纳米技术 外泌体形貌和尺寸测量 原子力显微术 编制说明

Nanotechnology—Testmethodformorphologyandsizeofexosomes—Ato1本任务来源于国家标准化管理委员会标准制定项目，项目编号20240660-T-491。递重要的信号分子，形成了一种全新的细胞-细胞间信息传递系统，影响细胞的生理状态并物学功能以及分离、鉴定和应用等。其中，分离但是与其他众多技术发展规律类似，细胞外囊泡力显微镜、酶联免疫吸附测定、动态光散射、纳米制品形貌、原子力显微镜亚纳米高度测量校准，仅有一项涉及活细2生命科学的检测技术标准仍具有一定挑战性，可比性如何、量值是否统一等问题仍然亟待解决，迫切需要通过技术标准化来AFM的工作模式根据样品和探针尖端之间的接触填补检测活体状态下外泌体的形貌特征检测的国家标准空白，本方法以液相为介质，采用AFM的轻敲模式，研究外泌体不破坏不收缩的测量方准确度，确保国家标准的先进性和实用性，促3工作组组织的项目共获得国家、地方标准制修订计划原创性基础研究和变革性产业技术，目标是建设世界级献。广泛开展国内外科技合作与交流，积极融入全球创新网络，建设国际一流科研机构。国家纳米科学中心现有3个中国科学院重点实验室，分别是中国科学院纳米生物效应与安国家纳米中心另建有纳米理论与人工智能实验室、纳米加工实验室和纳米智能传感实验室标准化技术委员会（SAC/TC279）、全国微细气泡技术标准化国合格评定国家认可委员会（CNAS）科研实验室专业委员会的挂靠单位授权点51个，覆盖经济学、法学、文学、416个教育部重点实验室，1个前沿科学中心，1个省部共个农业部重点实验室，1个自然资源部工程技术创新中影像工程、助产学等20个本科专业。获批国家级一流本科专业建设点2个、省级一流本科创新实验室、上海市智能医疗器械与主动健康协同创新中心等重点省部国纳之星(上海)纳米科技发展有限公司：又称临港新片区纳米技术及应用科技创新平形式培育、孵化产业链相关环节的科技创新型企业中国科学院苏州纳米技术与纳米仿生研究所：是中国科学院在纳米5纳米所及中科院专家资源，以集聚创新资源、培米产业共性关键技术研发、技术服务、成果转化和人才培养等苏州赛赋新药技术服务有限责任公司：是一家从事新药非临床研究技术服务的国际化等技术服务。下设医药研发咨询、NMPA/FDA注册申报、抗GLP资质、国家认监委CMA认证、美国A2LAISO15189认可、美国CAP认证、生物安全创新中心等荣誉称号并拥有两个博士后科研工618个；孵化了29家创新型企业，已有4家企业上市。研究院重点开展科为起点，专注系列分子影像设备的研制，至今已推出多款、全系列完全自主知识产权的核领先行业的稳定性与影像质量，持续为客户创造价值。面对核医学医疗资源分布不均衡的问题，提供全球化的创新医疗服务解决方案，让患者受军重点实验室，61个全军医学研究所和专科中心。医院是全军唯一一所医院办学单位，承务平台，拥有细胞制备中心、细胞质控检测中心7），物医药创新和经济发展提供科技支撑和智力支持。联合产，相关新型生物制剂药物的研发和生产，以及细胞分析仪、MERIEUX全自动微生物培善的细胞产品质量管理体系，成熟的干细胞、免疫细胞产品生推动科技成果转移转化应用，助力医疗器械和生物医学工程合作的科技进步和创新发展。8深圳汇芯生物医疗科技有限公司：是由外泌体领域知名科学家和产业专家共同创立的体诊断和治疗领域的关键瓶颈技术。汇芯生物2019年入围中国创新创球第一款非标记自动化外泌体提纯系统—EXODUS@，先后在国际知名期刊杂志Nature1展234567899相关标准物质/标准样品/仪器校准物质等的使用，开展标准的起草工作。