2023年人教版高中生物选修一知识点总结

高中生物选修毕生物技术实践知识点总结

专题一老式发酵技术的应用课题一果酒和果醋的制作

1、发酵：通过微生物技术的培养来生产大量代谢产物的过程。

2,有氧发酯：醋酸发酵谷氨酸发醉无氧发酵：洒精发酵乳酸发酵

3、酵母菌是兼性厌氧菌型微生物真菌酵母菌的生殖方式：出芽生殖（重要）分裂生殖电子生殖

他

4、在有氧条件下，酵母菌进行有氧呼吸,大量繁殖。CM206+602-6C02+6H20

册

5、在无氧条件下，酵母菌能进行酒精发酵。。孤2（）6-2（：汨5（出+2c。2

6、2（TC左右最合适酵母菌繁殖酒精发酵时一般将温度控制在18C-25c

7、在福萄酒自然发酵的过程中，起重要作用日勺是附着在葡萄皮表面的I鞋型醛理菌。在发酵过程中,

伴随酒精浓度的提高，红葡萄皮H勺色素也进入发酵液，使葡萄酒展现深红色。在缺氧呈酸性的发

酵液中上酵母菌可以生长繁殖，而绝大多数其他微生物都因无法适应这一环境而受到制约。

8、醋酸菌是单细胞细菌（原核生物），代谢类型是异养需氧型，生殖方式为二分裂

9、当氧气、糖源都充足时，醋酸菌将由萄汁中的糖分解成醋酸:当缺乏糖源时，醋酸菌将乙醇变

悔

为乙醛，再将乙醛变为醋酸。202H50H+402fCH3C00H+6H2。

10、控制发酵条件的作用①甜酸菌对氧气的含量尤其敏感，当进行深层发酵时，虽然只是短时间中

断通入氧气，也会引起酷段菌死亡。②醋酸菌最适生长温度为30〜35℃,控制好发酵温度，使

发酵时间缩短，乂减少杂菌污染的机会。③有两条途径生成醋酸：直接氧化和以酒精为底物H勺

氧化。

11、试验流程：挑选葡萄一冲洗一榨汁一酒精发酵一果酒（一醋酸发酵一果醋）

12、酒精检查：果汁发酵后与否有酒精产生，可以用重铝酸钾来检查。在酸性条件下,重铭酸钾与

酒精反应展现灰绿色,先在试管中加入发酵液2mL,再滴入物质H勺量浓度为3mol/LH勺H2S0,3

滴，振荡混匀，最终滴加常温下饱和口勺重铭酸钾溶液3滴，振荡试管，观测颜色

13、充气口是在醋酸发酵时连接充气泵进行充气用的；排气口是在酒精发酵时

用来排出二氧化碳H勺：出料口是用来取样的。排气I1要通过•种长而弯曲的胶

管与瓶身相连接，其目的是防止空气中微生物的污染。开口向下的目的是有助于二氧化碳的排出。

使用该装置制酒时，应当关闭充气口；制醋时，应当充气口连接气泵，输入氧气。

疑难解答

（1）你认为应当先冲洗葡萄还是先除去枝梗？为何？

应当先冲洗，然后再除去枝梗,以防止除去枝梗时引起葡萄破损，增长被杂菌污染的机会。

（2）你认为应当从哪些方面防止发酵液被污染？

如：要先冲洗葡萄，再除去枝梗；榨汁机、发酵装置要清洗洁净，并进行酒精消毒；每次排气

时只需拧松瓶盖，不要完全揭开瓶盖等。

（3）制葡萄酒时，为何要将温度控制在18〜25C?制葡萄醋时，为何要将温度控制在

30〜35℃?

