T-ZHCA 024-2023 化妆品中 23 种兴奋剂含量的测定 高效液相色谱-串联质谱法

ICS71.100.70CCSY42团体标准T/ZHCA024—2023化妆品中23种兴奋剂含量的测定高效液相色谱-串联质谱法Determinationof23kindsofstimulantsincosmetics—Highperformanceliquid2023-××-××发布浙江省健康产品化妆品行业协会IT/ZHCA024—2023本文件按照GB/T1.1—2020《标准化工作导则第1部分:标准化文件的结构和起草规则》的规定起草。请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别专利的责任。本文件由杭州宜格化妆品有限公司提出。本文件由浙江省健康产品化妆品行业协会归口。本文件起草单位:杭州宜格化妆品有限公司、毛戈平化妆品股份有限公司、浙江方圆检测集团股份有限公司、杭州布诗品牌科技有限公司、浙江公正检验中心有限公司。1T/ZHCA024—2023化妆品中23种兴奋剂含量的测定高效液相色谱-串联质谱法1范围本文件规定了高效液相色谱-串联质谱法测定化妆品中23种兴奋剂含量的原理、试剂和材料、仪器和设备、分析步骤、检出限和定量限、允许差、回收率和精密度等。本文件适用于膏霜乳液类、液态水基类、液态油基类、面膜类化妆品中23种兴奋剂的测定。2规范性引用文件下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中,注日期的引用文件,仅该日期对应的版本适用于本文件;不注日期的引用文件,其最新版本(包括所有的修改单)适用于本文件。GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法3术语和定义本文件没有需要界定的术语和定义。4原理试样经甲醇或50%甲醇水溶液超声提取、离心,经0.22μm滤膜过滤后,用高效液相色谱仪分离,质谱检测器检测。根据保留时间和特征离子对的相对丰度比定性,定量离子对色谱峰面积定量,以基质标准曲线法计算含量。5试剂和材料5.1试剂除另有规定外,本方法所用试剂均为分析纯或以上规格,水为GB/T6682规定的一级水。5.1.1甲醇:色谱纯。5.1.2乙腈:色谱纯。5.1.3正己烷:色谱纯。5.1.4乙酸:色谱纯。5.1.50.1%乙酸水溶液:移取1mL乙酸(5.1.4)于1L容量瓶中,用水稀释并定容至刻度。5.1.650%甲醇水溶液:取甲醇(5.1.1)、水按1:1的体积比混合,摇匀。5.2材料滤膜:孔径为0.22μm,材质为聚四氟乙烯滤膜。2T/ZHCA024—20235.3标准物质纯度应大于95%,物质的中文名称、英文名称、CAS号及分子式见表A.1。5.4标准溶液的配制5.4.1标准储备溶液分别称取各标准物质(5.3)10mg(精确到0.0001g)置于10mL棕色容量瓶中,加甲醇(5.1.1)使溶解并定容至刻度,配制成浓度为1000mg/L的标准储备溶液,于—18℃避光保存。5.4.2混合标准储备溶液分别移取标准储备溶液(5.4.1)适量于同一10mL棕色容量瓶中,用甲醇(5.1.1)逐级稀释,配制成浓度为1mg/L的混合标准储备溶液,于—18℃避光保存。5.4.3筛查用混合标准溶液取适量体积的混合标准储备溶液(5.4.2)于10mL棕色容量瓶中,用50%甲醇水溶液(5.1.6)稀释成各待测组分浓度为2.0μg/L的筛查用混合标准溶液,筛查用混合标准溶液应现配现用。5.4.4基质标准工作溶液取与待测样品基质类型相同的空白样品5份于10mL棕色容量瓶中(0.2g/份),分别加入不同体积的混合标准溶液(5.4.2),按照样品处理操作(7.1)步骤处理,配制成各待测组分浓度依次为2.0μg/L、5.0μg/L、10μg/L、20μg/L、40μg/L的系列工作溶液。6仪器和设备6.1高效液相色谱-三重四极杆串联质谱仪,配有电喷雾离子源(ESI)。6.2分析天平:感量为0.0001g和0.00001g。6.3离心机:转速不低于10000r/min,可控温至4℃。6.4超声波清洗器。6.5涡旋振荡器。7分析步骤7.1样品处理7.1.1膏霜乳液类、液态水基类、面膜类样品称取0.2g(精确到0.0001g)样品于15mL塑料离心管中,加入5mL甲醇(5.1.1),涡旋混匀,超声提取20min,在4℃下以10000r/min离心10min。