本文件起草中所依《表面化学分析原子力显微术二硫化钼片《活细胞样品纳米结构的磁驱动轻敲模式原子力显微《表面化学分析术语第2部分扫描探针显微术术语（Surfaprobemicroscopy）》《用于原子力显微镜检测的脱氧核糖核酸样品的制术纳米颗粒尺寸测量原子力显微术》、GB/T40128-2021表面化学分析硫化钼片层材料厚度测量方法》、GB/T28872-2012《活细胞样品纳米结构的磁驱动轻敲模用于原子力显微镜检测的脱氧核糖核酸样品的制备方法》、GB/T32189-2015《氮化镓单晶衬底表面粗糙度的原子力显微镜检验法》、GB/T31227-2014《原子力显微镜测量溅射薄膜0049-2024《人源间充质干细胞外泌体制备与检验规范》中的内容通过文中的规范性引用而分控制器（PID）控制器消除误差信号，从而引起扫描测试仪器为原子力显微镜，可在x,y,z三个方向进行亚纳米尺度测量，Z向分辨率优于1测试环境包括：测试环境温度为20oC±5oC、相对湿度≤60%；检测环境需避免直射强用220V±10V电源，用符合仪器要求的独立地线（1Ω~3Ω)、供电电压、驱动且稳定性良好；保持仪器系统、外围电子计算机本文件对沉淀的修饰、外泌体溶液的处理及在衬底上的固定进行了用丙酮中超声清洗10min，乙醇超声清洗10min，氮气吹干备用。如果没有等离子清洗剂，可用下述清洗方法：将载玻片置于在体积比为6:1:1的去离子水:37%浓盐酸:30%过氧化氢溶的比例混合均匀（如0.5mLPLL加入4.5mL去离子水充分混合将稀释溶液存储在2°C~8°C的冰箱中以备用；取PLL稀释液置于载玻片表面；母解理后，将解理面覆盖于PLL液滴上，放置3min。用镊子加紧云母片，用超纯水彻底清洗，氮气吹干。放置于60℃烘箱中20置于10mL烧瓶底部，并将烧瓶放置于真空干燥器底部。解理后的云母放于烧瓶上部干燥约20min至APTES液滴消失。去除真空泵，使云母与APTES蒸汽充分接计算可得表面粗糙度Ra分别为0.098nm和0.074nm，表面云母片经修饰后仍然十分到适合的浓度，并混合均匀。需注意，外泌数不超过5次；稀释后的外泌体溶液可置于4±1℃环境下放置2~10天；从冰箱中取出的外泌体稀释液，使用前建议在室温下放置20~30泌体溶液在云母衬底和玻片之间均匀铺展，静置5min，使外泌体牢固地分散吸附到云母表面。用镊子夹起云母衬底，并用超纯水彻底清洗表面，氮气吹干后，采用AFM进行检测。探针-样品相互作用力可用球-平面的集合模型来描述，对于样品表面粘附力较小的硬接触，针尖曲率半径等）直接影响力的测定。探针过硬可能造成样品损伤，探针过软会导致力学样品表面，磨损微观的结构形貌，针尖的形状对于成像的效果也有一定影采用DNP-10、SNL-10和RTES称形貌。表1所示，DNP-10与SNL-10为氮化硅探针，弹性系数低于1N/m，适合检测采用AFM对间充质干细胞来源外泌体进行形貌与高度测定。外泌体的典型AFM成像及尺寸分析见图4。PLL法与APTES法修饰的云母衬底干净平整，外泌体均匀的分散在云母表面，彼此没有团聚。获取图像中不同区域的100个外泌体进行统计，计算得出外泌体的尺寸附录A提供脐带来源间充质干细胞来源外泌体的形貌和尺寸测量实例，附录B给出了外泌体测量结果不确定度评定方法，附录C给出了典型Macromolecules,2009,231-27Science2020,367(6478)dhanD.C.,O,Drifextracellularvesicles(MISEV2023):Frombasictoadvancedapproaches.2SS123平均值x外泌体尺寸的实验室内相对标准偏差为：3.84%～7.99%，实验室间相对标准偏差为：标准偏差主要受外泌体尺寸和高度分布均匀性的影响，以及不同品牌原子力显微镜信现有国家标准中透射电镜图像法主要基于透射电子显微镜中电子束穿透样品成像的原中，除透射电镜法涉及生物样品中纳米颗粒的尺寸测量，其他方法均不涉及生物样本。法对脐带来源间充质干细胞外泌体的尺寸进行了测量，采用透射电镜法测得外泌体尺寸为的胶体和生物组织中纳米颗粒的粒径和于液体中颗粒的布朗运动和光散射特性脉冲高度及脉冲和颗粒体积或颗粒直径的相关性得到粒径分布。适用于相干光谱测定颗粒粒径范围纳米至1微米范围或至颗粒开始沉降的粒径的尺寸模式原子力原子力显微镜对活细胞的形本部分编制原则符合国家的有关法规法律，与推荐性国家标准协用的、外泌体应用方面的规范性管理文件，更好地满足我国外泌体产品的开发本项目的测试样品是细胞来源间充质干细胞外泌体。间充质干细胞由冻存干细胞复苏