温度是酵母菌生长和发酵H勺重要条件。20c左右最适合酵母菌的繁殖。因此需要将温度控制在其最

适温度范围内。而醋酸菌是适温菌，最适生长温度为30〜35℃,因此要将温度控制在30〜35℃。

课题二腐乳日勺制作

1、多种微生物参与了豆腐口勺发酵，如青霉、酵母、曲霉、毛霉等，其中起重要作用的是玉霉C毛

霉是一种丝状真菌。代谢类型是异养需氧型C生殖方式是抱子生殖。营腐生生活。

2、原理：毛霉等微生物产生H勺蛋白酶能将豆腐中的蛋白质分解成小分子的肽和氨基酸；脂肪酶可

将脂肪水解为甘油和脂肪酸。

3、试验流程：让豆腐上长出毛霉一加盐腌制一加卤汤装瓶一密封腌制

4、酿造腐乳的重要生产工序是将豆腐进行前期发酵和后期发酵。

前期发酵的重要作用：1.发明条件让毛霉生长。2.使毛酶形成菌膜包住豆腐使腐乳成型。

后期发酵重要是酶与微生物协同参与生化反应的过程。通过多种辅料与酶H勺缓和作用，生成腐乳

的香气。

5、将豆腐切成3cmX3cm><15的若干块。所用豆腐的含水量为70%左右，水分过多则腐乳不易成

娶

样品水分含量(%)计算公式：

(烘干前容器和样品质量-烘干后容器和样品质量)/烘干前样品质量

•毛霉的生长：条件：将豆腐块平放在笼屉内，将笼屉中时控制在15〜18P,并保持•定时温

度。

来源：1.来自空气中H勺毛霉泡子2.直接接种优良毛霉菌种时间：5天

•加盐腌制：将长满毛霉H勺豆腐块分层整洁地摆放在瓶中，同步逐层加盐，伴随层数的加高而增长

盐量，靠近瓶口表面的盐要铺厚某些。加盐腌制的时间约为8天左右。

.用盐腌制时，注意控制盐日勺用量：盐的浓度过低，局限性以克制微生物的生长，也许导致豆腐腐

败变质；盐的浓度过高会影响腐乳的口味

•食盐的作用：1.克制微生物的生长，防止腐败变质2.析出水分，是豆腐变硬，在后期制作过程

中不易酥烂3调味作用，给腐乳以必要的咸味4.浸提毛酶茵丝上的蛋白酶。

•配制卤汤：卤汤直接关系到腐乳的色、香、味。卤汤是由酒及多种香辛料配制而成的。卤汤中酒

日勺含量•般控制在12%左右。

•酒的作用：1.防止杂菌污染以防腐2.与有机酸结合形成酯，赋予腐乳风味3.酒精含量的高下与

腐乳后期发酵时间的长短有很大关系，酒精含量越高，对蛋白酶的克制作用也越大，使腐乳成熟期

延长；酒精含量过低，蛋白酶的活性高，加紧蛋白质的水解，杂菌繁殖快，豆腐易腐败，难以成

块。

•香辛料的作用：L调味作用2.杀菌防腐作用3.参与并增进发酵过程

・防止杂菌污染：①用来腌制腐乳的玻璃瓶，洗刷洁净后要用沸水消毒。②装瓶时，操作要迅速小

心。整洁地摆放好豆腐、加入卤汤后，要用胶条将瓶口密封。封瓶时，最佳将瓶口通过酒精灯的火

焰，防止瓶口被污染。

期艰解率

（1）运用所学H勺生物学知识，解释豆腐长白毛是怎么一回事？

豆腐生长日勺白毛是毛霉的白色菌丝。严格地说是直立菌丝，在豆腐中尚有制匐菌丝。

（2）我们平常吃的豆腐，哪种适合用来做腐乳？

含水量为70$左右的豆腐适于作腐乳。用含水量高的豆腐制作腐乳，不易成形。

（3）吃腐乳时，你会发现腐乳外部有一层致密日勺“皮”。这层“皮”是怎样形成的J呢？

它对人体有吉吗？它W、J作用是什么？

“皮”是前期发酵时在豆腐表面上生长H勺菌丝（匍匐菌丝），对人体无害。它能形成腐乳欧I

