脓汁和粪便标本中病原菌的检测课件

医学微生物学实验

综合性实验一脓汁和粪便标本中病原菌的检测（六）药敏实验结果分析糖发酵、动力实验结果分析玻片凝集试验高压蒸汽灭菌细菌综合性实验总结实验报告撰写细菌感染的检查方法和防治原则（录像）洗刷常用药敏试验纸片判断标准P21抗菌药物纸片含药量抑菌圈直径(mm)

耐药中度敏感敏感青霉素G(葡萄球菌)

10单位≤28-≥29链霉素10微克≤1112～14≥15庆大霉素10微克≤1213～14≥15四环素30微克≤1415～18≥19氯霉素30微克≤1213～17≥18磺胺300微克≤1213～16≥17药敏实验结果分析青霉素链霉素庆大霉素黄色细菌白色细菌紫黑细菌粉红细菌

注：耐药－，中度敏感±，敏感＋。抗菌素药敏试验纸片法结果G+金黄色葡萄球菌和白色葡萄球菌对青霉素敏感，对链霉素中度敏感。G-粉红色和紫黑色细菌对青霉素耐药，对链霉素敏感。G+球菌和G-杆菌对广谱抗菌素庆大霉素都敏感。糖发酵、动力试验结果判断

反应现象结果描述符号培养基变色无气泡分解×糖产酸不产气＋培养基变色有气泡分解×糖产酸又产气⊕培养基不变色不分解×糖－细菌扩散生长,培基混浊细菌有鞭毛＋沿接种线生长,培基清澈透明细菌无鞭毛－肠道杆菌科各菌属生化反应鉴别表

葡萄糖乳糖麦芽糖甘露醇蔗糖半固体埃希菌属⊕⊕⊕⊕√+志贺菌属+√√+/--/+-沙门菌属⊕/+-⊕⊕-+霍乱弧菌+-++++变形杆菌属⊕-√-√+★+产酸或阳性，⊕产酸产气，-阴性，

+/-多数阳性，-/+多数阴性，√不确定。常见肠道感染细菌主要生化反应特征

葡萄糖乳糖半固体（动力）大肠埃希菌⊕⊕+痢疾志贺菌+--伤寒沙门菌+-+霍乱弧菌+★-+幽门螺杆菌不分解糖类

+变形杆菌⊕-+★产酸能迅速杀死该菌。细菌生化反应结果分析

甲、乙→紫黑

丙、丁→粉红↓↓组号①葡萄糖②乳糖半固体③葡萄糖④乳糖半固体1⊕2345678910结果⊕+-实结果错误可能性纯培养时，菌落挑错了。无菌操作不严格，污染杂菌。接种时未协调好，接种错误。玻片凝集试验在适量电解质存在的情况下，颗粒性抗原(细菌)与特异性抗体混合，如果比例合适，则出现肉眼可见的凝集块，称为凝集反应。用于细菌的抗原分析、鉴定及分型，也可应用已知细菌检查未知血清的抗体。诊断血清与待检测细菌混合→细菌凝集→阳性→报告：检出××细菌。玻片凝集试验原理凝集反应的机制是由于抗原与其相应抗体间存在着相对应的极性基。极性基的相互吸附，使抗原外周的水化膜除去，由亲水溶胶变成憎水溶胶。电解质具有降低电位的作用，使抗原颗粒间的排斥力消除，从而产生了凝集现象。玻片凝集反应实验步骤取洁净干燥的载片一片，分试验与对照区。滴加生理盐水15ul，置于对照区中心；滴加诊断血清15ul，置于试验区中心。用接种环取菌苔，分别研磨乳化于盐水或血清内，混合均匀。将玻片反复旋转或倾侧、菌液充分混匀，凝集速度更快、结果更清楚。观察是否有凝集块出现，如有则记为阳性，没有则记为阴性。载玻片1张痢疾血清，生理盐水各15ul粉红色菌苔与盐水混匀粉红色菌苔与血清混匀玻片凝集结果玻片来回倾侧数次，肉眼观察；2～3分钟内仍不出现凝集者,可认为阴性(－)。……;菌液混浊，少量絮状,25%凝集,阳性(＋)。……;菌液轻度混浊,絮状凝集块较小,阳性(＋＋)。……;菌液澄清,有明显絮片,75%凝集,阳性(＋＋＋)。安全警告本次实验操作，可产生几十个微生物气溶胶颗粒。气溶胶粒径＞100um沉降很快,＜50um在0.4s内扩散开,＜5um通过呼吸道直接到达肺泡。Pike博士对实验室感染统计分析结果发现，不明原因的感染高达82%，大多数是气溶胶在空气中扩散引起的。实验时应坐着，在酒精灯半径20厘米范围内操作，保持安静、有序，尽量少说话、少走动，以免感染病原菌。综合性实验一实验总结

