浅析五色糯米饭中6 种合成着色剂检测方法

人工合成着色剂大多以萘、苯、甲苯等化工产品为原料，经过磺化、硝化、卤化、偶氮化等一系列有机反应制成[1]，有的含有β-萘胺和α-氨基萘酚等致癌物，过多食用会危害人体健康。五色糯米饭是壮族地区的传统风味小吃，因糯米饭呈黑、红、黄、白、紫5种色彩而得名，又称“乌饭”[2]。每逢农历三月三节日前后，广西各族（尤其是壮族）人民都要制作食用五色糯米饭，这一风味美食与祭祖娱神活动融合在一起，充满着民族、地方情趣。饱含植物清香的五色糯米饭十分诱人，看之色泽鲜艳、五彩缤纷；食之清香弥漫、沁人心脾，其不仅美观美味，还具有滋补等一定的保健作用，深受广西壮家人的喜爱，被看作吉祥如意、五谷丰登的象征。面对如此色鲜味美的食物，是否会有商家违规使用添加剂？市民能否放心食用？针对这个问题，本研究开展了五色糯米饭专项风险监测工作。目前，《食品中合成着色剂的测定》（GB/T5009.35—2016）采用聚酰胺吸附法测定合成着色剂，操作较为烦琐、耗时，且主要适用于酒类、汽水类、糖类、蜜饯类等食品[3]。五色糯米饭与标准适用的这些食品有所不同，其含有大量的淀粉等天然水溶性成分，这些成分由于容易吸附着色剂而干扰测定[4-6]，所以该方法不太适用于五色糯米饭等成品粮中合成色素的测定。因此，本研究采用最大吸收波长检测的方法，操作简单省时，灵敏度和准确度均得以提高，对五色糯米饭中合成着色剂的测定可靠、实用。1材料及测定方法1.1仪器与试剂耗材1.1.1仪器超高效液相色谱仪（WatersAcquityUPLCH-Class），PDA检测器；十万分之一电子天平（梅特勒-托利多XS205DU）；超声波清洗器（昆山市超声波仪器有限公司）；离心机（Sigama）。1.1.2试剂耗材（1）乙酸铵溶液（0.02mol/L）；柠檬酸溶液；甲醇-甲酸溶液（6+4）；氨水；乙醇－氨水溶液。（2）OASISWAX柱（6cc/150mg）固相萃取柱。1.1.3标准品取胭脂红、苋菜红、新红、柠檬黄、日落黄、亮蓝标准溶液，浓度均为1000μg·mL-1，混合并稀释成不同浓度的标准曲线溶液。1.2色谱条件资生堂MGⅢ-C18，直径×长度（mm）：（2.0×150）mm；PDA检测器，检测波长（柠檬黄430nm，新红、苋菜红、胭脂红、日落黄520nm，亮蓝625nm）；流动相，以乙腈为B、以0.02mol·L-1乙酸铵溶液为A，进行梯度洗脱（0～4min：A96%～80%；4～7min：A80%～5%；7～10min：A5%～96%）；流速：0.5mL·min-1；柱温30℃；进样量10μL。1.3样品预处理称取5.000g（精确至0.001g）粉碎样品，置于50mL刻度离心管中，加入乙醇-氨溶液10mL，涡旋5min，5000rpm离心5min，将上清液过滤，残渣再重复提取1次，合并上清液作为样品溶液。将样品溶液置于预处理过的固相萃取柱中，待试样全部流出，依次用5mL10%甲酸甲酯溶液、5mL水清洗，弃去全部流出液，再用5mL25%氨化甲醇洗脱，收集洗脱液，置50℃浓缩至近干，用水溶解并定容至25mL，经0.45μm微孔滤膜过滤，滤液上机分析。1.4测定法精密吸取标准曲线溶液和样品提取液各10μL，注入超高效液相色谱仪测定。2结果与分析2.1波长选取GB5009.35—2016方法中采用254nm的波长进行测定，存在很多杂峰，往往会干扰目标物质的检测。本研究针对各合成着色剂标准品溶液，用紫外－可见分光光度计进行光谱扫描，发现目标物质在可见光范围内有更大的吸收值，最终确定6种合成着色剂（胭脂红、苋菜红、新红、柠檬黄、日落黄、亮蓝），检测波长如表1所示。同时，6种合成着色剂标准溶液在3个波长通道（430、520、625nm）的色谱图，如图1所示。图1合成着色剂色谱图2.2检出限的确定在最低浓度标准溶液液相色谱图中，按3倍信噪比浓度作为检出限。采用本方法处理，6种合成着色剂在不同波长测定时的检出限见表2。由表2可以看出，在多波长下测定的检出限，均较254nm单波长下要低，尤其是亮蓝。由此可见，本研究设定的波长可以用来测定这6种合成色素，有效提高检测灵敏度。2.3标准曲线绘制将标准溶液分别稀释为0.25、0.5、1.0、2.0、5.0、10.0、20.0mg·L-1，精密吸取10μL注入超高效液相色谱仪。以浓度为横坐标、峰面积为纵坐标做标准曲线进行线性回归，结果见表3。表3标准曲线结果表由表3可以看出，在0.25～20mg·L-1的范围内，6种合成着色剂均具有较好的线性关系。2.4加标回收测定精确配制6种合成着色剂浓度均为10.0mg·L-1的混合标准溶液，加入空白五色糯米饭样品基质中进行加标回收实验，结果见表4。表4样品加标回收试验结果表由表4可以看出，本方法回收率为83%～104%，且实验所得回收率较稳定。因此，该方法具有较高的准确度和重现性。3结语本研究确立了五色糯米饭中6种合成着色剂的高效液相色谱检测方法，用添加乙醇的碱化试液，提取五色糯米饭中的合成着色剂，并进行固相萃取柱净化。用0.02mol·L-1醋酸铵溶液作为流动相A、甲醇作为流动相B，进行梯度洗脱，并采用不同波长同时测定提取液中的6种合成着色剂（胭脂红、苋菜红、新红、柠檬黄、日落黄、亮蓝）。该方法中，6种合成着色剂的检出限分别为柠檬黄0.4mg·kg-1、胭脂红0.