2024高中生物专题2微生物的培养与应用课题1微生物的实验室培养第2课时实验操作及实验结果教案新人教版选修1

PAGE9-第2课时试验操作及试验结果[学习目标]1.学会培育基的制备方法。2.驾驭大肠杆菌的纯化方法。3.了解菌种保藏所用的方法。学问点一制备牛肉膏蛋白胨固体培育基学问梳理1.操作步骤2．倒平板(1)在火焰旁右手拿锥形瓶，左手eq\o(□,\s\up3(01))拔出棉塞。(2)右手拿锥形瓶，使锥形瓶的瓶口快速通过eq\o(□,\s\up3(02))火焰。(3)左手将培育皿打开一条缝隙，右手将培育基(约10～20mL)倒入培育皿，左手立即盖上eq\o(□,\s\up3(03))皿盖。(4)待平板冷却凝固后，将平板eq\o(□,\s\up3(04))倒过来放置，使皿盖在下、皿底在上。1.培育基灭菌后，须要冷却到50℃左右时，才能用来倒平板。你用什么方法来估计培育基的温度？提示：可以用手触摸盛有培育基的锥形瓶，感觉锥形瓶的温度下降到刚刚不烫手时，就可以进行倒平板了。2．为什么须要使锥形瓶的瓶口通过火焰？提示：通过灼烧灭菌，防止瓶口的微生物污染培育基。典题分析题型一培育基的制备过程分析[例1]下列关于制备牛肉膏蛋白胨固体培育基的叙述，错误的是()A．操作依次为计算、称量、溶化、倒平板、灭菌B．将称好的牛肉膏连同称量纸一同放入烧杯C．待培育基冷却至50℃左右时倒平板D．待平板冷却凝固后将平板倒过来放置解题分析制备牛肉膏蛋白胨固体培育基的步骤是计算、称量、溶化、灭菌、倒平板，其依次不能颠倒，A错误；牛肉膏比较黏稠，所以称好后需将称量纸一同放入烧杯中加热，当牛肉膏溶化并与称量纸分别后，用玻璃棒取出称量纸，B正确；待培育基冷却至50℃左右，起先倒平板，C正确；平板冷却凝固后倒置，D正确。答案A学问拓展1培育基灭菌后，需冷却至50℃左右时才能倒平板，温度过高会烫手，温度过低培育基又会凝固。2整个操作在酒精灯火焰旁进行，避开四周环境中微生物的污染。3平板冷凝后，皿盖上会凝聚水珠，将平板倒置，可防止皿盖上的水珠落入培育基，造成污染。4倒平板时不要将培育基溅在皿盖与皿底之间，否则此培育基不能用来培育微生物，因为空气中的微生物可能在皿盖与皿底之间的培育基上滋生。

学问点二纯化大肠杆菌学问梳理1.菌落的概念由一个微生物细胞繁殖而来的肉眼可见的eq\o(□,\s\up3(01))子细胞群体，就是菌落。2．纯化大肠杆菌的原理在培育基上得到由eq\o(□,\s\up3(01))一个细胞繁殖而来的肉眼可见的eq\o(□,\s\up3(02))菌落，即获得较纯的菌种。3．微生物接种常用的方法(1)平板划线法①概念：通过接种环在琼脂固体培育基表面eq\o(□,\s\up3(01))连续划线的操作，将聚集的菌种逐步稀释分散到培育基的表面。②操作步骤③留意事项a．第一次划线及每次划线之前都需eq\o(□,\s\up3(09))灼烧接种环灭菌，划线操作结束仍需灼烧接种环。第一次划线前灼烧：杀死接种环上eq\o(□,\s\up3(10))原有的微生物。每次划线之前灼烧的目的：杀死eq\o(□,\s\up3(11))上次划线后接种环上残留的菌种，使下次划线的菌种干脆来源于上次划线的末端。划线结束灼烧的目的：杀死接种环上残存的菌种，避开细菌污染eq\o(□,\s\up3(12))环境和感染eq\o(□,\s\up3(13))操作者。b．灼烧接种环之后，要等其eq\o(□,\s\up3(14))冷却后才能伸入菌液，以免温度太高杀死菌种。c．在做其次次以及其后的划线操作时，总是从上一次划线的eq\o(□,\s\up3(15))末端起先划线，这样才能使细菌的数目随着划线次数的增加而逐步削减，最终得到由单个细菌繁殖而来的菌落。d．划线时最终一区域不要与eq\o(□,\s\up3(16))第一区域相连。e．划线用力要大小适当，防止用力过大将eq\o(□,\s\up3(17))培育基划破。(2)稀释涂布平板法①概念：将菌液进行一系列的梯度稀释，然后将不同稀释度的菌液分别涂布到eq\o(□,\s\up3(18))琼脂固体培育基的表面，进行培育。