CN988032678A 用于治疗肿瘤的含有鲨鱼软骨提取物和抗肿瘤剂的药物制备配方专利技术

[12]发明专利申请公开说明书[21]申请号98803267.8[43]公开日2000年4月12日11.一种具有抗肿瘤活性的软骨提取物在一种联合抗肿瘤治疗中的用途，对服用抗瘤剂量的该抗肿瘤剂的患者增强该抗肿瘤剂的抗瘤活性，并保护所述患者对抗由于服用该抗肿瘤剂带来的毒副作用的提高。2.权利要求1中所定义的用途，其中包括给上述患者服用一种上述抗肿瘤剂和软骨提取物的组合物。3.权利要求1中所定义的用途，其中包括给上述患者同时服用上述抗肿瘤剂和软骨提取物。4.权利要求1到4任一项中所定义的用途，其中所述的软骨提取物是一种鲨鱼软骨提取物，它是经过包含以下步骤的过程获得的：匀化并提取鲨鱼软骨直至获得平均粒度500μm的软骨颗粒和粗制液体提取物的混合物，分离所述液体提取物和软骨颗粒，并对该粗制液体提取物进行分级分离以回收分子量低于500千道尔顿的分子。5.权利要求1到4任一项中所定义的用途，其中所用的抗肿瘤剂的抗肿瘤剂量是其次佳剂量，所用的软骨提取物的量增强该抗肿瘤剂的功效，同时又不增加由于服用较高剂量的上述抗肿瘤剂所伴发的毒副作用，这一较高剂量的抗肿瘤剂产生与联合抗肿瘤疗法相等的抗肿瘤功效。6.权利要求1到5中任一项所定义的用途，其中所用的软骨提取物的量增强抗肿瘤功效，同时降低上述毒副作用。7.权利要求1到4任一项中所定义的用途，其中所用的抗肿瘤剂的抗肿瘤剂量是其最佳剂量，所用的软骨提取物的量增强该抗肿瘤剂的功效，同时又不增加由于服用上述抗肿瘤剂所伴发的毒副作用。8.权利要求1到4和7中任一项所定义的用途，其中所用的软骨提取物的量增强抗肿瘤功效，同时降低上述毒副作用。9.权利要求1到8中任一项所定义的用途，其中所述的抗肿瘤剂是从下列药物中选择的：白消安，噻替派，苯丁酸氮芥，环磷酰胺，雌二醇氮芥磷酸钠，异环磷酰胺，盐酸氮芥，美法仑，卡氮芥，罗氮芥，链脲霉素，卡铂，顺铂，氨甲喋呤钠，cladribine,巯基嘌呤，硫鸟嘌呤，阿2糖孢苷，羟基脲，柔红霉素，盐酸阿霉素，盐酸表柔比星，盐酸伊达比托泊苷，替尼泊苷，docetaxel,paclitaxel,硫酸长春花碱，硫酸长春新碱，硫酸长春地辛，酒石酸长春瑞宾，六甲蜜胺，安丫啶，I-门冬酰11.一种抗肿瘤组合物，其含有一种抗肿瘤量的抗肿瘤剂和一种抗肿瘤量12.一种用于抗肿瘤治疗的药盒，其含有两个组分，第一种组分含有抗瘤13.权利要求11或12的抗肿瘤组合物或药盒，其中所述的软骨提取物是一种鲨鱼软骨提取物，它是经过包含以下步骤的过程获得的：匀化并混合物，分离所述液体提取物和软骨颗粒，并对该粗制液体提取物进行14.权利要求11-13任一项所定义的组合物或药盒，其中所述的抗肿瘤剂是从下列药物中选择的：白消安，噻替派，苯丁酸氮芥，环磷酰胺，雌二醇氮芥磷酸钠，异环磷酰胺，盐酸氮芥，美法仑，卡氮芥，罗氮芥，链脲霉素，卡铂，顺铂，氨甲喋呤钠，cladribine,巯基嘌呤，硫鸟嘌呤，阿糖孢苷，羟基脲，柔红霉素，盐酸阿霉素，盐酸表柔比星，盐酸醌，依托泊苷，替尼泊苷，docetaxel,paclitaxel,硫酸长春花碱，硫酸长春新碱，硫酸长春地辛，酒石酸长春瑞宾，六甲蜜胺，安丫啶，I-酸(全反式视黄酸),marimastat,苏拉明，TNP470,沙利度胺或放射1用于治疗肿瘤的含有鲨鱼软骨提取物和抗肿瘤剂的药物组合物本发明的领域本发明涉及包括抗肿瘤剂和具有抗肿瘤活性的软骨提取物的抗肿瘤疗本发明的背景本受让人已经描述过软骨组织，即鲨鱼软骨组织提取物的生物学活性。软骨提取物的获取过程和该提取物本身的性质已经公开发表在国际公开W095/32722,W096/23512和W097/16197中。