（高清版）DB51∕T 1082-2010 饲料中伏马毒素B1的测定 高效液相色谱法

DB51/T1082—2010饲料中伏马毒素B₁的测定高效液相色谱法IDB51/T1082-2010 Ⅱ1范围 12规范性引用文件 13原理 14试剂和溶液 15仪器与设备 26试样制备 27分析步骤 28结果计算 39精密度 3 4Ⅱ本标准的附录A为资料性附录。本标准由四川省畜牧食品局提出并归口。本标准由四川省质量技术监督局批准。本标准由四川省饲料工作总站负责起草。本标准起草人：柏凡、李云、魏敏、王宇萍、赵立军、张静。1饲料中伏马毒素B₁的测定高效液相色谱法本标准规定了测定饲料中伏马毒素B₁的含量的高效液相色谱法(HPLC)。本标准适用于配合饲料、浓缩饲料及饲料原料的测定。本标准中伏马毒素B₁的检出限为0.2mg/kg。下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本(包括所有的修改单)适用于本文件。GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法GB/T14699.1饲料采样GB/T20195动物饲料试样的制备试样经甲醇-水提取，离心、过滤后，取滤液经过免疫亲和柱净化，经衍生化，用高效液相色谱仪-荧光检测器检测，外标法计算伏马毒素B1的含量。除特殊说明外，所有试剂均为分析纯，色谱用水符合GB/T6682一级用水的规定。4.16提取液：甲醇+水=80+20(体积比)。4.17衍生剂：称取5mg邻苯二甲醛，溶于1mL甲醇，用0.05mol/L四硼酸钠溶液定容到50mL,加入25μL巯基乙醇，混匀，备用(4℃可保存一周)。溶于1000mL水，用盐酸或氢氧化钠溶液调pH至7.0。2DB51/T1082-20104.19伏马毒素B₁标准品：含量大于98%。4.19.1标准贮备液：精密称取10mg伏马毒素B1标准品，用乙腈+水(1+1)溶解、定容至100mL,此贮备液浓度为100μg/mL,置于2～8℃冰箱中保存，有效期6个月。1.0μg/mL,5.0μg/mL,25μg/mL,50μg/mL。置于2～8℃冰箱中保存，有效期6个月。注1:凡接触伏马毒素B的容器，需浸入4%次氯酸钠(NaOC1)溶液，放置半天后清洗备用。注2:为了安全，分析人员操作时须带上医用乳胶手套，在通风橱内操作。4.19.3伏马毒素免疫亲和柱。5.2超声波清洗器。5.3离心机：转速为5000r/min以上。5.4超纯水处理器。5.5涡旋混合器。5.6高效液相色谱仪：配备荧光检测器。5.7氮吹仪。按GB/T14699.1规定采集试样后，按GB/T20195规定，选取具有代表性的实验室样品1kg,四分法缩减分取200g左右，粉碎过1mm孔筛，混匀装7.1.1提取称取20g试样(精确至0.01g)于锥形瓶中，加入2g氯化钠(4.6),50mL提取液(4.16),超声提取20min,离心，取上清液过滤，准确量取滤液5.0mL,加入20mLPBS(4.18)稀释，混匀，待净化。7.1.2净化将免疫亲和柱底帽除去。剪去亲和柱的盖帽，与10ml注射器连接。待免疫亲和柱中缓冲液排出后，精确吸取上述稀释液5.0mL过免疫亲和柱(流速1-2滴/秒),再依次用5mLPBS缓冲液淋洗柱子，抽干柱子，用2.0mL甲醇洗脱，收集洗脱液于50℃水浴中氮气吹干，重新溶解于200μL的甲醇+水(50+50,体积比)中，待衍生化。7.1.3衍生化取样品处理液和标准溶液各100μL,各加300μL衍生剂(4.17),混匀，过0.45μm滤膜，在2min内7.2.1色谱柱：C₁8柱，柱长250mm,内径4.6mm,粒度5μm;或性能相当的色谱柱。7.2.3流动相：甲醇+磷酸二氢钠(0.1mol/L,磷酸调节pH至3.3)=77+23(体积比)。7.2.4流速：0.8mL/min。7.2.5检测器：荧光检测器，Ex:330nm,Em:440nm。7.2.6进样量：50μL。3DB51/T1082-20107.3测定按上述色谱条件，分别将标准溶液和试样溶液上机测定，按照保留时间进行定性，单点或多点校正，外标法定量。当分析物浓度不在线性范围内时，应将分析物稀释或者浓缩后再进行检测。8结果计算试样中伏马毒素B₁的含量X,以质量分数毫克每千克(mg/kg)表示，单点校正按式(1)计算：V——上机定容体积，单位为毫升(mL); 伏马毒素B₁标准溶液对应的色谱峰面积响应值；试样溶液对应的色谱峰面积响应值；Cs——伏马毒素B₁标准溶液的浓度，单位为微克每毫升(μg/mL);m——试样质量，单位为克(g);n——稀释倍数。结果用平行测定的算术平均值表示，保留三位有效数字。9精密度在重复性试验条件下两次平行测定结果的相对偏差不大于10%。4DB51/T1082-2010(资料性附录)伏马毒素B₁标准色谱图0.0