吸取上清液至10mL容量瓶中,加水定容至刻度,混匀,在4℃下以10000r/min离心10min,吸取上清液过0.22μm滤膜,滤液作为待测溶液。注:对于需要制备的特殊样品,如面膜类,需按产品说明书制备后再取样进行处理。7.1.2液态油基类样品称取0.2g(精确至0.0001g)样品于15mL塑料离心管中,加入3mL正己烷(5.1.4),涡旋直至样品分散,加入4mL50%甲醇水溶液(5.1.7),涡旋混匀,超声提取20min,在4℃下以10000r/min离心3T/ZHCA024—202310min。吸取下层清液至10mL容量瓶中,上层正己烷层用4mL50%甲醇水溶液(5.1.7)重复提取一次,合并两次提取液,加50%甲醇水溶液(5.1.7)定容至刻度,混匀,在4℃下以10000r/min离心10min,吸取上清液过0.22μm滤膜,滤液作为待测溶液。7.2测定7.2.1液相色谱参考条件由于不同设备存在差异,不能给出液相色谱仪的统一条件,以下条件经验证是适宜的:a)色谱柱:C18柱,3.0mm×150mm,2.5μm,或等效色谱柱;b)流动相:A相为0.1%乙酸水溶液(5.1.6),B相为乙腈(5.1.3),梯度洗脱条件见表1;c)流速:0.4mL/min;d)柱温:40℃;e)进样量:5μL。表1流动相梯度洗脱条件时间/min流动相A/%流动相B/%0982183862223466322983329834982359827.2.2质谱参考条件由于不同设备存在差异,不能给出质谱仪的统一条件,以下条件经验证是适宜的:a)电离方式:电喷雾电离,正负离子模式;b)喷雾电压:5500V/—4500V;c)雾化气(GS1):50psi;d)气帘气(CUR):35psi;e)辅助加热气(GS2):55psi;f)离子源温度:500℃;g)扫描模式:多反应监测(MRM)模式,23种兴奋剂的监测离子对及相关参数设定见表2。表223种兴奋剂的监测离子对及相关参数设定表序号化合物名称母离子m/≈子离子m/≈去簇电压V碰撞能量V1麻黄碱117.0*842684174T/ZHCA024—2023表223种兴奋剂的监测离子对及相关参数设定表(续)序号化合物名称母离子m/≈子离子m/≈去簇电压V碰撞能量V2去甲乌药碱272.1107.0*5031272.1255.150203士的宁335.2184.2*9050335.2156.290604可卡因304.2182.3*6028304.2150.160355泼尼松龙361.2343.2*8014361.2147.280346泼尼松359.2147.2*8035359.2341.280157氢化可的松363.2121.1*8031363.2105.080688可的松361.2163.2*8034361.2121.180479甲基泼尼松龙375.2339.2*6614375.2161.2662810倍他米松393.2355.2*8015393.2337.3801911地塞米松393.2373.4*8015393.2355.2801512倍氯米松409.2391.2*8015409.2279.3802913曲安奈德435.2339.2*8015435.2397.2801514氟尼缩松435.2339.1*8018435.2321.1801915群勃龙271.2253.2*8026271.2199.2803216地夫可特442.3124.1*8065442.3142.1804517睾酮289.297.1*11329289.2109.0113305T/ZHCA024—2023表223种兴奋剂的监测离子对及相关参数设定表(续)序号化合物名称母离子m/≈子离子m/≈去簇电压V碰撞能量V18孕三烯酮309.1241.1*12029309.1199.21204319布地奈德431.2413.2*8015431.2147.1804220甲睾酮303.2108.9*11030303.297.01102921雄酮291.2273.3*7013291.2255.0702122大麻酚309.1279.1*—120—40309.1222.1—120—5523Δ9-四氢大麻酚313.1245.1*—130—34313.1191.1—130—34注:*定量离子对。