课件禽病学（完整版）禽病学实验指导

实验一新城疫血凝与血凝抑制试验目的意义：掌握血凝试验〔HA〕与血凝抑制试验〔HAI〕的根本方法；体会HA与HAI在新城疫病毒及其它病毒诊断和鉴定中的应用。根本原理：许多病毒外表具血凝素，具有凝集某些动物或人红细胞的特性，称为血凝现象，可用于鉴定病毒。血凝现象可以被特异性抗体所抑制，称为血凝抑制现象，利用这种特性可进行血清学试验，称为血凝抑制试验。〔一〕血凝试验〔HA〕：取96孔板，按以下步骤操作：1、第一排1-12孔各加生理盐水50ul，第二排1-12孔加生理盐水50ul为红细胞对照；2、吸50ul病毒液于第一排第1孔，混匀后取50ul至第2孔，依次稀释至第12孔，弃去50ul，各孔经倍比稀释后稀释度依次为2-1~2-12。实验步骤3、第一排1-12孔及第二排1-12孔各加1%鸡红细胞50ul，微型震荡器震荡2min混匀。4、室温静置10-30分，观察结果。5、结果判定：红细胞对照组红细胞完全沉降，以试验排中能使等量红细胞发生完全凝集的病毒最高稀释倍数，作为病毒的血凝价，即HI效价，用2n表示。血凝试验流程图〔二〕血凝抑制试验〔HAI〕：取一96孔板，按以下步骤操作：1、4个单位抗原的制备：按HA试验测出的病毒血凝价除以4即为4个单位血凝素的稀释度。2、待检血清的稀释：第一、二、三排1-12孔各加生理盐水50ul，于第一排第1孔中参加50ul待检血清，反复吹吸3-5次混匀后，取50ul至第2孔混匀，吸取50ul至第3孔……，依次稀释至第12孔，弃去50ul，经倍比稀释，血清的稀释倍数为21~212。3、第一、二排1-12孔各加4个单位血凝素50ul，微量震荡器震荡2min混匀；4、室温静置20min；5、第一、二、三排1-12孔各加1%鸡红细胞50ul，微量震荡器震荡2min混匀混匀。6、室温静置10-30分，观察结果；7、结果判定：第二排为抗原对照，红细胞应全部凝集，第三排为红细胞对照，红细胞应全部沉降。以待检血清能完全抑制病毒凝集红细胞的最高稀释倍数为血清的HAI效价，用2n表示。血凝抑制试验流程卵黄囊羊膜囊绒毛尿囊腔气室〔3〕接种病毒：用18mm针头的1ml注射器吸取鸡新城疫病毒，针头通过打出的孔进针，刺入尿囊腔，注入0.1ml。〔4〕用融化的石蜡封闭小孔，39℃孵化器中孵化72h。实验三鸡白痢平板凝集试验目的意义：了解平板凝集试验在鸡白痢诊断及监测中的应用学习鸡白痢平板凝集试验的操作方法。根本原理：细菌等颗粒性抗原与特异性抗体结合后，在有电解质的情况下，会出现肉眼可见的凝集块，称为凝集反响。直接凝集反响可分为玻片凝集与试管凝集。凝集试验是疾病诊断及体内抗体水平测定的常用方法。5.静置3-4分，再拿起玻板轻轻转动，按以下标准记反响结果：++++：出现大片凝集，液体完全透明，即100%凝集+++：有明显凝集片和颗粒，液体几乎完全透明，即75%凝集++：有可见的凝集片和颗粒，液体不甚透明，即50%凝集+：仅仅可以看见颗粒，液体混浊，即25%凝集-：液体均匀混浊，无凝集现象〔同时应设阳性、阴性血清及抗原对照〕6.结果判定：实验四鸡传染性法氏囊病琼脂扩散试验

器材及试剂:生理盐水、琼脂糖、硫柳汞、平皿、打孔器、移液器、吸头等。实验步骤:1、制板:加融化的1%琼脂于洁净玻片或培养皿内，厚。2、打孔：待琼脂凝固后打孔，多为梅花形，一般孔径3-4mm，孔距4-5mm。3、加样：于中央孔参加标准沉淀抗原，周围1、4孔内加阳性血清对照，2、3、5、6孔为待检血清。4、加样完后，将琼脂板置于湿盒中，37℃扩散24-48h。5、结果判定：假设待检血清与抗原孔之间出现白色沉淀线，那么表示阳性，假设不出现沉淀线，为阴性。假设用于检测血清效价，那么以出现沉淀线的血清最高稀释倍数表示〔2n〕。用于两种抗原比较时，沉淀线有多种情形，应具体分析。制板打孔封底加样置湿盒中扩散琼脂扩散试验流程图实验五禽霍乱的诊断目的意义：认识禽霍乱病原巴氏杆菌两极染色的特性熟悉禽霍乱的诊断方法和步骤认识病原菌别离鉴定在禽病诊断中的作用根本原理：禽巴氏杆菌病又称为禽霍乱，主要表现为败血症，即实质器官的出血、肿大与坏死。巴氏杆菌在病禽组织内呈典型的两极着色，纯培养物呈卵圆形或短杆状；在血或血清琼脂上生长良好，呈露珠样小菌落并有不同颜色的荧光；能发酵多种糖；多杀性巴氏杆菌能致死小白鼠、家兔等。故常依据形态特征、培养特性、生化特性和动物实验等来鉴定。器材及试剂:病料：患病鸭组织〔肝、脾、肺〕或体液〔血、胸腹腔渗出液〕；培养基：5-10%兔血琼脂平板；动物：小白鼠或成年健康家兔；无菌生理盐水、吸管、注射器、针头、酒精灯等。实验步骤:〔一〕形态学检查：病料或心血涂片，瑞氏染色。〔二〕培养特性检查：将病料接种于血琼脂平板37℃培养24h。〔三〕生化鉴定：

鸭霍乱心血涂片中的多杀性巴氏杆菌〔四〕动物回归实验：将病料剪碎并研磨，用灭菌生理盐水制成1:10悬液，也可将血琼脂平板培养物制成悬液，皮下注射小白鼠，只。注意观察小鼠的表现，待发病死亡后，即行解剖，观