DB31∕T 1150-2019 厚叶岩白菜组培生产技术规范

厚叶岩白菜组培生产技术规范TechnicalspecificationfortissuecultureBergeniacrassifolia(L.)F2019-03-22发布2019-07-01实施IDB31/T1150—2019 12规范性引用文件 13术语和定义 14前期准备 24.1水质要求 24.2容器清洗 24.3消毒液配制 24.4母液配制 24.5培养基配制 24.6废弃培养基处理 35无菌接种 35.1接种准备 35.2无菌操作 36外植体处理 36.1外植体采集和修切 36.2外植体消毒 47组培苗培养 47.1培养条件 47.2初代培养 47.3增殖培养 47.4壮苗培养 47.5生根培养 4 58移栽驯化 58.1移栽规格 58.2温室驯化 58.2.1温室移栽 58.2.2温室养护 58.2.3病虫害防治 69容器苗培育 69.1基质配制 69.2养护管理 610种苗出圃 610.1质量规格 6Ⅱ10.2种苗检验 10.2.2检验规则 10.3种苗包装 10.4种苗运输 8附录A(资料性附录)厚叶岩白菜组培生产培养基药品名录及配方 附录B(资料性附录)厚叶岩白菜组培苗病虫害主要危害特征及防治 附录C(资料性附录)厚叶岩白菜种苗质量检验证书格式式样 Ⅲ本标准按照GB/T1.1-2009给出的规则起草。本标准由上海市绿化和市容管理局提出并组织实施。本标准由上海市园林绿化标准化技术委员会归口。本标准起草单位：上海市园林科学规划研究院、上海上房园艺有限公司。付瑞、范连社。1本标准规定了厚叶岩白菜[Bergeniacrassifolia(L.)Fritsch]组培生产的前期准备、无菌接种、外本标准适用于厚叶岩白菜的组培生产。2规范性引用文件下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本(包括所有的修改单)适用于本文件。GB5749生活饮用水卫生标准GB6000—1999主要造林树种苗木质量分级GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法缓释肥料林业植物及其产品调运检疫规程NY/T2253—2012菠萝组培苗生产技术规程花卉种苗组培快繁技术规程下列术语和定义适用于本文件。通过植物组织培养方式形成的再生植株。外植体从母株上分离下来的第一次培养。组培苗自然直立放置，生根处最上部至最高叶片顶部的垂直距离。组培苗生根处至根尖的长度为根长，逐条测定各根根长，累计相加为总根长。基质表面至最高叶片顶部的垂直距离。2生长在固体培养基中的组培苗，凝固剂一般为琼脂。4前期准备本标准中清洗容器和配制消毒液的水质应符合GB5749规定。新的或用过的容器，放入洗洁精或洗衣粉溶液中，浸泡5min~10min后再清洗；污染的容器应先灭菌再清洗，灭菌按NY/T2306—2013中8.1.2要求操作。清洗完，容器内外壁水膜均一，无明显污本标准所用消毒液按表1规定比例配制。表1配制消毒液消毒液类型消毒液浓度%定容"乙醇溶液高锰酸钾溶液使用无菌水定容，无菌水由自来水按NY/T2306-2013中8.1.2要求灭菌制成。乙醇溶液由纯度99.9%的无水乙醇配制。e氯化汞用精密度至少为千分之一的电子天平称取。4.4.2植物生长调节剂母液浓度宜为0.1mg/L~2mg/L,维生素C母液浓度宜为0.5mg/L~5.0mg/L,用棕色瓶盛装，1℃~2℃避光保存，储存时间不超过180d。4.4.3母液用蒸馏水配制，蒸馏水符合GB/T6682的规定并按NY/T2306-2013中8.1.2要求灭菌；配制过程按NY/T2253—2012附录B规定；母液容器上应贴标签，注明名称、浓度、配制日期和配制人；发现标签不明或有沉淀或微生物等藻类生长，应停止使用。本标准所用培养基分为初代培养基、增殖培养基、壮苗培养基和生根培养基四种，配方参见表A.1。配制培养基按以下步骤操作：3a)摇匀母液；b)按设计的配方吸取母液、称量MS培养基干粉或1/2MS培养基干粉、蔗糖，依次加入容器中，最后用蒸馏水定容；c)用1mol/L盐酸和1mol/L氢氧化钾调pH至5.7～5.9之间；d)按5g/L～8g/L浓度加入琼脂，加热沸腾至琼脂完全溶解；e)稍加冷却，培养基温度在25℃~45℃之间分装完，各类培养基分装高度见表2;f)封好瓶口，做好标记，配制当天按NY/T2306—2013中8.1.2要求灭菌；g)灭菌后的培养基宜放置3d以上再使用，存储时间不超过20d。