（高清版）DB12∕T 865-2019 水和沉积物中硝基呋喃类代谢物残留量的测定 液相色谱串联质谱法　　

水和沉积物中硝基呋喃类代谢物残留量的测定液相色谱串联质谱法2019-02-15实施2019-02-15实施天津市市场监督管理委员会发布I本标准按照GB/T1.1-2009给出的规则起草。本标准由天津市农业农村委员会提出并归口。本标准起草单位：农业农村部渔业环境及水产品质量监督检验测试中心(天津)。本标准主要起草人：李春青、陈永平、高丽娜、时文博、李宝华。1水和沉积物中硝基呋喃类代谢物残留量的测定液相色谱串联质谱法本标准适用于水和沉积物中3-氨基-2-唑烷基酮(呋喃唑酮代谢物，以下简称：A0Z)、5-甲基吗啉-3-氨基-2-唑烷基酮(呋喃它酮的代谢物，以下简称：AMOZ)、氨基脲(呋喃西林代谢物，以下简称：SEM)和1-氨基-2-内酰脲(呋喃妥因代谢物，以下简称：AHD)残留量的测定。凡是不注日期的引用文件，其最新版本(包括所有的修改单)适用于本文件。4.5三水合磷酸氢二钾：优级纯。4.90.002mol/L醋酸铵溶液：称取0.15g醋酸铵，用水(实验用水当符合GB/T6682规定)溶解并定容至1000mL。4.10甲醇溶液：甲醇：水=5:95(v/v)。4.110.2mol/L盐酸溶液：量取浓盐酸(p=1.19g/mL)16.67mL,用水稀释至1000mL。4.120.05mol/L2-硝基苯甲醛溶液：称取0.0378g2-硝基苯甲醛，溶于5mL二甲基亚砜中，现4.131.0mol/L磷酸氢二钾溶液：称取114g三水合磷酸氢二钾，溶解于500mL水中。24.16AOZ(呋喃唑酮代谢物)标准储备溶液：1.0mg/mL:准确称取10.0mg±0.1mgAOZ,用甲醇溶解并定容至10mL棕色容量瓶中，-20℃冷藏保存，有效期6个月。4.17AMOZ(呋喃它酮代谢物)标准储备溶液：1.0mg/mL:准确称取10.0mg±0.1mgAMOZ,用甲醇溶解并定容至10mL棕色容量瓶中，-20℃冷藏保存，有效期6个月。4.18SEM(呋喃西林代谢物)标准储备溶液：1.0mg/mL:准确称取14.9mg±0.1mgSEM·HCl,用甲醇溶解并定容至10mL棕色容量瓶中，-20℃冷藏保存，有效期6个月。4.19AHD(呋喃妥因代谢物)标准储备溶液：1.0mg/mL:准确称取13.2mg±0.1mgAHD·HCl,用甲醇溶解并定容至10mL棕色容量瓶中，-20℃冷藏保存，有效期6个月。级稀释配成100ng/mL和10ng/mL混合溶液，4℃冷藏保存，有效期1个月。4.21硝基呋喃类代谢物混合内标工作溶液：准确吸取同位素内标溶液(4.15),用水逐级稀释配成100ng/mL混合溶液，4℃冷藏保存，有效期1个月。5.2电子天平：感量0.0001g和0.01mg。5.4恒温水浴振荡器：可控温37℃±1℃。5.5离心机：4000r/min。5.7冰箱：具备4℃冷藏功能。取充分混匀的水样100mL用0.45μm滤膜过滤，于4℃冰箱保存。取沉积物样品100g,风干至内外部均干燥无水后，研磨成粉状，用80目圆筛筛分去除大型颗粒，于4℃冰箱保存。量取10mL(精确到0.1mL,V2)水样于50mL离心管中，加入0.05mL混合内标工作溶液(4.21)涡旋混合50s,再加入5mL盐酸溶液(4.11)和0.20mL2-硝基苯甲醛溶液(4.12),涡旋振荡50s后，置于恒温水浴振荡器中37℃避光振荡16h。