【高中生物】考纲规定的17个实验（其六）

【高中生物】考纲规定的17个实验（其六）二鉴定物质成分的生化实验6、生物组织中可溶性还原糖、脂肪、蛋白质的鉴定原理：还原糖+斐林试剂砖红色沉淀

脂肪+苏丹III橘黄色脂肪+苏丹III橘黄色苏丹IV红色蛋白质+双缩脲试剂紫色反应还原糖的检测（1）材料的选取：还原糖含量高，白色或近于白色，如苹果，梨，白萝卜。（2）试剂：斐林试剂（甲液：0.1g/mL的NaOH溶液，乙液：0.05g/mL的CuSO4溶液），现配现用。（3）步骤：取样液2mL于试管中→加入刚配的斐林试剂1mL（斐林试剂甲液和乙液等量混合均匀后再加入）→水浴加热2min左右→观察颜色变化（白色→浅蓝色→砖红色）模拟尿糖的检测

1、取样：正常人的尿液和糖尿病患者的尿液2、检测方法：斐林试剂（水浴加热）或班氏试剂或尿糖试纸3、结果：（用斐林试剂检测）试管内发生出现砖红色沉淀的是糖尿病患者的尿液，未出现砖红色沉淀的是正常人的尿液。4、分析：因为糖尿病患者的尿液中含有还原糖，与斐林试剂发生反应产生砖红色沉淀，而正常人尿液中无还原糖，所以没有发生反应。脂肪的检测（1）材料的选取：含脂肪量越高的组织越好，如花生的子叶。（2）步骤：制作切片（切片越薄越好）将最薄的花生切片放在载玻片中央

染色（滴苏丹Ⅲ染液2～3滴切片上→2～3min后吸去染液→滴体积分数50%的酒精洗去浮色→吸去多余的酒精）制作装片（滴1～2滴清水于材料切片上→盖上盖玻片）镜检鉴定（显微镜对光→低倍镜观察→高倍镜观察染成橘黄色的脂肪颗粒）蛋白质的检测（1）试剂：双缩脲试剂（A液：0.1g/mL的NaOH溶液，B液：0.01g/mL的CuSO4溶液）（2）步骤：试管中加样液2mL→加双缩脲试剂A液1mL，摇匀→加双缩尿试剂B液4滴，摇匀→观察颜色变化（紫色）疑难点拔：本实验为验证类实验。①葡萄糖、果糖和麦芽糖的分子内含醛基，醛基具有还原性，可与弱氧化剂反应。与醛基有特定颜色反应的化学试剂可用来鉴定这三种糖的存在：a、利用斐林试剂；b、利用班氏试剂：由A液（CuSO4溶液）和B液（柠檬酸钠和碳酸溶液）配制而成；c利用银氨溶液；结果出现银镜。②脂肪的鉴定可用苏丹III、苏丹IV。③蛋白质的鉴定可用双缩脲试剂、浓硝酸试剂（结果形成黄色沉淀）④斐林试剂与双缩脲试剂都由NaOH和CuSO4组成，但二者有以下不同：a、溶液浓度不同；b、使用原理不同（斐林试剂是新配制的CU/OH2溶液；双缩脲试剂是碱性环境下的Cu2+）c、使用方法不同。考点提示：

（1）常见还原性糖与非还原性糖有哪些？（2）还原性糖植物组织取材条件？（3）研磨中为何要加石英砂？不加石英砂对实验有何影响？（4）斐林试剂甲、乙两液的使用方法？混合的目的？为何要现混现用？（5）还原性糖中加入斐林试剂后，溶液颜色变化的顺序为：（6）花生种子切片为何要薄？（7）转动细准焦螺旋时，若花生切片的细胞总有一部分清晰，另一部分模糊，其原因一般是什么？（8）脂肪鉴定中乙醇作用？（9）双缩脲试剂A、B两液是否混合后用？（1）葡萄糖、果糖、麦芽糖都是还原性糖；淀粉、蔗糖、纤维素都是非还原性糖。（2）含糖量较高、颜色为白色或近于白色，如：苹果、梨、白色甘蓝叶、白萝卜等。（3）加石英砂是为了使研磨更充分。不加石英砂会使组织样液中还原性糖减少，使鉴定时溶液颜色变化不明显。（4）混合后使用；产生氢氧化铜；氢氧化铜不稳定。（5）浅蓝色棕色砖红色（6）只有很薄的切片，才能透光，而用于显微镜的观察。（7）切片的厚薄不均匀。（8）洗去浮色。（9）不能混合；先加A液的目的是使溶液呈碱性；先留出一些大豆组织样液做对比。7、DNA的粗提取与鉴定考点提示：