表A.2。废弃或用过的培养基不应直接丢弃或排入水体，应收集晒干后作肥料使用。5无菌接种5.1.1工作间应清洁干燥。工作间地面和墙面每20d~40d用浓度为10%～20%苯扎溴铵溶液擦拭，每天开启风机6h～8h。5.1.2工作人员应衣着整洁。工作人员着正规工作服，戴手套和口罩，操作前用抑菌洗手液洗手。5.1.3工作台使用应规范。每次使用超净工作台前，台面、四周和外壳用浓度为10%～20%苯扎溴铵溶液擦干净；开启工作台紫外灯及风机20min~30min后再使用；一个超净工作台配备2套~4套接种器械，过滤膜20d~40d清洁一次，半年更换新的过滤膜。无菌操作接种时按以下步骤：a)用酒精灯外焰灼烧接种器械30s~60s或插入280℃~300℃的电热灭菌器中30s以上；b)使用冷却后的无菌器械在无菌操作盘中切割组培苗，转入新鲜培养基后及时封口；d)使用完，关闭超净工作台和电热灭菌器，熄灭酒精灯；f)组培苗送入培养室，按种类摆放整齐。6外植体处理6.1外植体采集和修切外植体采集和修切按以下步骤操作：4a)修切好的外植体在2h~5h内，先用浓度为5%～15%洗洁精溶液浸泡外植体2min~b)在超净工作台上，先用浓度为72%~75%的乙醇溶液浸泡外植体30s~60s,再用加有2滴~4滴聚山梨酯-80的0.1%～0.2%的氯化汞溶液浸泡15min～30min,无菌水冲洗3次~5次，每次1min~2min;——培养温度为22℃~26℃,培养周期为25d～35d;—培养容器高度为6cm～8cm,底部直径为4cm～6cm;切分为包含2个~4个组培苗的丛芽或单芽，转入增殖培养基，每瓶均匀分布6丛~10丛，光培养。5 培养至30d未生根的组培苗，重新切割，再次转人生根培养基；培养至30d已生根但未达到移栽标准的，转入无激案1/2MS培养基中培养，直至达到移栽标准； 每瓶6个~8个组培苗。摆放、检查和更新组培苗应符合以下要求：——污染组培苗不得堆放于培养室内，按NY/T2306—2013中8.1.2要求灭菌，再按4.2要求清洗培养容器；——从外植体开始，培养时间超过2年或培养代数超过20代时，重新取样培养。8移栽驯化移栽时组培苗质量规格应符合以下要求：--组培苗高2cm~3cm,具有3片~5片叶片，叶色鲜绿光亮；-——生根3条~6条，平均组培苗根长0.5cm,总根长为1.5cm～3.0cm。8.2温室驯化移栽季节宜在4月至6月或9月至11月，组培苗出瓶1d~3d内种植完毕，移栽按以下步骤操作：a)组培苗置于自然环境中4d~7d,移栽前1d~3d打开培养容器封口；b)用清水洗净黏附于根部的培养基，用500倍~600倍托布津水溶液浸泡根部10s~30s;c)移栽到草炭、珍珠岩和腐殖质比例为2:1:1的混合基质中，采用72孔~76孔穴盘，一孔一苗；d)种植完叶面喷雾状水，浇透基质放入苗床，苗床上面搭60cm~100cm高塑料薄膜覆盖的温室养护应符合以下要求：——移栽15d内，保持种苗叶面湿润，相对湿度控制在90%～95%之间；移栽15d后，开始揭开苗床上的塑料拱棚，移栽时间与每天揭开塑料拱棚时长见表3,30d后完全揭开拱棚并按干透湿透原则浇水；——移栽30d后，每周喷施浓度0.1g/L的硫酸钾复合肥1次；——移栽初期光照强度小于20001x,后期逐渐加强光照，最终稳定为55%~75%的自然光照6表3移裁时间与揭开时长揭开时长/h移栽时间指移栽后多少天。揭开时长指每天揭开塑料拱棚的时间。8.2.3.1种苗常规性预防按以下要求：——移栽初期，每14d~18d喷施一次“大生80%”原液稀释(450倍～600倍),两个月后每25d~35d喷施一次；——冬季每25d～35d施用0.1g/m³的烟雾剂一次，温室严格密封；——夏季每25d~35d施用“58%雷多米尔”原液稀释(600倍～800倍)一次。8.2.3.2种苗常见的病虫害主要危害特征及防治方法参见附录B。9容器苗培育穴盘苗移至容器中培育时，种苗规格应符合表4规定。