“体”，使腐乳成形。

课题三制作泡菜

•制作泡菜所用微生物是乳酸菌，其代谢类型是异养厌氧型。在无氧条件下，降糖分解为乳酸。

的、

分裂方式是二分裂。反应式为：C此外------2aH23+能量

常见的乳酸菌有乳酸链球菌和乳酸杆菌。乳酸杆菌常用于生产酸奶。

•亚硝酸盐为白色粉末，易溶于水，在食品生产中用作食品添加剂。

•膳食中的亚硝酸盐一般不会危害人体健康,国家规定肉制品中不超过30mg/kg,磐腌菜中不超过

20mg/kg,婴儿奶粉中不超过2mg/kg。亚硝酸盐被吸取后随乐液排出体外，但在合适pH、温度和

一定微生物作用下形成致癌物质亚硝胺。

•一般在腌制10天后亚硝酸盐含量开始减少，故在1（）天之后食用最佳

*测定亚硝酸盐含量的原理是在盐酸酸化条件下，亚小酸盐与对氨基茶磺酸发生重氮化反应后，与

N7-养基乙二胺盐酸盐结合形成玫瑰红色染料，与已知浓度的原则显色液目测比较，估算泡菜中亚

硝酸盐含量。

专题二微生物日勺培养与应用

课题一微生物日勺试验室培养

•培养基按照物理性质可分为液体培养基、半固体培养基和固体培养基，，在液体培养基中加入凝固

剂琼脂（是从红藻中提取的一种多糖，在配制培养基中用作凝固剂）后，制成琼脂固体培养基。微

生物在固体培养基表面生长，可以形成肉眼可见的菌落。根据菌落的特性可以判断是哪一种菌。液

体培养基应用于工业或生活生产，固体培养基应用于微生物的分离和鉴定，半固体培养基则常用于

观测微生物日勺运动及菌种保藏等。

・按照成分培养基可分为人工合成培养基和天然培养基。合成培养基是用成分已知的化学物质配制

而成，其中成分的种类比例明确，常用于微生物H勺分离鉴定。天然培养基是用化学成分不明的天然

物质配制而成，常用于实际工业生产。

•按照培养基的用途，可将培养基分为选择培养基和鉴定培养基,选择培养基是指在培养基中加入

某种化学物质，以克制不需要的微生物生长，增进所需要的微生物的生长。鉴别培养基是根据微生

物的特点，在培养基中加入某种指示剂或化学药物配制而成为，用以鉴别不一样类别的微生物。

•培养基的化学成分包括水、无机盐、碳源、氮源、生长因子等。

.碳源：能为微生物的代谢提供碳元素的物质。如CO?、NaMU.等无机碳源；糖类、石油、花牛.粉

饼等有机碳源。异养微生物只能运用有机碳源。单质碳不能作为碳源。

.氮源：能为微生物的代谢提供氮元素的物质。如此、NhNOs、NH；（无机氮源）蛋白质、氨基

酸、尿素、牛肉膏、蛋白陈（有机氮源）等。只有固氮微生物才能运用N2。

•培养基还要满足微生物生长对pH、特殊营养物质以及银气的规定。例如，培养乳酸杆菌时需要

在培养基中添加维生素，培养霉菌时须将培养基H勺pH调至酸性，培养细菌是需要将pH调至中性或

微碱性，培养厌氧型微生物是则需要提供无氧的条件

•无菌技术・获得纯净培养物H勺关键是防止外来杂菌口勺入侵，要注意如下几种方面：

①对试验操作H勺空间、操作者H勺衣着和手，进行清洁和消毒。

②将用于微生物培养的器皿、接种用品和培养基等器具进行灭菌。

③为防止周围环境中微生物H勺污染，试验操作应在酒精灯火焰附近进行。

④试验操作时应防止已经灭菌处理日勺材料用品与周围口勺物品相接触。

・无菌技术除了用来防止试验室的培养物被其他外来微生物污染外，尚有什么目的?