3称取样品5.00g(精确到0.01g,m),加入0.05mL混合内标工作溶液(4.21)涡旋混合50s,再加入5mL盐酸溶液(4.11)和0.20mL2-硝基苯甲醛溶液(4.12),涡旋振荡50s后，置于恒温水浴振荡器中37℃避光振荡16h。取出离心管冷却至室温，加入3mL~5mL磷酸氢二钾溶液(4.13),调节pH至7.0～7.5,加入8mL乙酸乙酯，涡旋振荡50s,4000r/min离心5min,取上层清液至20mL玻璃离心管中，再加入8mL乙酸乙酯重复上述操作，合并上清液于40℃下氮气吹干。准确加入1.0mL(V₁)甲醇溶液(4.10)涡旋振荡溶解残留物，用0.22μm滤膜过滤，待测。(若样品杂质较多，可考虑定容后用正己烷净化，即加入2mL正己烷涡旋离心后弃去上层，取下清液过0.22μm微孔滤膜，待测)。分别准确移取10ng/mL混合标准工作液(4.20)0.050mL、0.10mL和100ng/mL混合标准工作液 按6.1.2和6.1.3步骤操作，按6.3测定，色谱图参见附录A。流动相：A.0.002mol/L醋酸铵溶液；B.乙腈；梯度洗脱程序见表1,平衡时间为5min。时间(min)流速(ml/min)b)喷雾电压：4000v;d)辅助气流量：3L/mine)离子传输毛细管温度：350℃;f)源内碰撞诱导解离电压：10g)扫描模式：选择反应监测(SRM),选择反应监测母离子、子离子和碰撞能量见表2;4目标化合物母离子(m/z)子离子(m/z)碰撞能量(v)AOZ(呋喃唑酮代谢物)AOZ-D₄(呋喃唑酮代谢物内标)AHD(呋喃妥因代谢物)AHD-¹Cs(呋喃妥因代谢物内标)SEM(呋喃西林代谢物)SEM-¹C-⁵N₂(呋喃西林代谢物内标)AMOZ-D₅(呋喃它酮代谢物内标)在同样测试条件下，阳性样品保留时间与标准物质保留时间相对标准偏差在±5%以内，且检测到的离子的相对丰度，用与最强离子(基峰)的强度百分比表示，应当与浓度相当的校正标准相对丰度度比应符合表3要求：次强碎片离子相对丰度(%)允许相对偏差(%)定量离子采用丰度最大的二级特征离子碎片(表2)。除不加试祥外，按上述6.2、6.3测定步骤和6.5测定条件进行测定，色谱图参见附录B。7.1用仪器自带工作站按内标法进行自动计算，以化合物上机响应的峰面积与内标物峰7.2水样品中硝基呋喃类代谢物残留量按式(1)计算。计算结果须扣除空白值。X=C·V₁/V₂......................................(1)X——样品中硝基呋喃类代谢物的含量，单位为微克每升(μg/L);5C——样品制备液中硝基呋喃类代谢物的浓度，单位为纳克每毫升(ng/mL);7.3沉积物样品中硝基呋喃类代谢物残留量按式(2)计算。计算结果须扣除空白值。X=C₁·V₁/m......................................X——样品中硝基呋喃类代谢物的含量，单位为微克每千克(μg/kg);C——样品制备液中硝基呋喃类代谢物的浓度，单位为纳克每毫升8.1水中四种硝基呋喃类代谢物的检出限为0.1μg/L,定量限为0.2μg/L。8.2沉积物中四种硝基呋喃类代谢物的检出限为1.0μg/kg,定量限为2.0μg/kg。9方法回收率9.1水中添加浓度为0.1μg/L~10μg/L时回收率为75%~110%。9.2沉积物中添加浓度为1.0μg/kg~10μg/kg时回收率为75%~110%。本方法的批内相