微生物检验理论课 16放线菌属 学习资料

放线菌属、诺卡菌属、分枝杆菌属检验检验系柴志欣CompanyLogoCompanyLogo放线菌属与诺卡菌属

Actinomyces&Nocardia放线菌目（Actinomycetales）分枝杆菌属（Mycobacterium）诺卡菌属（Nocardia）棒状杆菌属（Corynebacterium）放线菌属（Actinomyces）（1）含分枝菌酸

-诺卡菌属（Nocardia）-分枝杆菌属（Mycobacterium）

-棒状杆菌属(Corynebacterium)（2）不含分枝菌酸

-放线菌属（Actinomyces）分类放线菌属与诺卡菌属的比较特征放线菌属诺卡菌属培养特性厌氧或微需氧专性需氧抗酸性非抗酸性弱抗酸性分布人体的正常菌群存在于自然环境中感染性内源性感染外源性感染致病性慢性化脓性感染以及龋齿和牙周炎化脓性感染，如肺炎，足分枝菌病正常寄居：人和动物口腔、上呼吸道、胃肠道和泌尿生殖道；大部分为正常菌群，主要引起内源性感染，对人致病的主要为衣氏放线菌；放线菌是制备抗生素的重要来源。据估计，已发现的4000多种抗生素中，如红霉素、链霉素等，有2/3是放线菌产生的。放线菌属Actinomyces

放线菌科→放线菌属（Actinomycete）→12个种。放线菌：自然界广泛存在，主要存于土壤及正常人口腔、上呼吸道、胃肠道和泌尿生殖道等与外界相通的腔道，属正常菌群。存于人体、动物体内的有：衣氏（以色列）放线菌（A.israelii）、内氏放线菌（A.naeslundii）、黏性放线菌（A.viscosus）、龋齿放线菌（A.odontolyticus）、丙酸蛛网菌（Arachniapropionica）牛型放线菌（A.bovis）等——衣氏放线菌（A.israelii)G+、丝状杆菌、非抗酸性，培养困难，厌氧或微需氧生物学性状主要致病菌放线菌属内源性感染：机体抵抗力↓、口腔卫生不良、拔牙或外伤时引起，导致软组织化脓性炎症。若无继发感染，大多呈慢性无痛性过程，并常伴有多发性瘘管形成，排出黄色硫磺颗粒（sulfurgranule），此即放线菌病。硫磺样颗粒：放线菌的菌丝团，淡黄色、黄色或灰白色，形似硫磺颗粒，约粟粒大小。硫磺样颗粒：在患者病灶组织和瘘管中流出的脓汁中，肉眼可见黄色小颗粒，称硫磺样颗粒，是放线菌在组织中形成的菌落。将硫磺样颗粒制成压片或组织切片，在镜下可见放射状排列的菌丝，形似菊花状。衣氏放线菌硫磺颗粒压片（革兰染色，压片镜检呈菊花状）据感染途径和涉及器官，临床上分面颈部、胸部、腹部和中枢神经系统等感染。最常见：面颈部感染，约占患者60％。衣氏放线菌主要寄生在口腔，经破损处引起临近面、颈部感染，即放线菌病，也可吸入肺部起肺和胸部放线菌病。放线菌与龋齿和牙周炎有关。牛型放线菌→牛放线菌病。放线菌能产一种黏性很强的多糖物质6-去氧太洛糖（6-deoxytalose，6-DOT），使口腔中其他细菌也黏附在牙釉质上，形成菌斑。细菌对食物中糖类分解产酸，致腐蚀牙釉质。细菌能进一步引起牙龈炎和牙周炎。厌氧或微需氧（放线菌培养较困难，除牛型放线菌和麦氏放线菌为严格厌氧或罕见微需氧外，其他都为厌氧或微需氧）气体环境：有氧环境一般不生长，初次分离加5％CO2可促进其生长。营养培养基：牛心脑浸液琼脂平板培养生长缓慢，4～6天生长出灰白色、粗糙的小菌落（蜘蛛状、不规则结节状或臼齿状菌落）生化特性：溶血(-)、葡萄糖(+)、甘露醇(+)、吲哚(-)、过氧化氢酶试验(-)放线菌菌落固体培养基上菌落中的菌丝常从一个中心向四周辐射呈放射状生长而得名。大多数有发达的分枝菌丝。衣氏放线菌在厌氧血琼脂平板上的光滑型菌落（3-4d）衣氏放线菌在厌氧血琼脂平板上的粗糙菌落（3-4d）人工多次移种培养后获得纯培养，光滑型、白色有光泽、柔软、易于挑取的菌落。牛心脑浸液琼脂培基上，37℃厌氧培养18～24h，扁平、光滑、边缘整齐、颗粒状似小菌落。继续培养7～14天，菌落增大。放线菌属鉴定：以形态、培养特征为主；观察痰液颜色、粘度、有无血丝和是否呈脓性，如有颗粒存在，注意可能与放线菌属及奴卡菌属感染有关。最主要和简单方法：脓液、痰液和组织切片中寻找硫磺样颗粒；菌体分枝，呈网状、栅状或X、Y、V状排列，有琥珀酸气味者，大多是放线菌；种属鉴定常见放线菌菌种的生物学特性鉴别致病性放线菌为人体正常菌群。当机体抵抗力下降，口腔卫生不良、拔牙，或口腔黏膜受损时，可致内源性感染，引起放线菌病。放线菌病是软组织的化脓性炎症，若无继发感染，多呈慢性无痛性过程，常伴有多发性瘘管形成，脓汁中可找到特征性的硫磺样颗粒，可引起不同器官和组织感染。放线菌与龋齿和牙周炎有关。微生物学检查在脓液、痰液和组织切片中，寻找硫磺样颗粒，将可疑颗粒制成压片，在镜下观察特征性的放射状排列的菊花状菌丝。防治原则预防：注意口腔卫生，及时治疗牙周炎等牙病。治疗：脓肿及瘘管要及时进行外科清创处理；使用足量的抗生素。诺卡菌属（Nocardia）专性需氧含分枝菌酸分布：土壤中，多数：非致病菌引起人或动物急性或慢性诺卡菌病，主要是：