答：无菌技术还能有效防止操作者自身被微生物感染。

•消毒与灭菌的区别

消毒指使用较为温和II勺物理或化学措施仅杀死物体表面或内部一部分对人体有害II勺微生物（不

包括芽抱和狗子）。消毒措施常用煮沸消毒法，巴氏消毒法（对「某些不耐高温的液体）尚为化学

药剂（如泗精、氯气、石炭酸等）消毒、紫外线消毒。

灭菌则是指使用强烈H勺理化原因杀死物体内外所有的微生物，包括芽抱和抱子。灭菌措施有炮

烧灭菌、干热灭菌、高压蒸汽灭菌。

­灭菌措施：

①接种环、接种针、试管口等使用灼烧灭菌法：

②玻璃器皿、金属用品等使用干热灭菌法，所用器械是干热灭菌箱；

③培养基、无菌水等使用高压蒸汽灭菌法，所用器械是高压蒸汽灭菌锅。

④表面灭菌和空气灭菌等使用紫外线灭菌法，所用器械是紫外灯。

•制作牛肉膏蛋白豚固体培养基

（1）措施环节：计算、称量、溶化、灭菌、倒平板。

（2）倒平板操作的环节：

①将灭过菌H勺培养皿放在火焰旁H勺桌面上，右手拿装有培养基的锥形瓶，左手拔出棉塞。

②右手拿锥形瓶，将瓶口迅速通过火焰。

③用左手日勺拇指和食指将培养皿打开一条梢不小于瓶口口勺缝隙，右手将锥形瓶中口勺培养基（约

10〜20mL）倒入培养皿，左手立即盖上培养皿的皿盖。

④等待平板冷却凝固，大概需5-lOmin.然后，将平板倒过来放置，使培养皿盖在下、皿底

在上。

•倒平板操作的I讨论

1.培养基灭菌后，需要冷却到50℃左右时，才能用来倒平板。你用什么措施来估计培养基的

温度？

提醒：可以用至触摸盛有培养基於J锥形瓶，感觉锥形瓶的温度下降到刚刚不烫手时，就可以进

行倒平板了。

2.为何需要使锥形瓶的瓶口通过火焰？

答：通过灼烧灭菌，防止瓶口口勺微生物污染培养基。

3.平板冷凝后，为何要将平板倒置？

答：平板冷凝后，皿盖上会凝结水珠，凝固后日勺培养基表面日勺湿度也比较高，将平板倒置，既

可以使培养基表面U勺水分更好地挥发，又可以防止皿盖上U勺水珠落入培养基，导致污染。

4.在倒平板的过程中，假如不小心将培养基溅在皿盖与皿底之间的部位，这个平板还能用来培

养微生物吗？为何？

答：空气中的微生物也许在皿盖与皿底之间的培养基上滋生，因此最佳不要用这个平板培养微

生物。

・纯化大肠杆菌

（1）微生物接种的措施最常用的是平板划线法和稀释涂布平板法。

（2）平板划线法是通过接种环在琼脂固体培养基表面持续划线的操作。将汇集H勺菌种逐渐稀释分

散到培养基H勺表面。在多次划线后培养，可以分离到由一种细胞繁殖而来的肉眼可见的子细胞群

体，这就是菌落。

（3）稀释涂布平板法是将菌液进行一系列的梯度独相，然后将不一样稀释度口勺菌液分别涂布到琼

脂固体培养基II勺表面.，进行培养。分为系列稀释操作和涂布平板操作两步。

（4）用平板划线法和稀释涂布平板法接种的目的是：使汇集在一起的微生物分散成单个细胞，从

而能在培养基表面形成单个的菌落，以便于纯化菌种。

（5）平板划线法操作环节：

①将接种环放在火焰上灼烧,直到接种环烧红。②在火焰旁冷却接种环,并打开棉塞。

③将试管口通过火焰。④将已冷却的接种环伸入菌液中蘸取一环菌液。

⑤将试管通过火焰，并塞上棉塞。⑥左手将皿盖打开条缝隙，右手将沾有菌种的接种环迅速

伸入平板内，划三至五条平行线，盖上皿盖。注意不要划破培养皿。⑦灼烧接种环，待其冷却后，

从第一区域划线的末端开始往第二区域内划线。反复以上操作，在三、四、五区域内划线。注意不

要将最终一区的划线与第一区相连，⑧将平板倒置.放入培养箱中培养。

•平板划线操作H勺讨论

1.为何在操作的第一步以及每次划线之前都要灼烧接种环？在划线操作结束时，仍然需要

灼烧接种环吗？为何？

答：操作H勺第一步灼烧接种环是为了防止接种环上也许存在的微生物污染培养物；每次划线前

灼烧接种环是为了杀死上次划线结束后，接种环上残留的菌种，使下一次划线时，接种环上的菌种

宜接来源于上次划线的末端，从而通过划线次数的增长，使每次划线时菌种的数目逐渐减少，以便

得到菌落C划纹结束后灼烧接种环，能及时杀死接种环上残留的菌种，防止细菌污染环境和感染操

作者。

2.在灼烧接种环之后，为何要等其冷却后再进行划线？

答：以免接种环温度太高，杀死菌种。

3.在作第二次以及其后的划线操作时，为何总是从上一次划线的末端开始划线？

答：划线后，线条末端细菌的数目比线条起始处要少，每次从上一次划线的末端开始，能使细

菌的数目伴随划线次数的I增长而逐渐减少，展终能得到由单个细菌繁殖而来的菌落。

（6）涂布平板操作的环节：

①将涂布器浸在盛有酒精的烧杯中。②取少许菌液，滴加到培养基表面。

③将沾有少许酒精的涂布器在火焰上引燃，待酒精燃尽后，冷却8〜10s。④用涂布器将菌液均匀

地涂布在培养基表面。

