FlowCAM-流式细胞摄像系统课件

数字式在线流式细胞摄像系统

—FlowCAM®

水生环境中浮游生物的研究和监测

微粒分析技术进展17世纪首次使用显微镜观察微小颗粒物，至今显微镜仍然是分析微粒最常用的工具。主要问题：耗时费力如，样品的收集、制备、储藏，一次也只能观察一个静态样品。

美国FluidImagingTechnologies

公司开发了一款新型的分析流动微粒析仪器-FlowCAM

®，起初，主要用于分析海洋浮游植物/动物。由于自身外观的灵活多变，应用领域不断得到拓展。例如，化学、化妆品、食品、饮料、药物、石油工业等领域。FlowCAM®

将显微镜里的世界快速、清晰，准确地呈现在屏幕上功能～快速拍摄液样中每个微粒/细胞，或在线筛选获得关心的微粒/细胞；实时显示/存储高分辨率、全彩色的数字图像；分析样品时，自动计算浓度以及每个颗粒物的大小和形状；工作者自己建立物种图谱库；利用建好的图谱库对未知物种进行自动识别；对每个颗粒图像编号。特点～自动化的模式识别和分类；高速成像；智能化的VisualSpreadsheet

®分析软件；每个颗粒物有23个不同的测量参数值；可选的荧光和散射触发检测；检测颗粒大小的范围大；台式和便携式有两型号是世界上同类产品中最先进的检测仪器。FlowCAM®与同类产品比对

摄像功能除了拥有一般流式细胞仪的功能外，能捕捉流动样品中每一个浮游生物/细胞。自动对每个检测到的颗粒进行编号，数字化其特征（有效直径、长度、宽度、纵横比、色度、荧光特征性等20多个参数值），并一起存档。

软件互动功能有专利权的散点图特性，在散点图/直方图上，任意框取关心的区域，即刻显示框中区域内的所有颗粒物图像和特征数据，对其进行分析。

过滤筛选功能在线过滤筛选，获取样品中的关心的微粒。对获取的颗粒物图像进行后期筛选，建立图谱库。并利用建好的图库去比对新的样品，自动进行过滤筛选。

荧光触发功能

配置的荧光触发功能，有效的对藻类或其它发荧光的物质进行检测。

分析颗粒物由于采用不同放大倍数的显微物镜（2X，4X，10X，20X），检测颗粒物的尺寸的范围更大。FlowCAM

构造类型便携式FlowCAM应用：现场数据采集远程作业船上操作流水线监测R台式FlowCAM是实验室分析的理想选择与便携式的区别：尺寸-台式21”长X16”宽X12”高，便携式18”长X15”宽X14”高；电源要求-台式100-250VAC，便携式100-250VAC或12VDC；重量-台式27.2kg，便携式18.1kg；FlowCAM®

一套集成系统显微镜流式细胞计数器荧光检测器

照相机FlowCAM®FlowCAM集流式细胞计数器、显微镜和照相机的功能于一体：1套FlowCAM®

实现了需要多款仪器才能完成的预期实验任务。Computer样品频闪LEDFC流通池15mW532nm固态激光器荧光检测器Ch2(PMT)550-600nm荧光检测器Ch1(PMT)600-700nm高分辨率CCD物镜扇形激光出射光滤光片出射光滤光片分束镜2色镜圆柱透镜激发光滤光片600nm2色镜600nm长通滤光片575nm带通滤光片（可更换）散射检测器废液瓶流控系统电学系统光学系统FlowCAM®

-硬件部分Ⅰ部分ⅡFlowCAM®

-软件VisualSpreadsheet

FlowCAM®

用户通过它可直观的处理颗粒物数据。取代了传统繁琐的颗粒物分析系统-电子制表软件。特点：直观、熟悉的界面快速调查颗粒物特征

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10000张图片/分钟！分离和数量化不同的颗粒物建立图谱库比对多组数据直方图上显示的概要数据包括：荧光和尺寸数据。在散点图上可任意框取关心的区域。显示所有颗粒物的概要统计数据，或仅仅通过互动直方图所框取的颗粒物的统计数据。自动显示直方图