-星形诺卡菌（N.asteroides）

-巴西诺卡菌（N.brasiliensis）

生物学性状形态：与以色列放线菌相似革兰染色：阳性抗酸染色：阳性脱色时间延长：阴性(与TB区别)渗出液、痰或脓汁中有时可见淡黄、红色或黑色小颗粒类似硫磺样颗粒，称色素颗粒。星形诺卡菌纯培养的镜下形态（革兰染色）

培养特性营养要求：不高（沙氏或普通琼脂培养基）气体环境：需氧，有气生菌丝培养温度：室温或37℃生长速度：缓慢生长，约1周色素：星形诺卡菌：黄色或深橙色，无白色菌丝巴西诺卡菌：有白色菌丝菌丝断裂：5天后镜检可见链球状或链杆状（放线菌属：24h开始)培养特征：菌落：有皱褶、颗粒状诺卡菌菌落致病性侵入途径：呼吸道或皮肤创伤所致疾病：诺卡菌病（nocardiosis）外源性感染

化脓性感染

肺部：肺炎、肺脓肿、肺空洞脑部：脑脓肿、脑膜炎其他：肾、肝、脾、心包等（慢性肉芽肿，瘘管）好发于免疫缺陷患者临床意义主要累及严重免疫功能低下者30-40岁男性吸入,皮肤接触少星形奴卡氏菌(星状)和巴西奴卡菌最常见免疫正常:外科手术感染免疫低下:肺部感染临床症状不明显,进程慢抗生素治疗头孢类、喹诺酮类百炎净艾滋病合并感染者口服利福平加大环内酯类抗生素微生物学检查1.色素颗粒（即类似硫磺颗粒）压片2.取痰、脑脊液、脓汁：涂片---

革兰染色及抗酸染色3.分离培养：沙保弱或普通琼脂培养基，星形诺卡菌可在45℃生长。4.生化试验检查要点涂片镜检活菌与培养相结合生长缓慢,无菌体液推荐使用血培养瓶,最长需3周时间.目前尚无特别有效的培养基,有人建议使用培养奈瑟氏菌的含万古霉素的培养基或含活性炭酵母粉的培养基(军团菌)肉眼观察色素颗粒琼脂向内生长粗燥颜色:星形橙红色巴西橙棕色分枝杆菌属（Mycobacterium）1.

结核分枝杆菌复合群;2.