•涂布平板操作的J讨论

涂布平板的）所有操作都应在火焰附近进行。结合平板划线与系列稀释的无菌操作规定，想一

想，第2步应怎样进行无菌操作？

提醒：应从操作的各个细节保证“无菌”。例如，酒精灯与培养皿H勺距离要合适、吸管头不要

接触任何其他物体、吸管要在酒精灯火焰周围；等等。

菌种的保留

（1）对于频繁使用的菌种，可以采用临时保藏的措施。

①临时保藏措施

将菌种接种到试管的固体斜面培养基上，在合适的I温度卜.培养。当菌落长成后，将试管放入

4c的冰箱中保藏。后来每3〜6个月，都要重新将菌种从旧的培养基上转移到新鲜的培养基上。

②缺陷：这种措施保留的时间不长，菌种轻易被污染或产生变异。

(2)对于需要长期保留的菌种，可以采用甘油管藏的措施。

在3mLH勺甘油瓶中，装入1mL甘油后灭菌。将1mL培养的J菌液转移到甘油瓶中，与甘油充足混

匀后，放在一2(TC的冷冻箱中保留。

疑娘胡答

(1)生物H勺营养

人及动物的营养物质：水、无机盐、糖类、脂质、蛋白质、维生素六类。

植物的营养物质：矿质元素、水、二氧化碳等三类。

微生物的营养物质：水、无机盐、碳源、氮源及特殊营养物质五类。

<2)确定培养基制作与否合格日勺措施

将未接种U勺培养基在恒温箱中保温1~2天，无菌落生长，阐明培养基的制备是成功的，否则

需要重新制备。

课题二土壤中分解尿素的细菌的分离与计数

尿素是一种重要的农业氮肥，尿素并不能直接被农作物吸取C只有当土壤中的细菌将尿素分解

成氨之后，才能被植物运用。土壤中H勺细菌之因此能分解尿素，是由于他们能合成胭酶

尿素最初是从人的尿液中发现的

筛选菌株

(1)试验室中微生物的筛选应用欧J原理

人为提供有助于目的菌株生长的条件(包括营养、温度、pH等)，同步克制或制止其他微生

物生长。

(2)选择性培养基

在微生物学中，将容许特定种类日勺微生物生长，同步克制或制止其他种类微生物生长的培养

基，称作选择培养基。

(3)配制选择培养基的根据

根据选择培养的菌种H勺生理代谢特点加入某种物质以到达选择的目的,例如，培养基中不加入

有机物可以选择培养自养微生物：培养基中不加入氮元素，可以选择培养能固氮的微生物；加入高

浓度的食盐可选择培养金黄色葡萄球菌等。

记录菌落数目

(1)测定微生物数量的常用措施有稀释涂布平板法和显微镜直接计数,,

(2)稀释涂布平板法记录样品中活菌的数目的原理

当样品H勺稀释度足够高时，培养基表面生长日勺一种菌落，来源于样品稀释液中的一种活菌。通

过记录平板上的菌落数，就能推测出样品中大概具有多少活细菌。为了保证成果精确，一般设置

3〜5个平板,选择菌落数在30〜300的平板进行计数,并取平均值，记录的菌落数往往比活菌的

实际数目低,因此，记录成果一般用菌落数而不是活菌数来表达。

采用此措施的注意事项：1.一般选用菌落数在30^300之间的平板进行计数2.为了防止菌落蔓延，

影响计数，可在培养基中加入TTC3.本法仅限于•形成菌落的微生物

（1）土壤取样：同其他生物环境相比，土壤中的微生物，数最最大，种类最多。在富具有机质的

土壤表层，有更多的微生物生长。从富具有机物、潮湿、pH七7的土壤中取样。铲去表层土，在距

地表约3〜8cm口勺土壤层取样。

（2）样品的稀释：样品的稀释程度将直接影响平板上生长时菌落数目。在实际操作中，一般选用

一定稀释范围的样品液进行培养，以保证获得菌落数在30~300之间，适于计数的平板。

测定土壤中细菌的数量，一般选用IO,IO,i06

测定放线菌的数量，一般选用IO，io,io,

测定真菌的数量，一般选用IO?IO'10,

（3）微生物的培养与观测

不•样种类日勺微生物，往往需要不一样的培养温度和培养时间。细菌30~379「2天

放线菌25~28c5~7天霉菌25~28℃3~4天

每隔24小时记录一次菌落数目,选用菌落数目稳定期"勺记录作为成果，这样可以防止因培养时间

局限性而导致一楼菌落口勺数目。一般来说，在一定的培养条件下（相似口勺培养基、唯独及培养时

间），同种微生物体现出稳定的菌落特性（形状、大小、隆起程度、颜色）

疑难解答

（1）怎样从平板上H勺菌落数推测出每克样品中的菌落数?

记录某一稀释度下平•板上H勺菌落数，最佳能记录3个平板，计算出平板菌落数的平均值

每克样品中的菌落数=（C/V）*M其中，C代表某一稀释度下平板上生长的平均菌落数，、代表

涂布平板时所用的稀释液的体积（ml）,M代表稀释倍数

课题三分解纤维素的微生物日勺分离

纤维素，一种由铺箱糖首尾相连而成||勺高分子化合物，是地球1:含量最丰富的多糖类物质，

纤维素与纤维素酶

<1）棉花是白燃界中纤维素含量最高的天燃产物，木材,作物秸和:等也'富含纤维素”