获取过程一般包括下列步骤：匀化并提取鲨鱼软骨直至获得平均粒度500μm的软骨颗粒和粗制液体提取物的混合物，分离所述液体提取物和软骨颗粒，并对该粗制液体提取物进行分级分离以回收分子量低于500千道尔顿的分子。这些过程可应用于对任何来源的软骨中的生物学活性物质的提取。鲨鱼软骨液体提取物已经过多方面的实验鉴定，包括抗血管生成，抗这些软骨提取物被认为可有效对抗肿瘤且对身体无害，因为在对口服给药的受试动物和肿瘤患者的观察中没有发现有与之直接相关的严重副作用。鲨鱼软骨液体提取物和任何其他具有同样的抗肿瘤活性的软骨提用于治疗癌症的药物有很多种，本发明所指的抗肿瘤剂包括如下列表1中所列出的药物，但并不仅限于这些药物。表1烷化剂烷基磺酸酯类白消安，2苯丁酸氮芥环磷酰胺雌二醇氮芥磷酸钠异环磷酰胺盐酸氮芥美法仑亚硝基脲类卡氮芥罗氮芥链脲霉素含铂化合物类顺铂抗代谢物叶酸类似物类氨甲喋呤钠嘌呤类似物类巯基嘌呤硫鸟嘌呤嘧啶类似物类脲衍生物类3细胞毒性抗生素柔红霉素盐酸阿霉素盐酸表柔比星盐酸伊达比星放线菌素D各种细胞毒性抗生素类硫酸博莱霉素丝裂霉素盐酸米托蒽醌植物生物碱和其他天然产物表鬼白毒素类依托泊苷长春碱及其类似物硫酸长春花碱硫酸长春新碱硫酸长春地辛酒石酸长春瑞宾各种其他抗肿瘤剂4六甲蜜胺安丫啶I-门冬酰胺酶达卡巴嗪磷酸氟达拉滨卟菲尔钠盐酸丙卡巴肼维A酸(全反式视黄酸),系统给药的抗血管生成剂类苏拉明沙利度胺，和这些抗肿瘤剂的剂量安全限度大多较低，因为它们的毒性较强，例如：在有效剂量范围内，它们就能产生剧烈的不适反应。医学界内一个公认的事实是，没有哪一种抗肿瘤疗法是完美无缺的。药理学家和肿瘤学家总是不得不在最大有效剂量和由此带来的毒副作用之间寻求折中方案。其结果是：对某一肿瘤的药物有效剂量可能是它的次最大剂量，以避免在任何可能的范围引起过于严重的毒副作用。因而不幸的是，相对于关注药物的最大功效而言，如何避免严重的毒副作用是经常被更为优先考虑的问题。我们所描述过的软骨提取物(文献同上)在体内是具有抗肿瘤增生活性的，这种活性看来可以归之于至少是直接抗肿瘤活性，抗溶胶原和抗血管生成活性的联合作用。该提取物具有公认的抗肿瘤活性并没有毒副作用。因为在这一领域目前的研究目的在于，获得一种具有接近100%功5效和0%的毒性的抗肿瘤疗法，故而不难理解那些接近这一黄金标准的抗肿瘤成分将极受欢迎。因此，需要有一种既有高的抗肿瘤功效，毒副作用又低的抗肿瘤疗法。本发明的概述本发明提供一种改进的抗肿瘤疗法，它包括服用一种有效对抗肿瘤量的抗肿瘤剂和一种有效对抗肿瘤量的软骨提取物。软骨提取物的总体益处是增加抗肿瘤功效和保护机体对抗毒副作用。本发明的一个目的就是提供一种具有抗肿瘤活性的软骨提取物在一种联合抗肿瘤治疗中的用途，用于对服用抗瘤剂量的该抗肿瘤剂的患者增强该抗肿瘤剂的抗瘤活性，并保护所述患者对抗由于服用该抗肿瘤剂带联合抗肿瘤疗法可以采取两种形式：1)给患者服用抗肿瘤剂和软骨提取物的组合物。2)给患者分别服用一种抗肿瘤剂和一种软骨提取物，而在服用时间上重叠或同时服用(通称为“并行治疗”)。在本发明的一种具体实施方案中，软骨提取物指的是鲨鱼软骨提取物，它是经过包含以下步骤的过程获得的：匀化并提取鲨鱼软骨直至获得平均粒度500μm的软骨颗粒和粗制液体提取物的混合物，分离所述液体提取物和软骨颗粒，并对该粗制液体提取物进行分级分离以回收分子量低于500千道尔顿的分子。在第一种实施方案中，所用的抗肿瘤剂的抗肿瘤剂量是其次佳剂量，所用的软骨提取物的量增强抗肿瘤剂的功效，同时又不增加，甚至降低由于服用较高剂量的上述抗肿瘤剂所伴发的毒副作用，这一较高剂量的抗肿瘤剂产生与联合抗肿瘤疗法相等的抗肿瘤功效。在第二种实施方案中，所用的抗肿瘤剂的抗肿瘤剂量是其最佳剂量，所用的软骨提取物的量增强抗肿瘤剂的功效，同时又不增加，甚至降低由于服用上述抗肿瘤剂所伴发的毒副作用。