非结核分枝杆菌;3.麻风分枝杆菌。该属细菌分三类：分枝杆菌属（Mycobacterium）菌群生长特性人类常见致病菌种致人类主要疾病结核分枝杆菌复合群缓慢生长、不产色结核分枝杆菌(最常见)结核病牛分枝杆菌结核病非洲分枝杆菌结核病非结核分枝杆菌光产色菌缓慢生长、光产色堪萨斯分枝杆菌慢性肺部感染暗产色菌缓慢生长、暗产色瘰疬分支杆菌儿童淋巴腺炎不产色菌缓慢生长、不产色……迅速生长菌快速生长、不产色或产色……麻风分支杆菌人工培养基上不生长麻风病共同特点细胞壁含有大量脂质，可达菌体干重的60%左右。并与其染色性、抵抗力和致病性密切相关。G染色阳性，无鞭毛、芽孢。需氧。多数生长缓慢（2～8周），营养要求较高(血清和甘油等）。不产生内外毒素，致病性与菌体成分有关。一类细长或稍弯的杆菌，在繁殖时呈分枝生长而得名。此菌属的最显著的特性为其胞壁中含有大量脂类，可达菌体干重的60%左右。一般不易着色。若设法使之着色后，又不易被含3%HCI的酒精脱色。因能抵抗盐酸酒精脱色，又称为抗酸杆菌（acid-fastbacilli）。又称为结核杆菌，引起结核病。结核分枝杆菌（M.Tuberculosis）“她有如此的美貌根本不必有如此的演技；她有如此的演技根本不必有如此的美貌。”这句话是对费雯丽最高也是最中肯的评价。她出生于1913年是个学过芭蕾舞毕业于英国皇家戏剧学院的小姑娘，她是英国籍的好莱坞女演员，她获过两次奥斯卡最佳女主角，她是人们心目中永远的斯嘉丽。费雯丽因《乱世佳人》而名声大噪。《乱世佳人》给费雯丽带来了第一个奥斯卡最佳女演员奖，却让她付出了健康的代价。这部电影的拍摄场景地，庄园的红土，虽然给了斯嘉丽勇气和力量，却令费雯丽染上了肺结核。1967年7月7日费雯丽因病去世，享年53岁。1882年3月24日德国细菌学家罗伯特·郭霍（Koch,HeinrichHermannRobert）发现结核分枝杆菌（M.tuberculosis）是结核病的病原菌，俗名结核杆菌。世界结核病防治现状自发现MTB以来，全球约有两亿人死于TB，且疫情发展日趋严重。WHO已将TB作为重点控制的传染病之一，并于1995年起将每年的3月24日定为“世界防治结核病日”，以提醒公众加深对TB的认识。主题：2017年：联合起来消除结核：不让任何人掉队2016年：社会共同努力，消除结核危害。2015年：“你我共同参与，依法防控结核——发现、治疗并治愈每一位患者”。2014年：“你我共同参与，依法防控结核”。我国属于全球22个TB高负担国家之一，TB的患病人数在世界各国中居于第2位。我国TB的流行具有“五多一高”的特点：MTB感染人数多。现患肺TB病人多。TB死亡人数多。耐药TB人多。农村TB人多。传染性肺TB患者疫情居高不下。肺结核离你我并不遥远抗酸染色阳性、细长略弯曲杆菌。呈单个、分枝排列，或聚集成团；在陈旧的病灶和培养物中，形态常不典型，可呈颗粒状、串珠状、短棒状、长丝形等。无芽胞、鞭毛,细胞壁外有一层荚膜。形态与染色某些药物可影响结核杆菌细胞壁的结构而成为L型菌此时，菌细胞的形态变为颗粒状或丝状；菌落由粗糙型变为光滑型抗酸性减弱或消失

青霉素、环丝氨酸、溶菌酶→干扰肽聚糖的合成；异烟肼（INH）→影响细胞壁分枝菌酸的合成；L型结核杆菌丝状型细菌型颗粒型抗酸染色萋-尼氏(Ziehl-Neelsen)抗酸性染色法：分枝杆菌属的细菌细胞壁脂质含量高结核杆菌染成红色，其他非抗酸性细菌呈蓝色。结核分枝杆菌纯培养的镜下形态(抗酸染色)分枝杆菌属的细菌细胞壁脂质含量高，约占干重的60%，特别是有大量分枝菌酸（mycolicacid）包围在肽聚糖层的外面，可影响染料的穿入。分枝杆菌一般用萋-尼（Ziehl-Neelsen）抗酸染色法，以5%