选用草炭、珍珠岩、黄心土和粗木屑按4:2:1:3(体积比)配制成的混合基质，并按2kg/m³~3kg/m³标准添加缓释肥，缓释肥应符合GB/T23348—2009的规定。上钵前1d~2d,用0.1%～0.2%高锰酸钾溶液淋透基质。容器苗营养钵规格宜为10cm×10cm,容器苗的移栽季节、水肥管理及病虫害防治，按8.2.1、8.2.2和8.2.3。种苗出圃时，有琼脂苗、穴盘苗和容器苗三种类型，各类型种苗质量规格应符合表4规定。表4种苗规格叶片数目片叶片颜色翠绿，层次分明；同一批次95%以上的种苗，高度、冠幅一致5注：琼脂苗高度指组培苗苗高；穴盘苗、容器苗高度指苗高。"琼脂苗应无污染及畸形，3条以上不定根，色白健壮，根处无愈伤组穴盘苗和容器苗根系应发达，无病虫害。7抽样时应符合以下要求：——种苗检验在一个苗批内进行，采取随机抽样的方法；——成箱种苗先按5%～10%的比例抽样箱，再在每个样箱内按5%～10%的比例抽样株；——不成箱种苗直接按5%～10%的比例抽取样株。检验时用卷尺或直尺测量，读数精确到0.1cm并按以下要求操作：——测量组培苗苗高时，自生根处最上部沿垂直方向量至最高叶片顶部；测量穴盘苗和容器苗苗高时，自育苗基质表面沿垂直方向量至最高叶片顶部。——根系长度自种苗生根处量至根尖，逐条测定各根根长，——冠幅以苗芯为正中，量取植株的冠幅，如两个方向冠幅相差较大，垂直交叉测量两次取平均值。——苗木检测工作应在背阴避风处进行。检验规则按GB6000—1999中5.1~5.4规定执行，检验结束后，按附录C填写种苗质量检验证书。凡出圃的种苗，均应附种苗质量检验证书，向外省或国外运输的种苗需经过检疫并附检疫报检单，检疫报检单应符合GB/T23473-2009中附录A规定。种苗包装应符合以下要求：起苗前2d~3d浇足水分，包装前不再浇水；各类型裸根苗，先用较小塑料容器或报纸包装，再整齐放入包装纸箱内；包装纸箱大小宜为60cm×30cm×30cm;包装后每箱号和注意事项等。琼脂苗包装可分为保留琼脂包装和无琼脂包装两种形式，包装方式分别参照NY/T2306—2013中14.1.2和14.1.3的要求。其余类型种苗包装方式和包装数量应符合表5规定。穴盘苗整盘包装时，每盘的种苗数。种苗使用较小塑料容器或报纸包装的数量。8种苗宜在3月至7月，9月至11月进行运输，包装纸箱内有空隙的地方，填充好报纸、泡沫或塑料等；纸箱上打3个~6个直径1cm~3cm的小洞；装车时整齐摆放在运输车中，纸箱层高为3层~6层；用厢式货车运输，运输途中温度保持15℃~25℃;3d~7d内到达目的地。9(资料性附录)厚叶岩白菜组培生产培养基药品名录及配方表A.1给出了厚叶岩白菜组培生产培养基配方，表A.2给出了厚叶岩白菜组培生产培养基药品名录。表A.1厚叶岩白菜组培生产培养基配方单位为毫克每升药品类别中文名称磷酸二氢钾硝酸钾碘化钾乙二胺四乙酸二钠有机质2222糖防褐变剂 一一吲哚丁酸一 表A.2厚叶岩白菜组培生产培养基药品名录药品类别中文名称硝酸钾乙二胺四乙酸二钠有机质糖防褐变剂吲哚丁酸注：6-苄氨基腺嘌呤、萘乙酸、吲哚丁酸通常分别缩写为6-BA、NAA、IBA.(资料性附录)厚叶岩白菜组培苗病虫害主要危害特征及防治表B.1给出了厚叶岩白菜组培苗病虫害主要特征及防治方法。表B.1厚叶岩白菜组培苗病虫害主要危害特征及防治防治方法多分布于叶背面，常见于花期及室内盆栽苗发病初期，用50%～70%的艾美乐原液稀释(3000倍～5000倍)或10%～20%的吡虫啉原液稀释(800倍~1000倍)喷雾锈斑病发病初期，用10%～20%的粉锈宁原液稀释(1500倍~2500倍)或10%～12.5%烯唑醇原液稀释(2000倍～3000倍)喷雾心腐病原液稀释(800倍～1000倍),加65%～75%百菌清可湿性粉剂原液稀释(600倍～800倍),(资料性附录)厚叶岩白菜种苗质量检验证书格式式样表C.1给出了厚叶岩白菜种苗质量检验证书格式式样和内容。表C.1厚叶岩白菜种苗质量检验证书格式式样编号起苗日期发苗日期_母株来源检验人：负责人：[1]GB3100—1993国际单位制及其应用[2]GB3101有关量、单位和符号的一般原则[3]GB3102.1空间和时间的[4]GB3102.10—1993核反应和电离辐射的量和单位[5]GB/T