或配制日期，对于易变质物可以正确判定应否销毁。②分类存放，互相作用药品不能混放，必须隔离存放。易燃物、易爆物及强氧化剂只能少量存放。③贮存室或药柜必须保持整齐清洁。④经常检查药品瓶子或其他包装完整情况，标签是否完整，有无其他危险潜伏。⑤无名物、变质物要及时清理销毁。⑥分子生物学试剂一般要低温冰箱保存，必要时要冷冻保存，为了避免反复冻融，一般分装成小管储存。五、试剂配制与保存36危险药物分类存放的原则及存放要求：①易挥发药品：远离热源火源，于避光阴凉处保存，通风良好，不能装满。②腐蚀性液体：放于底下，以免不慎跌下，洒出发生烫伤事故。③发生有毒气体或烟雾的药品：存于通风橱中，并在其中量取。④剧毒药品：锁上。⑤致癌药品：有致癌药品的明显标志，锁上。⑥互相作用的药品：隔离存放。⑦特别保存的物品：金属钠、钾等碱金属，贮于煤油中。黄磷，贮于水中。吸潮物、易水解物，贮于干燥处，封口应严密。易氧化易分解物，存于阴凉暗处，用棕色瓶或瓶外包黑纸盛装。但双氧水不要用棕色瓶（有铁质促使分解）装，最好用塑胶瓶装外包黑纸。⑧放射性物品未经幅射物质管理部门批准，不得存放使用！五、试剂配制与保存37六、实验记录与实验报告实验记录：