/散点图中被框中区域内的所有颗粒物图像，或软件在线筛选的颗粒物图像。散点图上同样显示颗粒物的概要数据，如纵横比或其它图像参数。能快速根据形态对颗粒物分类。CFlowCAM®

工作方式SetupandFocusAutoIamge（NoSave）AutoImageMode（自动摄像模式）-

按照设定的间隔（帧/秒），拍摄流体图像。尤其适合于浓度大的样品。TriggeredMode（触发模式）-Fluorescence（荧光）仅当颗粒物的荧光值超过了预设的阈值时，才拍摄流体图像。LightScattering（散射光）仅当颗粒物的散射光值超过了预设的阈值时，才拍摄流体图像。重要：对于触发模式，1）须保证视场画面中至多出现一个微粒；2）如有漫散镜头，必须拿走。否则大大降低散射检测器的灵敏度。FlowCAM®

视场

-FieldofView流通池CCD视场流动样品实时拍摄的视场图像提取颗粒物（根据筛选参数）拼图窗口颗粒物浓度的计算AutoImageMode（自动拍摄模式）-

DepthWidthFieldofView768*CalibrationFactor1024*CalibrationFactorFlowCell（流通池）公式：ParticleConcentration=Particlecounts/[AutoImageRate*(endtime-starttime)*(1024*CalibrationFactor)*(768*CalibrationFactor)*Depth]

校正因子公式:颗粒物的浓度=颗粒的数量/【自动拍摄率*时间差*（1024*校正因子）*（768*校正因子）*深】

TriggerMode（触发模式）-公式：ParticleConcentration=Particletotalcount/{[(1024*CalibrationFactor)/Width]*(Volume*VolumeAdjustmentFactor)}

视场内有颗粒物视场内无颗粒物LaserLaser调整因子FlowCAM®应用水生物研究连续采样实验室室外现场海藻花(HAB)监测养殖研究水处理(饮用水)浮游生物监测颗粒排除分析污水处理监测生物活性工业石油饮料/啤酒化学台式或便携式

—离散样品

—连续流动样品连续流式

—船载或渡口

—浮动船坞FlowCAM®

技术指标颗粒物图像大小：3µm～3mm，计数≥0.5µm拍摄速度：可设置（1～30f/s）图像类型/格式：8bit灰度或24bit真彩色/TIFF放大倍数/流通池：检测颗粒大小的范围广(无鞘液)2通道/散射检测：488nm或532nm激发光源；VisualSpreadsheet©采集和测量26个图像参数图像识别自动化识别和分类数据文件，直接用Excel打开。处理性能–流速-.25ml/minto12ml/min密度-50,000particles/ml(AutoImaging)VisualSpreadSheet©

建立图谱库视觉电子表格安装流通池-连接水泵管道-调整视场亮度-软件方法：Gain（增益）FlashDuration（LED亮的时间）

硬件方法：Thankyou!硬件部分ⅠA：PMT1(Channel#1)-红荧光（>650nm）B：PMT2(Channel#2)

-橙荧光（575nm）C：数字式CCD(Firewire)-彩色或黑白

-分辨率：1024×768硬件部分ⅡH：流通池水平调节；I：LED准直或弥散透镜；J：散射检测器调节面板；K：FlashLED；L：焦距粗调按钮；M：焦距微调按钮。D：532nm固态激光器；E：显微物镜（2X，

4X，10X，或

20X）；F：流通池固定支架；G：流通池固定架的安装底座；显微物镜/流通池2X(总放大倍数≈20X)/流通池(厚度)：600µm，800µm，1000µm，2000µm，3000µm；4X(总放大倍数≈40X)/流通池(厚度)：300µm，600µm；10X(总放大倍数≈100X)/流通池(厚度)：90µm，100µm，300µm；20X(总放大倍数≈200X)/流通池(厚度)：50µm，90µm，100µm