疑难点拔：①制备鸡血细胞液时离心后除去上清液。②实验过程中两次加入蒸馏水的作用不同。第一次的目的是为了使外界溶液浓度大于血细胞内细胞液的浓度，细胞大量吸水胀破得到DNA；第二次的目的是降低Nacl溶液浓度到DNA溶解度最低点，这样DNA分子可以从Nacl溶液中析出。（1）鸡血能用猪血代替吗？为什么？（2）鸡血中为何要加柠檬酸钠？为何要弃去鸡血细胞的上清液？

（3）胀破细胞的方法？能用生理盐水吗？

（4）该实验中最好应用玻璃烧杯还是塑料烧杯？为什么？（5）前后三次过滤时，所用纱布的层数分别是多少？为什么？（6）若实验中所得黏稠物太少，其原因是什么？（7）两次加入蒸馏水的目的分别是什么？（8）实验中搅拌溶液时，为何总要沿一个方向搅拌？（9）两次析出DNA的方法分别是什么？原理分别是什么？（10）三次溶解DNA的液体分别是什么？原理分别是什么？（11）鉴定DNA时为何要用两支试管？其现象分别是什么？（1）不能，因为哺乳动物的红细胞中没有细胞核，不能提取DNA.（2）防止血液凝固；因为上清液是血浆，不含细胞和DNA.（3）向血细胞中加入蒸馏水，使细胞大量吸水而胀破；不能用生理盐水，因为血细胞在蒸馏水中不能吸收水分。（4）最好用塑料烧杯，因为玻璃烧杯容易吸附DNA.（5）第一次用一层纱布，有利于核物质透过纱布进入滤液；第二次用多层纱布，能防止DNA丝状物透过纱布进入滤液；第三次用两层纱布，既有利于DNA透过纱布，又能防止其它杂质透过纱布。（6）第一次加蒸馏水过少，细胞未充分胀破；第二次加蒸馏水过多或过少；第一次过滤用了多层纱布；第二次过滤用了一层纱布。（7）第一次是为了使血细胞吸水胀破；第二次是为了降低氯化钠的浓度，有利于DNA有析出。（8）防止DNA分子受到损伤。（9）第一次是加蒸馏水，降低氯化钠的浓度，促使DNA析出；第二次是加入冷酒精，因为DNA不溶于酒精溶液。（10）第一次、第二次都是用浓度为2mol/L的氯化钠溶液，第三次用的是0.015mol/L（或2mol/L）的氯化钠溶液。其原理是DNA在氯化钠中的溶解度，是随着氯化钠的浓度的变化而改变的。当氯化钠的物质的量浓度为0.14mol/L时，DNA的溶解度最低。2mol/L的氯化钠溶液和0.015mol/L的氯化钠溶液对DNA的溶解度都比较高。（11）其中不加DNA的试管起对照作用。该试管溶液不变色，另一支加有DNA的试管溶液变蓝色。三物质性质的探索实验8、酶的高效性注意问题：①实验时必须用新鲜的、刚从活的动物体中取出的肝脏作实验材料。肝脏如果不新鲜，肝细胞内的过氧化氢酶等有机物就会在腐生细菌的作用下分解，使组织中酶分子的数量减少且活性降低。②实验中使用肝脏的研磨液，可以加大肝细胞内过氧化氢酶与试管中过氧化氢的接触面积，从而加速过氧化氢的分解。考点提示：

（1）为何要选新鲜的肝脏？（2）该实验中所用试管应选较粗的还是较细的？为什么？（3）为何要选动物的肝脏组织来做实验，其他动植物的组织的研磨液能替代吗？（4）相同质量的块状肝脏和肝脏研磨液，哪一个催化效果好？为什么？（5）滴入肝脏研磨液和氯化铁溶液时，可否共用下个吸管？为什么？（1）因为在不新鲜的肝脏中，过氧化氢酶的活性会由于细菌的破坏而降低。（2）应选用较粗的，因为在较细的试管中容易形成大量的气泡，而影响卫生香的复燃。（3）因为肝脏组织中过氧化氢酶含量较丰富；其它动植物组织也含有少量的过氧化氢酶，所以能够替代。（4）研磨液效果好；因为它增加过氧化氢酶与过氧化氢的接触面积。（5）不可共用，防止过氧化氢酶与氯化铁混合，而影响实验效果。9、酶的专一性（1）方案一：用同一种酶催化两种不同物质

淀粉（非还原糖）

麦芽糖（还原糖）

①蔗糖（非还原糖）

蔗糖用淀粉酶分别作用于淀粉和蔗糖后，再用斐林试剂鉴定，根据是否有砖红色沉淀生成来判断淀粉酶对二者是否有催化作用，从而探索酶的专一性。（2）方案二：用两种不同酶催化同一种物质