7.3定性测定取待测溶液与筛查用混合标准溶液(5.4.3)在相同分析条件下测定,样品中如呈现定量离子对和定性离子对的色谱峰,被测成分的特征离子峰保留时间与标准溶液对应的保留时间一致,且选择的定性离子的相对丰度比与相当浓度标准品溶液的定性离子的相对丰度比的最大偏差不超过表3规定的范围,则可判定样品中存在对应的兴奋剂成分。23种兴奋剂标准溶液的总离子流图及定量离子色谱图参见图B.1和图B.2。表3定性判定时离子相对丰度的最大允许偏差离子相对丰度kk>50%50%≥k>20%20%≥k>10%k≤10%允许的最大偏差±20%±25%±30%±50%7.4定量测定本文件采用外标校准曲线法定量测定。以23种兴奋剂的基质匹配标准工作溶液的浓度为横坐标,各自的定量离子的峰面积为纵坐标,绘制标准工作曲线,其线性相关系数应不小于0.99。所测样品中23种兴奋剂物质的响应值均在仪器的线性范围内,超过线性范围则应适当稀释后重新测定。7.5平行试验按照7.1~7.4对同一试样进行平行试验测定。7.6空白试验除不称取试样外,均按照7.1~7.4进行。6T/ZHCA024—20237.7结果计算试样中23种兴奋剂含量的计算按公式(1)进行:…………(1)式中:xi—试样中被测组分含量,单位为毫克每千克(mg/kg);ci—试样中被测组分峰面积对应的浓度,单位为微克每升(μg/L);c0—空白试样中被测组分的浓度,单位为微克每升(μg/L);V—试样定容体积,单位为毫升(mL);K—稀释倍数;m—试样质量,单位为克(g)。结果以两次平行测定结果的算术平均值表示,保留小数点后两位。8检出限和定量限当称样量为0.2g,定容体积为10mL时,本方法中23种兴奋剂成分的检出限均为0.03mg/kg,定量限均为0.1mg/kg。9允许差在重复条件下获得的两次独立测定结果的绝对差值不得超过算术平均值的15%。10回收率和精密度多家实验室验证回收率为70.5%~119.8%,相对标准偏差小于15%(n=6)。7T/ZHCA024—2023附录A(资料性)23种兴奋剂的标准物质信息23种兴奋剂的标准物质信息见表A.1。表A.123种兴奋剂的标准物质信息序号中文名称英文名称CAS号分子式1麻黄碱Ephedrine50-98-6C10H15NO2去甲乌药碱Higenamine5843-65-2C16H17NO33士的宁Strychnine57-24-9C21H22N2O24可卡因50-36-2C17H21NO45泼尼松龙prednisolone50-24-8C21H28O56泼尼松prednisone53-03-2C21H26O57氢化可的松Hydrocortisone50-23-7C21H30O58可的松Cortisone53-06-5C21H28O59甲基泼尼松龙Methylprednisolone83-43-2C22H30O510倍他米松Betamethasone378-44-9C22H29FO511地塞米松Dexamethasone50-02-2C22H29FO512倍氯米松Beclomethasone4419-39-0C22H29ClO513曲安奈德Triamcinoloneacetonide76-25-5C24H31FO614氟尼缩松Flunisolide77326-96-6C24H31FO615群勃龙Trenbolone10161-33-8C18H22O216地夫可特Deflazacort14484-47-0C23H29NO417睾酮Testosterone58-22-0C19H28O218孕三烯酮Gestrinone16320-04-0C21H24O219布地奈德51333-22-3C25H34O620甲睾酮Methyltestosterone58-18-4C20H30O221雄酮Androsterone53-41-8C19H30O222大麻酚Cannabinol521-35-7C21H26O223Δ9-四氢大麻酚delta-9-Tetrahydrocannabinol1972-08-3C21H30O28T/ZHCA024—2023附录B(资料性)种兴奋剂标准溶液总离子流图和定量离子提取附录B(资料性)种兴奋剂标准溶液总离子流图和定量离子提取色谱图图B1为23种兴奋剂标准溶液总离子流色谱图。种兴奋剂总离子流图(TIC)min~min放大总离子流图(TIC)18—布地奈德;松;10—倍他米松;11—地塞米松;12—倍氯米德;13—曲安奈勃龙;16—地夫可17—睾酮;标引序号说明:7—氢化可的松;8—可的松;9—甲基泼尼松龙;图B9T