当稀释倍数足够高时，即可获得单个细菌形成的eq\o(□,\s\up3(19))菌落。②操作过程包括eq\o(□,\s\up3(20))系列稀释和eq\o(□,\s\up3(21))涂布平板。③操作步骤A．系列稀释操作步骤：a．将分别盛有9mL水的6支试管灭菌，并按101～106的依次编号。b．用移液管吸取1mL培育的菌液，注入101倍稀释的试管中。用手指轻压移液管上的橡皮头，吹吸三次，使eq\o(□,\s\up3(22))菌液与水充分混匀。c．从101倍稀释的试管中吸取1mL稀释液，注入102倍稀释的试管中，重复第2步的混匀操作。依次类推，直到完成最终一支试管的稀释。留意：移液管须要经过eq\o(□,\s\up3(23))灭菌。操作时，试管口和移液管应在离火焰1～2cm处。B．涂布平板操作步骤：a．涂布器消毒：将eq\o(□,\s\up3(24))涂布器浸在盛有eq\o(□,\s\up3(25))酒精的烧杯中消毒。b．取菌液：取少量菌液(不超过0.1mL)，滴加到培育基表面。c．涂布器灭菌：将沾有少量酒精的涂布器在eq\o(□,\s\up3(26))火焰上引燃，待酒精燃尽后，冷却8～10s。d．涂布平板：用涂布器将菌液匀称地涂布在培育基表面。涂布时可转动培育皿，使菌液分布匀称。④留意事项：a.消毒时将涂布器末端浸在盛有eq\o(□,\s\up3(27))体积分数为70%的酒精的烧杯中。取出时，要让多余的酒精在烧杯中eq\o(□,\s\up3(28))滴尽，然后将沾有少量酒精的涂布器在火焰上引燃。b．操作中肯定要留意防火！不要将eq\o(□,\s\up3(29))过热的涂布器放在盛有酒精的烧杯中，以免引燃其中的酒精。4．接种胜利的标准假如培育基上生长的菌落的颜色、形态、大小基本一样，并符合大肠杆菌菌落的特点，则说明接种操作是eq\o(□,\s\up3(01))符合要求的；假如培育基上出现了其他菌落，则说明接种过程中，无菌操作还未达到要求，试验eq\o(□,\s\up3(02))失败，须要分析缘由，再次接种。5．菌种的保藏(1)目的：保持菌种的纯净，降低微生物的新陈代谢速率，延缓菌种苍老。(2)方法比较项目临时保藏甘油管藏适用范围eq\o(□,\s\up3(01))频繁运用的菌种eq\o(□,\s\up3(02))长期保存的菌种培育基eq\o(□,\s\up3(03))固体斜面培育基eq\o(□,\s\up3(04))液体培育基保藏温度4℃－20℃详细方法接种到eq\o(□,\s\up3(05))固体斜面培育基上→相宜温度下培育→eq\o(□,\s\up3(06))4_℃冰箱中保藏甘油瓶中装入甘油后eq\o(□,\s\up3(07))灭菌→将菌液转移至甘油瓶中→混匀后冷冻箱中保存优缺点甘油管藏法可以长时间保存菌种，临时保藏法保存时间短，菌种简洁被污染或产生变异1.在纯化大肠杆菌操作中，如何验证培育基灭菌是否彻底？提示：将接种后的培育基和一个未接种的培育基，都放在37℃恒温箱中培育，视察并记录结果。2．假如你在培育基上视察到了不同形态的菌落，你认为是由什么缘由造成的？提示：培育基灭菌不彻底或接种过程中感染了杂菌。3．稀释倍数和划线次数是两种接种方法的关键，确定稀释倍数和划线次数的因素是什么？提示：菌液的浓度。典题分析题型二正确区分平板划线法和稀释涂布平板法[例2]下面四种菌落分布图中，不行能是用稀释涂布平板法得到的是()解题分析对微生物的分别常用稀释涂布平板法和平板划线法进行接种，将不同稀释度的菌液用涂布器分别涂布到琼脂固体培育基的表面进行培育，这一过程是稀释涂布平板法。据图分析：A、B、C属于稀释涂布平板法接种得到的平板，D平板有明显的划线痕迹，是平板划线法接种得到的平板。答案D[例3]下列关于微生物接种的描述，正确的是()A．平板划线法只用于固体培育基的接种，而稀释涂布平板法只用于液体培育基的接种B．平板划线法的操作相对简洁一些C．利用平板划线法不能得到单菌落，而利用稀释涂布平板法能得到单菌落D．