石碳酸复红加温染色后可以染上，但用3%盐酸乙醇不易脱色。若再加用美蓝复染，则分枝杆菌呈红色，而其他细菌和背景中的物质为蓝色。

抗酸染色涂片镜检的报告方式－：未发现抗酸菌（至少300个油镜视野）；±：1～2个抗酸菌/300个油镜视野；（可疑，再送）＋：1～9个抗酸菌/100个油镜视野；2＋：1～9个抗酸菌/10个油镜视野；3＋：1～9个抗酸菌/每个油镜视野；4＋：≥10个抗酸菌/每个油镜视野。革兰氏染色：由于不易染色，通常视为阳性。荧光染色：金胺“O”染色，结核分枝杆菌呈现金黄色荧光。培养特性1．营养要求较高：Lowenstein—Jensen（L-J）即罗氏培养基（含蛋黄、甘油、马铃薯、无机盐和孔雀绿）含脂质生长因子，刺激生长抑制杂菌生长⑴2～4周见菌落生长←呈颗粒、结节或花菜状；乳白色或米黄色；不透明⑵液体培养基上呈菌膜生长←含脂质量多；专性需氧2．专性需氧；PH6.5

～

6.8培养特点：馋、懒、丑。馋--营养要求较高，必须在含血清、卵黄、马铃薯、孔雀绿、甘油以及含某些无机盐类的特殊培养基（罗氏）上才能生长良好。懒--生长缓慢，18h分裂1次，在固体培养基上2～4周才出现肉眼可见的菌落。丑--典型菌落为粗糙型，表面干燥呈颗粒状，不透明，乳白色或淡黄色，如菜花样。培养特性生化反应结核杆菌不发酵糖类1.人型与牛型结核杆菌的区别：人型可合成烟酸及还原硝酸盐，而牛型不能2.结核杆菌与非结核杆菌的区别：热触酶试验⑴结核杆菌触酶试验阳性，热触酶试验阴性；⑵非结核杆菌触酶试验、热触酶试验阳性※热触酶试验：将浓的细菌悬液置68℃水浴加温20分钟，然后再加H202→观察是否产生气泡，有气泡的为阳性。鉴别试验：

NAP(p-nitro-α-acetylamino-β-hydroxy-propiophenome)抑制试验；NAP能抑制结核分枝杆菌的生长，对非结核分枝杆菌则不能抑制。(NAP:p-硝基-α-乙酰氨基-β-苯丙酮)

抵抗力对理化因素抵抗力较强：

1、抗干燥：在干燥的痰中可活6～8个月；在尘埃中活8～10天。

2、抗酸碱：3％HCI、6%H2SO4、4％NaOH中可活15min。

3、抗染料：对龙胆紫和孔雀绿有抵抗力。

4、对湿热、酒精及紫外线敏感对湿热敏感；在70%～75%乙醇中数分钟即被杀死；对紫外线敏感：直接日光照射数小时可被杀死，可用于结核患者衣服、书籍等的消毒。5、对抗结核药物敏感

结核分枝杆菌对链霉素、异烟肼、利福平、环丝氨酸、乙胺丁醇、卡那霉素、对氨基水杨酸等敏感，但长期用药容易出现耐药性。结核分枝杆菌易发生形态、菌落、毒力以及耐药性等的变异。卡介苗（BCG）:由法国有两位细菌学家——卡默德（LeonCalmette）和介兰（CamileGuerin）1908开始在含甘油、胆汁、马铃薯的培养基中将牛型结核分枝杆菌培养13年、230次传代获得的减毒活疫苗，现广泛用于预防接种。耐药性，尤其是耐异烟肼菌株。故联合交替用药。变异性那是秋天的一个下午，卡默德和介兰走在巴黎近郊的马波泰农场的一条小路上做实验，试图把结核杆菌接种到两只公羊身上，但每次都失败了。走着走着，他们发现田里的玉米杆儿很矮，穗儿又小，便关心的问旁边的农场主：“这些玉米是不是缺乏肥料呢？”农场说：“不是，先生。这玉米引种到这里已经十几代了，可能有些退化了。”“什么？请您再说一遍！”农场主笑着说：“是退化了，一代不如一代啦！”看着匆匆离去的两个人，他觉得很好笑。卡默德和介兰从玉米的退化马上联想到：如果把毒性强烈的结核杆菌一代代培养下去，它的毒性是否也会退化呢？用已退化了毒性的结核杆菌再注射到人体中，不就可以既不伤害人体，也能使人体产生免疫力了吗？两位科学家足足花了13年的时间，终于成功培育了第230代被驯服的结核杆菌，作为人工疫苗！