淀粉（非还原糖）

麦芽糖（还原糖）

①淀粉（非还原糖）

淀粉②再用斐林试剂鉴定，从而探究酶的专一性。疑难点拔：这三个实验为探索类实验。①探索酶的高效性时，应合理设计对照实验，严格控制实验变量。②探索酶的专一性时，设计实验首先要从已知入手，确定何为实验变量（自变量），何为因变量，何为控制变量。淀粉、蒸糖水解的产物，水解的速率等为变化的结果，即因变量，从因变量入手我们将推知自变量（实验变量）即淀粉酶对其的影响程度或它们之间的关系。淀粉、蔗糖在实验过程中的浓度、用量，淀粉酶的浓度、用量。水解过程的温度等都为控制变量，需遵循同时等量原则，以排除控制变量对2个水解反应的影响。③探索温度对酶活性的影响时，通过研究某一因素，如温度（实验变量）对某一特定反应的影响时，要在其他因素（控制变量）相同的条件下进行。观察不同的实验变量（如不同的温度）对特定反应的影响结果（因变量），以便对实验结果（实验变量与因变量关系）进行科学的分析。10、温度对酶活性的影响原理

：淀粉遇碘变蓝，淀粉酶可水解淀粉水解成麦芽糖和葡萄糖，麦芽糖和葡萄糖遇碘不变蓝。材料：2%的新鲜淀粉酶溶液，3%的可溶性淀粉溶液，热水，冰块，碘液步骤：疑难点拔：这三个实验为探索类实验。①探索酶的高效性时，应合理设计对照实验，严格控制实验变量。②探索酶的专一性时，设计实验首先要从已知入手，确定何为实验变量（自变量），何为因变量，何为控制变量。淀粉、蒸糖水解的产物，水解的速率等为变化的结果，即因变量，从因变量入手我们将推知自变量（实验变量）即淀粉酶对其的影响程度或它们之间的关系。淀粉、蔗糖在实验过程中的浓度、用量，淀粉酶的浓度、用量。水解过程的温度等都为控制变量，需遵循同时等量原则，以排除控制变量对2个水解反应的影响。③探索温度对酶活性的影响时，通过研究某一因素，如温度（实验变量）对某一特定反应的影响时，要在其他因素（控制变量）相同的条件下进行。观察不同的实验变量（如不同的温度）对特定反应的影响结果（因变量），以便对实验结果（实验变量与因变量关系）进行科学的分析。11、叶绿体中色素的提取和分离原理：叶绿体中的色素能溶解于丙酮中，可以用丙酮提取叶绿体中的色素。色素在石油醚中的溶解度不同，随石油醚在滤纸上扩散的速度不同，从而分离四种色素。步骤：1）提取色素研磨（2）制备滤纸条（3）画滤液细线：均匀，直，细，重复若干次（4）分离色素：不能让滤液细线触及层析液（5）观察和记录：结果滤纸条上从上到下依次为：橙黄色（胡萝卜素）、黄色（叶黄素）、蓝绿色（叶绿素a）、黄绿色（叶绿素b）。疑难点拔：四条色素带的分布与色素扩散速度有关，而扩散速度大小由分子量大小所决定，这四种色素的分子量分别是：胡萝卜素（C40H56）536、叶黄素（C40H56O2）568、叶绿素a（C55H72O5N4Mg）892、叶绿素b（C55H70O6N4Mg）906，所以色素带从上到下，即扩散从快到慢依次为胡萝卜素、叶黄素、叶绿素a、叶绿素b。胡萝卜素与叶黄素分子量相差32，叶绿素a与叶绿素b的分子量相差14，故前二种色素的距离大于后二种色素的距离。色素带的粗细与色素的含量有关。通常叶绿素含量是类胡萝卜素的四倍，叶绿素a的含量是叶绿素b的三倍，叶黄素含量是胡萝卜素的二倍，含量越多，色素带就会越浓越粗，故由浓粗到淡细依次是：叶绿素a>叶绿素b>叶黄素>胡萝卜素。考点提示：

（1）对叶片的要求？为何要去掉叶柄和粗的时脉？（2）二氧化硅的作用？不加二氧化硅对实验有何影响？（3）丙酮的作用？它可用什么来替代？用水能替代吗？（4）碳酸钙的作用？不加碳酸钙对实验有何影响？（5）研磨为何要迅速？要充分？过滤时为何用布不用滤纸？（6）滤纸条为何要剪去两角？（7）为何不能用钢笔或圆珠笔画线？（9）滤液细线为何不能触到层析液？（10）滤纸条上色素为何会分离？

（11）色素带最宽的是什么色素？（12）滤纸条上相互间距最大的是哪两种色素？（13）色素带最窄的是第几条色素带？为何？（1）绿色、最好是深绿色。因为叶柄和叶脉中所含色素很少。（2）为了使研磨充分。不加二氧化硅，会使滤液和色素带的颜色变浅。（3）溶解色素。它可用酒精等有机溶剂来代替，但不能用水来代替，因为色素不溶于水。（4）保护色素，防止在研磨时叶绿体中的色素受到破坏。不加碳酸钙，滤液会变成黄绿色或褐色。（5）研磨