（2）纤维素酶是一种复合酶,一般认为它至少包括三种组分，即G酶、Q酶和葡萄糖昔酶,前两

种酶使纤维素分解成纤维二糖，第三:种酶将纤维二糖分解成葡萄糖。纤维素最终被水解成前萄糖，

为微生物的生长提供营养。

纤维素分解菌的筛选

（1）筛选措施：刚果红染色法。可以通过颜色反应直接对微生物进行筛选。

（2）刚果红染色法筛选纤维素分解菌的原理

刚果红是一种染料，它可以与像纤维素这样H勺多糖物质形成红色复合物,但并不和水解后的纤

维二糖和葡萄糖发生这种反成。当我们在具有纤维素的培养基中加入刚果红时，刚果红能与培养基

中的纤维素形成红色复合物。当纤维素被纤维素酶分解后，刚果红一纤维素的复合物就无法形成，

培养基中会出现以纤维素分解菌为中心口勺透明圈。这样，我们就可以通过与否产生透明圈来筛选纤

维素分解菌。

分离分解纤维素的微生物的试验流程

土壤取样一选择培养（此步与否需要，应根据样品中目H勺菌株数量的多少来确定）一梯度稀移一将

样品涂布到鉴别纤维素分解菌欧I培养基上一挑选产生透明圈的菌落

（1）上壤采集选择富含纤维素的环境。

(2)刚果红染色法分离纤维素分解菌的I环节倒平板操作、制备菌悬液、涂布平板

(3)刚果红染色法种类

•种是先培养微生物，再加入刚果红进行颜色反应，另•种是在倒平板时就加入刚果红。

课题延伸

对分解纤维素的微生物进行了初步的筛选后，只是分离纯化的第一步，为确定得到H勺是纤维素

分解菌，还需要进行发酵产纤维素酶H勺试验，纤维素酶的发醉措施有液体发酵和固体发酵两种。纤

维素酶的测定措施，一般是对纤维素酶分解滤纸等纤维素后所产生的葡萄糖进行定量的测定。

疑难解答

(1)为何要在富含纤维素口勺环境中寻找纤维素分解菌？

由于生物与环境口勺互相依存关系，在富含纤维素的环境中，纤维素分解菌的含最相对提高，因

此从这种土样中获得目的微生物的几率要高于--般环境。

(2)将滤纸埋在土壤中有什么作用？你认为滤纸应当埋进土壤多深？

将漉纸埋在土壤中能使纤维素分解菌相对汇集，实际上是人工设置纤维素分解菌生存的合适环

境。一般应将纸埋于深约10cm左右腐殖土壤中。

(3)两种刚果红染色法H勺比较

措施一是老式的措施，缺陷是操作繁琐，加入刚果红溶液会使菌落之间发生混杂；其长处是这

样显示出H勺颜色反应基本上是纤维素分解菌的作用。措施二H勺长处是操作简便，不存在菌落混杂问

题，缺陷是由于纤维素和琼脂、土豆汁中都具有淀粉类物质，可以使可以产生淀粉酶H勺微生物出现

假阳性反应。但这种只产生淀粉酶H勺微生物产生的透明圈较为模糊，由于培养基中纤维素占重要地

位，因此可以与纤维素酣产生的透明圈相辨别。措施一的另一缺陷是：有些微生物具有降解色素的

能力，它们在长时间培养过程中会降解刚果红形成明显的透明圈，与纤维素分解菌不易辨别。

（4）为何选择培养可以“浓缩”所需的微生物?

在选择培养的条件下，可以使那些可以适应这种营养条件口勺微生物得到迅速繁殖，而那些不适

应这种营养条件H勺微生物的繁殖被克制，因此可以起到“浓缩”的作用。

专题三植物日勺组织培养技术

课题一菊花日勺组织培养

植物组织培养的基本过程

细胞分化：在生物个体发育过程中，细胞在形态、构造和生理功能上出现稳定性差异的过程。

离体的植物组织或细胞，在培养了一段时间后来，会通过细胞分裂，形成愈伤组织，愈伤组织的细

胞排列疏松而无规则，是一种高度液泡化的呈无定形状态的薄壁细胞。由高，度分化的植物组织或细

胞产生愈伤组织的过程，称为植物细胞FJ脱分化，或者叫做去分化。脱分化产生日勺愈伤组织继续进

行培养，又可以重新分化成根或芽等器官，这个过程叫做再分化。再分化形成H勺试管苗，移栽到地

里，可以发育成完整口勺植物体。

植物细胞工程

具有某种生物全套遗传信息的任何一种活细胞,都具有发育成完整个体的能力,即每个生物细胞都

具有全能性。但在生物体的生长发育过程中并不体现出来，这是由于在特定的时间和空间条件下,

通过基因的选择性体现,构成不一样组织和器宜。

植物组织培养技术的J应用有：实现优良品种时迅速繁殖;培育脱毒作物;制作人工种子;培育作物

新品种以及细胞产物的工厂化生产等。

­细胞分化是一种持久性的变化，它有什么生理意义？

使多细胞生物体中细胞构造和功能趋向专门化，有助于提高多种生理功能的效率。

比较根尖分生组织和愈伤组织的异同

组织类型细胞来源纽胞形态细胞构造细胞排列细胞去向

根尖分化成多种

受精卵正方形无液泡紧密

分生组织细胞组织

影响植物组织培养H勺条件

愈伤组织高度分化细胞无定形高度液泡化疏松再分化成新个体

材料：不•样的植物组织，培养日勺难易程度差异很人。植物材料的选择直接关系到试验的成败。植

物阳阴屡、

确用脚解价褊1杆刷犍姆都会影响试验成果。菊花组织培养一般选择未开花植物

1睢m亳重触照间则幽杀1型。一股米说，羟易进行尢性繁殖的植物羟易进仃组织培养。选用生长

旺盛嫩枝进行组培的是嫩枝生理状态好，轻易诱导脱分化和再分化。

营养：离体FI勺植物组织和细胞，对营养、环境等条件的规定相对特殊，需要配制合适的培养基。

用的培养基是MS培养基，其中具有的大量元素是N、P、S、K、Ca、Mg,微量元素是Fe、Mn、B、

Zn、Cu、M。、I、C。，有机物有甘氨酸、烟酸、肌醇、维生素、蔗糖等。

激素：植物激素中生长素和细胞分裂素是启动细胞分裂、脱分化和再分化的关键性激素。在生长素

存在的状况下，细胞分裂素的作用展现加强趋势。在培养基中需要添加生长素和细胞分裂素等植物

激素，其浓度、使用H勺先后次序、用量H勺比例等都影响成果。

生长素/细胞分裂素比值与成果

使用次序试验成果

比值高时促根分化，抑芽形成

先生长素，后细胞分裂素有助于分裂但不分化

比值低时促芽分化，抑根形成

先细胞分裂素，后生长素细胞既分裂也分化

比值适中增进愈伤组织生长

同步使用分化频率提高

环境条件：PH、温度、光等环境条件。

不一样的植物对多种条件的规定往往不一样。进行菊花的组织培养，一般将pH控制在5.8左右,

温度控制在18~22C,并且每日用日光灯照射12h.