结核杆菌无侵袭性酶，不产生内、外毒素，其致病性主要由于：细菌繁殖引起炎症菌体成分代谢产物毒性作用抗体对菌体成分产生免疫病理损伤致病性和免疫性脂质——存在细胞壁，含量与毒力平行（1）索状因子（糖脂—分枝菌酸+海藻糖）（2）磷脂（3）蜡质D（分枝菌酸+肽糖脂）（4）硫酸脑苷脂作用：引起结核结节，慢性肉芽肿及组织细胞干酪样坏死等病变蛋白质有抗原性、本身无毒，如结核菌素蛋白质+蜡质D——迟发型变态反应组织坏死、全身中毒症状结核结节形成荚膜：①粘附和入侵②分解物质提供营养③防止有害物质入侵致病物质--菌体成分1.脂质－脂质占菌体干重的20～40%，占胞壁干重的60%。①磷脂：能刺激单核细胞增生，并可抑制蛋白酶的分解作用，使病灶形成干酷样坏死。②索状因子：是分枝菌酸与海藻糖的复合物，具有破坏细胞线粒体膜，毒害微粒体酶类，抑制中性粒细胞游走和吞噬作用，引起慢性肉牙肿。具有该物质的TB菌毒株，在液体培养基中能紧密粘成索状。

③蜡质D：是一种肽糖脂与分枝菌酸复合物，能引起迟发型变态反应，并具有佐剂作用。

④硫酸脑苷脂：TB菌毒株胞壁中含有，能抑制吞噬细胞中的吞噬体与溶酶体融合，使结核杆菌在细胞内存活。致病物质2.荚膜－主要为多糖，少量脂质和蛋白质。①粘附和入侵②分解物质提供营养③防止有害物质入侵3.蛋白质－TB菌菌体内都含有数种蛋白质，其中重要的蛋白质是结核菌素。结核茵素与蜡质D结合，能引起较强的迟发型变态反应。其他蛋白质可引起机体产生相应的抗体，但无保护作用。致病物质结核菌素试验测定机体对结核杆菌有无变态反应。将一定量结核菌素注入皮内，如受试者曾感染结核杆菌，则在注射部位出现迟发型变态反应炎症，为阳性，未感染结核杆菌则为阴性。此法可用检测可疑病人曾否感染结核菌，接种卡介苗后是否阳转以及检则机体细胞免疫功能。【原理】

结核菌素皮肤反应是迟发型细胞超敏反应。它是抗原(结核菌或卡介苗)进入机体使机体的免疫T淋巴细胞致敏，并大量分化增殖。当已致敏的机体再次遭受到抗原入侵时，致敏淋巴细胞就会与之结合，引起变态反应性炎症。表现在结核菌素注射部位形成硬结甚至发生水泡、坏死。结核菌素试验结核菌素是结核杆菌的菌体成分，有两种：旧结核菌素（oldtuberculin，OT）和纯蛋白衍生物（purifiedproteinderivative，PPD）。【操作程序】

将OT或PPD用无菌生理盐水稀释成不同浓度，标准剂量是5结核菌素单位（0.1毫升），进行皮内注射，并在48～72小时后观察结果。一个曾经暴露在病菌的人会显示出免疫反应。

这个测试的结果通过硬结（明显突起的硬化区）的直径（垂直于手臂）来反映。如果不存在任何硬结，结果应记录为0mm。皮肤的红斑不应加以测量。结核菌素试验【判断方法】我国规定以72小时为观察反应时间，48-96小时内皆可测量反应，记录方法是将测得的硬结横径毫米数×纵径毫米数表示，如有水泡、硬结、坏死和淋巴结炎时，应作记录。阴性反应：无硬结或硬结平均直径＜5mm者。阳性反应：硬结平均直径在5mm或5mm以上者为阳性，5～9mm为一般阳性，10～19mm为中度阳性，20mm以上局部有水泡，出血、坏死及淋巴管炎者均为强阳性。结核菌素试验【临床意义】阳性反应表明机体对结核杆菌有变态反应，过去曾感染过结核，但不表示有病，因接种过卡介苗的人也呈阳性反应。