采用平板划线分离法，从浓汁标本中分离出黄色和白色两种菌落。显微镜下，这两株细菌均为G+球菌，排列不规则，呈葡萄串状，是典型的葡萄球菌；结合菌落颜色，这两株葡萄球菌分别是金黄色葡萄球菌和白色葡萄球菌。通过血浆凝固酶试验鉴别，金黄色葡萄球菌是致病菌。用伊红美蓝平板，从粪便标本分离出紫黑色具有金属光泽的菌落和粉红色半透明菌落。紫黑色菌落是能分解乳糖的大肠埃希菌。粉红色菌落是不能分解乳糖的致病菌。显微镜下，它们都是G-杆菌，散在排列，从形态上不能鉴别是什么细菌。经糖发酵试验，半固体动力试验，血清学试验结果鉴定，它们分别是大肠埃希菌和痢疾志贺菌。金黄色葡萄球菌和痢疾志贺菌，这两株致病菌分别做了药敏试验，G+的金黄色葡萄球菌对青霉素敏感，G-的痢疾杆菌对链霉素敏感；庆大霉素对G+和G-菌都敏感。脓汁和粪便标本细菌检测结果分析标本菌落形态血浆凝固酶葡乳半痢疾血清青链庆结论黄色G+球++++金黄色葡萄球菌脓汁白色G+球-+++白色葡萄球菌紫黑G－杆⊕⊕+-++大肠埃希菌粪便粉红G－杆+--+-++福氏志贺菌细菌鉴定的原则及基本方法必须用纯的细菌培养物作鉴定。因为不同的细菌生化反应结果相差较大，而反应结果是以阳性或阴性表示的，一旦用混合菌做生化反应，结果不可分析。鉴定试验的选择：测定细菌的实验方法很多，根据鉴定目的选择适当的试验项目，既能完成鉴定，项目又尽可能少。一般考虑以下几个问题。选择有价值的试验：鉴别两种细菌选择的试验应该其一为阳性，另一为阴性，且阳性和阴性的概率大于90%。否则，试验无鉴别价值。选择快速简便的试验。因为是常规实验室，选择的方法应快速方便，如鞭毛染色、氧化酶、凝固酶等应为首选方法。鉴定一种细菌如果有几种特异方法，只选一两种，多选无价值。测定细菌的一种生物特性可能有几种不同方法。应该了解所用方法的敏感性，否则会导致错误的鉴定。思考题如果细菌生化反应结果不佳，原因何在?报告纸片法药敏试验结果，是否符合你所鉴定的细菌的药敏特性?玻片凝集试验观察完毕，应将载玻片立即放入消毒缸内，为什么?怎么设计一个实验，对伤寒沙门菌进行分离和鉴定?

常见病原性球菌的检查程序P47：直接涂片、革兰染色、镜检脓汁、痰、咽部分泌物观察菌落性状、溶血性、色素血琼脂平板培养涂片染色镜检挑取可疑菌落生化反应↑纯培养动物实验药敏实验血液、穿刺液→肉汤增菌培养→培养液涂片染色境检常见肠道致病菌的检查程序P48：粪便→SS琼脂、伊红美蓝平板培养→挑取可疑菌落↑↓血清学鉴定血、骨髓→增菌培养双糖铁培养基染色镜检生化反应

《脓汁和粪便标本中病原菌的检测》

年级专业学号姓名实验目的实验器材方法与步骤结果与讨论。实验报告以小组的实验结果为基础。主要是从2种标本获得4种菌的实验结果。讨论是对实验结果的分析，应客观、严谨，围绕主题，突出重点。结论应该明确，脓汁标本检测到什么病原菌？粪便标本检测到什么病原菌？结果不正确也要分析原因。如何撰写科研论文P57不论人们是否完全赞成“要么发表、要么销毁”的格言，但毫无疑问，科学研究的目的就是要把研究成果发表出来。一般来说，评价科学工作者的工作，主要不是看他们在实验室内灵巧的操作，也不是看他们在广阔或狭窄的科学领域内掌握知识的多少，也不是看他们的智能或魅力，而主要是根据他们所发表的文章来估量。他们可能由此而成名，或仍然默默无闻。因此，写出能充分展示自己工作、引起同行注意的论文是一个科研工作者必备的素质。一项科学实验，不论它的结果多么惊人，只有到它发表出来时才算完成。因此对科学工作者来说，他不仅必须“研究”科学，而且必须把科研成果“写”出来。要写好一篇科学论文，作者必须准确地知道他要写的是什么以及为什么要这么写。科学论文是叙述原始研究结果而写成并发表的报告。具体地说，一篇公认的原始科学论文，必须是首次公布的，它应提供足够的资料，以使同行们能够：(1)评价观察到的结果；(2)重复实验；(3)评价推理过程，而且原始科学论文还必须能为人们所接受，基本上可供科学界永久地、不受限制地利用，要有严密的思维特性、逻辑性、清晰性和准确性。

科研论文内容P57标题摘要