4、操作流程

配制MS固体培养基：配制多种母液：将多种成分按配方比例配制成的浓缩液（培养基母液）。

•使用时根据母液H勺浓缩倍数，计算用量，并加蒸储水稀释。

•配制培养基：应加入的物质有琼脂、蔗糖、大量元素、微量元素、有机物和植物激素的母液,并

用蒸做水定容到1000毫升。

.在菊花组织培养中，可以不添加植物激素原因是菊花茎段组织培养比较轻易。

•灭菌：采用日勺灭菌措施是高压蒸汽灭菌。

•MS培养基中多种营养物质的作用是什么？与肉汤培养基相比，MS培养基有哪些特点？

大量元素和微量元素提供植物细胞所必需的无机盐；蔗糖提供碳源，维持细胞渗透压：甘氨酸、维

生素等物质重要是为了满足离体植物细胞在正常代谢途径受到一定影响后所产生的J特殊营养需求。

微生物培养基以有机营养为主,MS培养基则需提供人半无机营养。

外植体的消毒外植体：用于离体培养H勺植物器官或组织片段。选用菊花茎段时，要取生长旺盛日勺

嫩枝。菊花茎段用流水冲洗后可加少许洗衣粉，用软刷轻轻刷洗，刷洗后在流水下冲洗20min左

右。用无菌吸水纸吸干外植体表面的水分，放入体积分数为70%的酒精中摇动2〜3次，持续6~7s,

立即将外植体取出，在无菌水中清洗。取出后仍用无菌吸水纸吸干外植体表面水分，放入质量分数

为0.1%日勺氯化汞溶液中广2min。取出后，在无菌水中至少清洗3次，漂洗消毒液。

注意：对外植体进行表面消毒时，就要考虑药剂的消毒效果，又要考虑植物H勺耐受能力。

接种：接种过程中插入外植体时形态学上端朝上，每个锥形瓶接种7〜8个外植体。外植体接种与

细菌接种相似，操作环节相似，并且都规定无菌操作。

培养：应当放在无菌箱中进行，并定期进行消毒，保持合适内温度（18~22C）和光照（12h）

移栽：栽前应先打开培养瓶的封口膜，让其在培养间生长几日，然后用流水清洗根部培养基。然后

将幼苗移植到消过毒的蛭石或珍珠岩等环境中生活一段时间，进行壮苗。最终进行露天栽培。

栽培

外植体在培养过程中也许会被污染，原因有外植体消毒不彻底；培养基灭菌不彻底；接种中被杂菌

污染；锥形瓶密封性差等。

专题二0冬日勺在名佶界

被子植物的花粉发育被子植物的雄蕊一般包括花丝、花药两部分。花药为囊状构造,内部具有许多

花粉。花粉是由花粉母细胞通过减数分裂而形成日勺，因此，花粉是单倍体的生殖细胞，被子植物花

粉的发育要经历小抱子四分体时期、单核期和双核期等阶段。在小抱子四分体时期，4个单倍体细

胞连在一起，进入单核期时，四分体H勺4个单倍体细胞彼此分离，形成4个具有单细胞核口勺花粉

粒。这时日勺细胞含浓厚日勺原生质，核位于细胞口勺中央（单核居中期）。伴随细胞不停长大，细胞核

由中央移向细胞一侧（单核靠边期），并分裂成1个生殖细胞核和1个花粉管细胞核，进而形成两

个细胞，一种是生殖细胞，一种是营养细胞。生殖细胞将在分裂一次，形成两个精子。

注意：①成熟的花粉粒有两类，一类是二核花粉粒，其花粉粒中只含花粉管细胞核和生殖细胞核，

二核花粉粒口勺精子是在花粉管中形成H勺；另一类是三核花粉粒，花粉在成熟前，生殖细胞就进行一

次有丝分裂，形成两个精子，此花粉粒中具有两个精子核和一种花粉管核（营养核）②花粉发育过

程中的四分体和动物细胞减数分裂的四分体不一样。花粉发育过程中的四分体是花粉母细胞经减数

分裂形成的4个连在一起欧I单倍体细胞；而动物细胞减数分裂过程中H勺四分体是联会配对后H勺一对

同源染色体，由于具有四条染色单体而称为四分体。③同毕生殖细胞形成U勺两个精子，其基因构成

完全相似V

产生花粉植株的两种途径通过花药培养产生花粉植株（即单倍体植株）一般有两种途径，一种是花

粉通过胚状体阶段发育为植物，另一种是花粉在诱导培养基上先形成愈伤组织，再将其诱导分化成

植迷「这两种途径之间并没有绝对口勺界线，植要取决于培养基中激素的种类及其浓度配比。