强阳性反应则表明可能有活动性感染，应进一步检查是否有结核病。

阴性反应表明无结核菌感染，但应考虑以下情况：如受试者处于原发感染早期，尚未产生变态反应，或正患严重结核病，机体已丧失反应能力，或受试者正患其他传染病，在此类情况下，均可暂时出现阴性反应。结核菌素试验结果：红肿硬结＞5mm，阳性（＞15mm，强阳性）红肿硬结＜5mm，阴性阳性：过去/BCG成功，有免疫力强阳性：现在活动性结核感染，应进一步检查阴性：无/未接种BCG假阴性：感染初期，老年人，严重结核合并其它传染病使用免疫抑制剂艾滋病等免疫功能低下者意义结核杆菌可通过呼吸道、消化道和破损的皮肤粘膜进入机体，侵犯多种组织器官，引起相应器官的结核病，其中以肺结核最常见。结核杆菌的致病作用可能是细菌在组织细胞内顽强增殖引起炎症反应，以及诱导机体产生迟发型变态反应性损伤。所致疾病肺部感染（1）原发感染——常见儿童（外源性感染）肺泡渗出性炎症（原发灶）肺门淋巴结（肿大）沿淋巴管扩散（炎症）原发综合症（哑铃型）特点：特异免疫没有建立，故局部病变较轻，但易扩散结局机体抵抗力强形成结核结节→纤维化→钙化→自愈（但病灶内常有细菌的潜伏）机体抵抗力差活动性肺结核→干酪样坏死

全身播散→粟粒样结核临床类型（2）继发感染——常见成人（原发病灶——内源性感染）

特点：局部病变重，但不易扩散一般局限于肺部，易发生干酪样坏死，可形成空洞和开放性肺结核传染源：开放性肺结核病人痰传播途径：呼吸道、消化道、皮肤黏膜肺外感染肠结核，结核性脑膜炎，皮肤结核，肾结核，骨结核等一般治疗合理营养，注意休息抗结核药物的治疗原则早期、联合、适量、规律、分阶段治疗和坚持全程抗结核菌药物：链霉素、异烟肼、对氨基水杨酸钠、利福平等。治疗预防：卡介苗接种（初种年龄：生后2~3天到2个月内）近20年国际组织提出控制结核病主要方法有发现和治疗痰菌阳性者新生儿接种卡介苗冻干疫苗核糖体RNA(rRNA)疫苗

卡介苗接种后的局部反应与其他疫苗有所不同，绝大部分儿童接种卡介苗后3～4周（初种）或1～2周（复种）会出现局部反应，经过红肿浸润、脓疱形成、破溃、结痂这样一个过程，一般在3个月左右脱痂，局部形成疤痕。这是卡介苗接种后的正常反应过程，是有效接种的标志，如不出现此反应，反而提示接种失败，应考虑补种。

人类对结核杆菌的感染率很高，但发病率却较低，这表明人体感染结核杆菌可获得一定的抗结核免疫力。但不能预防再感染。传染性免疫：结核分枝杆菌（或BCG）进入机体后使机体对细菌再次入侵有免疫力，而当细菌或其成分从体内彻底消失后机体的免疫力也随之消失。免疫性临床标本涂片检查分离培养核酸检测抗体检测直接涂片集菌涂片处理标本或无污染标本染色抗酸..金胺O..液体培养基固体培养基（罗氏或米氏）动物试验仪器培养快速生长菌慢生长菌涂片镜检菌种鉴定抗酸染色菌落特点鉴定试验药敏试验＜7天生长＞7天生长微生物学检验微生物学检查根据结核菌感染的类型，采取病灶部位的标本。肺炎结核——痰肾或膀胱结核——中段尿液肠结核——粪便结核性脑膜炎——脑脊液1.直接检查涂片检查抗酸染色法：萋-尼氏(Ziehl-Neelsen)抗酸染色荧光染色法：金胺O染色集菌涂片法：