平板划线法所用的接种工具不须要灭菌，而稀释涂布平板法所用的接种工具须要灭菌解题分析这两种方法都用于固体培育基的接种，都能用于形成单菌落，接种工具都要进行严格灭菌处理。答案B题后归纳比较平板划线法和稀释涂布平板法的异同点题型三正确理解大肠杆菌纯化中的“多次划线”与“充分稀释”[例4]平板划线法和稀释涂布平板法是常用的两种接种方法。下列相关叙述错误的是()A．平板划线法要求在培育基表面连续划线，且除第一次划线外，每一次划线的起点都是上一次划线的末端B．除第一次划线前须要将接种环灼烧灭菌外，以后的划线可以不用灭菌即可划线C．假如菌液原来浓度不高，则可以适当降低稀释倍数D．“充分稀释”和“连续划线”的目的都是获得由单一细胞繁殖而成的菌落解题分析在平板划线法中，连续划线的目的就是使菌种的浓度降低，所以除第一次划线外，以后的每次划线的起点都是上一次划线的末端，A正确；将接种环灼烧灭菌并冷却后沾取菌液进行第一次划线，以后的每一次划线前都要将接种环进行灼烧灭菌，B错误；稀释倍数要随菌液的浓度而定，假如菌液的浓度太大，则须要更高的稀释倍数，假如菌液原来浓度不高，就可以适当降低稀释的倍数，C正确；稀释涂布平板法中的“充分稀释”及平板划线法中的“连续划线”，目的都是获得由单一细胞繁殖而成的菌落，D正确。答案B题后归纳平板划线法中的主要操作要领是“多次划线”，稀释涂布平板法中的主要操作要领是“充分稀释”，二者虽然操作方法不同，但目的是一样的，即获得由单个细胞增殖而成的菌落。假如平板划线法中的划线次数太少或稀释涂布平板法中的稀释倍数不够，则得到的可能是由多个细胞增殖而来的子细胞群体，其中还可能掺杂着其他杂菌，达不到纯化的目的。课堂小结当堂检测——查漏补缺巩固提升1．制备牛肉膏蛋白胨固体培育基的步骤是()A．计算、称量、倒平板、溶化、灭菌B．计算、称量、溶化、倒平板、灭菌C．计算、称量、溶化、灭菌、倒平板D．计算、称量、灭菌、溶化、倒平板答案C解析制备牛肉膏蛋白胨固体培育基，应先依据须要计算各成分用量，然后称量、溶化、灭菌、倒平板，C正确。2．纯化大肠杆菌的步骤正确的是()A．样品稀释→涂布法分别→培育成单菌落B．样品稀释→培育成单菌落→划线或涂布法分别C．样品稀释→划线或涂布→分别→培育成单菌落D．样品稀释→划线→涂布→分别→培育成单菌落答案A解析微生物的分别与纯化主要有平板划线法和稀释涂布平板法，其中稀释涂布平板法包括样品稀释、涂布及培育三个基本步骤，其中划线或涂布法是对微生物进行分别，培育是将分别后的菌种培育成单个菌落。3．现有菌液10mL，按下图进行系列稀释，在最终一个试管中测得细菌数为20个，则未稀释前的试管中有细菌()A．600个B．1200个C．2×107个D．2×106个答案C解析从本题的图中可看出，每次都是稀释10倍，总共稀释6次，即稀释106倍，最终一个试管为20个，即原来菌液中应当有细菌2×107个，C正确。4．将平板倒置的目的是()A．接种时再拿起来便利B．在皿底上标记日期等便利C．正着放置简洁破裂D．防止皿盖上的冷凝水落入培育基造成污染答案D解析平板倒置主要是防止皿盖上的水珠落入培育基造成污染，D正确。5．为了获得纯度高的大肠杆菌，须要对大肠杆菌进行培育和分别。培育大肠杆菌一般用牛肉膏蛋白胨固体培育基。(1)培育大肠杆菌，配制固体培育基的基本步骤：计算→称量→________→________→倒平板。(2)称量时，由于牛肉膏比较黏稠，可以用________挑取，放在__________上称量。由于牛肉膏和蛋白胨____________，称量时动作要快速，称量后要刚好盖上瓶盖。(3)在牛肉膏蛋白胨固体培育基上的大肠杆菌能生长，说明培育基含有________________________等大肠杆菌生长所需的养分要素。(4)微生物纯化培育可以通过多种接种方法如______________和______________________等，使大肠杆菌在固体培育基上形成单个________，从而获得纯菌株。答案(1)溶化灭菌(2)玻璃棒称量纸简洁吸潮(3)碳