注意；①无论哪种产生方式，都要先诱导生芽，再诱导生根②胚状体:植物体细胞组织培养过程

中，诱导产生的形态与受精卵发育成日勺胚非常类似的构造，其发育也与受精卵发育成日勺胚类似，有

胚芽、胚根、胚轴等完整构造，就像一粒种子，乂称为细胞胚。

影响花药培养口勺原因诱导花粉能否成功及诱导成功率的高下，受多种原因影响，其中材料的选择勺

培养基的构成是重要的影响原因

•亲本的生理状况：花粉初期是的花药比后期的更轻易产生花粉植株，选择月季的初花期.

•合适的花粉发育时期：一般来说，在单核期,细胞核由中央移向细胞一侧的时期，花药培养成功

率最高

•花蕾：选择完全未开放的）花蕾

•亲本植株的生长条件、材料的低温预处理以及接种密度等对诱导成功率均有一定影响

•材料的选用：选择花药时，一般要通过镜检来确定其中U勺花粉与否处在合适"勺发育期。确定花粉

发育时期的最常用口勺措施是醋酸洋红法.不过，某些植物的花粉细胞核不易着色，需采用焙花青-

络桃法，这种措施能将花粉细胞核染成蓝黑色

­材料的J消毒

•接种和培养：灭菌后日勺花蕾，要在无菌条件卜.除去萼片和花瓣，并立即将花药接种到培养基上。

在剥离花药时，要尽量丕损伤花药（否则接种后轻易从受伤部位长生愈伤组织），同步还要:彻底清

除花丝,由于与花丝相连的I花药不利于愈伤组织或胚状体的形成，一般每瓶接种花药7〜10个，培

养温度控制在25c左右,不需要光照.幼小植株形成后才需要光照.一股通过20〜30天培养后，会发

现花药无裂，长出愈伤组织或形成胚状体。将愈伤组织及时转移到分化培养基上，以便深入分化出

再生植株。假如花药开裂释放出胚状体，则一种花药内就会产生大量幼小植株，必须在花药开裂后

尽快将幼小植株分开，分别移植到新的培养基上，否则这些植株将很难分开。还需要对培养出来H勺

植株做深入的鉴定和筛选。

植物组织培养技术与花药培养技术日勺相似之处是：培养基配制措施、无菌技术及接种操作等基本相

似。两者H勺不一样之处在于：花药培养的选材非常重要，需事先探索时期合适的花蕾；花药裂开后

释放出的愈伤组织或胚状体也要及时更换培养基；花药培养对培养基配方H勺规定更为严格。这些都

使花药培养的难度大为增长。

名麴ZDNA上曙&场技术

送跄一DNA的粗成躯刍整定

•提取DNA的溶解性原理包括哪些方面？

DNA在不•样浓度NaCl溶液中溶解度不•样：DNA不溶于酒精。

•DNA在不一样浓度NaCl溶液中溶解度有何特点？要使DNA溶解，需要使用什么

浓度？要使DNA析出，又需要使用什么浓度？

在0.14mol/L时溶解度及小;较高浓度可使DNA溶解；0.14mol/L可使DNA析

出。

•在溶解细胞中口勺DNA时，人们一般选用2mol/LNaCl溶液；将DNA分子析出的措施是向潘也四

“勺NaCl溶液中缓慢注入蒸储水，以稀释NaCl溶液。酒精是一种常用有机溶剂，但DNA却不能溶于

酒精（尤其是95%冷却酒精），但细胞中蛋白质可溶于酒精。

从理论上分析，预冷日勺乙醇溶液具有如下长处。一是克制核酸水解酶活性，防止DNA降解：二是减

少分子运动，易于形成沉淀析出；三是低温有助于增长DNA分子柔韧性，减少断裂。

・采用DNA不溶于酒精的原理,可以到达什么目的?

将DNA和蛋白质深入分离。

•提取DNA还可以运用DNA对酶、高温和洗涤剂的耐受性原理。运用该原理时，应选用怎样的能和

怎样的温度值？

蛋白酶，由于酶具有专一性，蛋白酶只水解蛋白质而不会对DNA产生影响。温度值为60〜

80℃,由于该温度值蛋白质变性沉淀，而DNA不会变性。

补充：DNAR勺变性是指D"分子在高温下解螺旋，其温度在80C以上，如在PCR技术中DNA变

性温度在95℃。

•洗涤剂在提取DNA中有何作用？

洗涤剂将细胞膜上的蛋白质，从而瓦解细胞