咯痰可直接涂片。用萋～纳氏法染色，若镜检找到抗酸性杆菌，可能是结核杆菌，但通常应报告：“查到抗酸性杆菌”，因标本中可能混杂有非致病性抗酸杆菌，单凭形态染色不能确定是结核杆菌，需进一步分离培养鉴定。如标本中结核杆菌量少，杂菌和杂质多时，直接涂片不易检出（一般需要每毫升痰液含有结核杆菌10万个以上才能检出），应浓缩集菌后，再涂片染色镜检，以提高阳性检出率。无菌直接采取的脑脊液、导尿或中段尿可直接用离心沉淀集菌。咯痰和粪便标本浓缩集菌因含杂菌多，需用4%NaOH或3%HCL或6%H2SO4处理，然后，用离心沉淀法将结核杆菌浓缩聚集于管底，再取沉淀物涂片作抗酸染色检查、分离培养或动物试验。前处理：集菌、除杂菌培养：结核杆菌生长缓慢，培养期长。接种于固体培养基上。37℃培养4～6周后检查结果。结果：根据生长缓慢，菌落干燥、颗粒状、乳酪色，菜花状，菌体染色抗酸性强，多数为结核杆菌。如菌落、菌体染色都不典型，则可能为非典型分枝杆菌，应进一步作鉴别试验。2.分离培养活动性肺结核病例的诊断1.胸部影像2.传统培养法3.核酸扩增技术及基因探针结核分枝杆菌感染的诊断目的:预防潜伏性感染进展为活动性结核病:结核菌素皮肤实验临床诊断比较涂片阳性结果:一个视野见到3个抗酸菌要求标本:6000-10000/ml.培养阳性:一个菌落对应于原始标本:100/ml敏感性:涂片:55%,培养:80%特异性:涂片:5～50%,培养有1～2%假阳性

常用豚鼠或地鼠鉴别凝似结核杆菌的分离培养物和毒力测定。取经浓缩集菌处理的标本1.0毫升注射于豚鼠腹股沟皮下，经3～4周饲养观察，如出现局部淋巴结肿大，消瘦或结核菌素试验阳性，可及时剖检若观察6～8周后，仍未见发病者，也要剖检。剖检时应注意观察淋巴结、肝、脾、肺等脏器有无结核病变。3.动物试验

应用分子生物学技术检测结核分枝杆菌，克服了传统检测方法的诸多不足，能够对难以培养、生长缓慢的结核分枝杆菌进行更加敏感、特异、准确、快速的鉴定和药物敏感性评价。

4.分子生物学实验M.tuberculosisM.bovis形态细长短粗烟酸+-烟酰胺酶+-硝酸盐还原试验+-5.与牛分枝杆菌（M.bovis)的鉴别结核分枝杆菌检测的新进展噬菌体法快速检测试剂分子生物学鉴定：PCR限制性片段长度多态性分析、PCR单链构象多态性分析、核酸探针、核酸序列分析、多重PCR、高效液相色谱法等免疫学检测：结核菌素试验、抗原/抗体检测、全血干扰素测定法等

又称麻风杆菌，是麻风病的病原体，目前尚不能人工培养。麻风是一种慢性传染病，侵犯皮肤、粘膜和外周神经组织，晚期还可侵入深部组织和脏器，形成肉芽肿病变。在世界各地均有流行，我国不少地区亦可见，但经大力开展防治工作后，病例已逐渐减少。麻风分枝杆菌(M.leprae)形态上麻风杆菌与结核杆菌酷似，难以区别。典型的胞内寄生菌，有该菌寄生的细胞呈泡沫状，称为麻风细胞。表现明显的抗酸染色特性。革兰氏阳性。无鞭毛、芽孢、荚膜。生物学性状目前体外人工培养尚未成功动物模型：犰狳，对该菌高度易感，接种后引起瘤型麻风，人对该菌抵抗力强，接触者仅少数发病长期以来麻风病被学界认为只在人类间传播。而2011年4月底，美国研究人员称，美国首例麻风病人可能由犰狳传染而来。人类为唯一宿主和唯一传染源，致病因素不清----不准确犰狳（读音：qiúyú），又称“铠鼠”。犰狳是生活在巴西内陆地区的一种濒危物种。传染源：病人（瘤型麻风病人通过皮肤黏膜及外分泌液向外排菌）传播途径：皮肤、黏膜、呼吸道及密切接触传播（家庭内传播多见）潜伏期：2-5年，长者