一种抗肿瘤剂的次佳或最佳剂量的选择只取决于所追求的治疗作用和该抗肿瘤剂的副作用的严重性。6本发明中的抗肿瘤剂可以是：白消安，噻替派，苯丁酸氮芥，环磷酰胺，雌二醇氮芥磷酸钠，异环磷酰胺，盐酸氮芥，美法仑，卡氮芥，罗氮芥，链脲霉素，卡铂，顺铂，氨甲喋呤钠，cladribine,巯基嘌呤，硫鸟嘌呤，阿糖孢苷，羟基脲，柔红霉素，盐酸阿霉素，盐酸表柔比星，盐酸伊达比星，放线菌素D,硫酸博莱霉素，丝裂霉素，米托坦，盐酸米托蒽醌，依托泊苷，替尼泊苷，docetaxel,paclitaxel,硫酸长春花碱，硫酸长春新碱，硫酸长春地辛，酒石酸长春瑞宾，六甲蜜胺，安丫啶，I-门冬酰胺酶，达卡巴嗪，磷酸氟达拉滨，卟菲尔钠，盐酸丙卡巴肼，维A酸(全反式视黄酸),marimastat,苏拉明，TNP470,沙利度胺或放射在本发明的一种具体实施方案中，所用的抗肿瘤剂是顺铂。本发明的另一个目的是提供可用于实施软骨提取物这种新用途的产产品之一是一种抗肿瘤组合物，其含有一种抗肿瘤量的抗肿瘤剂和一种抗肿瘤量的软骨提取物，和药学上可接受的适宜载体。此类产品的另一种形式是一种抗肿瘤治疗药盒，其含有两个组分，一个组分含有抗瘤剂量形式的抗肿瘤剂，第二种组分含有抗瘤剂量形式的本发明优选实施方案的描述我们已经试验过由服用一种软骨提取物和一种抗肿瘤剂所构成的联合抗肿瘤疗法，希望揭示联合治疗是否使药物的功效彼此增强而毒副作用无任何增加，甚至更好的是有所减低。本发明将通过优选实施方案加以描述，并进一步参考下列附图，目的是对本发明进行具体举例说明而不是限制其范围。附图的简要说明图1显示的是在LLC小鼠肿瘤模型中转移灶数目的减少。用软骨液体提取物(AE-X)对LLC小鼠进行单独口服给药或与顺铂(CDDP)一起联合7口服给药，AE-X所用的剂量逐步提高。也进行了CDDP单独口服给药的实验。对照代表的是服用生理盐水的小鼠。图2显示的是经顺铂(CDDP)和剂量逐步提高的软骨液体提取物(AE-X)单独或联合治疗的LLC小鼠的体重变化情况，并与生理盐水处理组(对照组)进行比较。图3显示的是抗肿瘤治疗毒性程度与白血球计数之间的相关性。结果我们已经根据我们的专利药鲨鱼软骨提取物(出处同上)确定了某些成分，发现其中存在总浓度为每20mg干重总软骨液体提取物大约75μg次黄嘌呤，它的呋喃糖苷衍生物和二聚体。尽管不排除该剂量的次黄嘌呤在体内会有有效对抗肿瘤的可能，不过这一剂量在体内应是无毒的。次黄嘌呤是次黄嘌呤-鸟嘌呤磷酸核糖转移酶(HGPRT)的底物，HGPRT是一种嘌呤营救酶(Weber等.,1983)。次黄嘌呤形成单磷酸肌苷，而单磷酸肌苷是参与腺苷酸和鸟苷酸合成的关键中间体。尽管次黄嘌呤最终可能导致嘌呤碱基在核苷酸和核酸中结合的增加，而这一情况又有利于DNA合成，但是许多细胞系统在各式各样的细胞途径中使用嘌呤，有些作为激活剂而其他的则有抑制作用。已知次黄嘌呤在体外具有抗肿瘤细胞增生的活性，这提示在癌细胞中，与次黄嘌呤相关的抑制途径可能比激在人类受试者中，资料表明：那些接受软骨提取物和放射疗法或化学疗法并行治疗的患者可以更迅速地恢复健康，其全身表观和指甲和头发的健康均明显改善。另一方面，那些只接受软骨提取物治疗的患者同样可见他们总体健康的改善，同时癌肿在缩减。这些观察指出：软骨提取物不仅仅通过其本身使肿瘤增生退化的功能而起效，它还可以抵消其他抗肿瘤治疗对人体的不利影响，和/或使人能更快地从这种不利影响中我们在两个动物模型中证实了软骨提取物的体内抗肿瘤活性：DA3小鼠，其肿瘤具有低度转移的可能性，和8DA3模型我们通过小鼠乳腺癌模型(同种移植物)来研究软骨提取物的抗肿瘤潜力。1X10⁶DA3细胞被皮下接种到BALB/c小鼠的右胁。这些细胞起源于由7,12-二甲基苯并蒽(DMBA)所诱生的鼠乳腺癌。DA3是一种非转移性或低转移性的鼠乳腺癌(D.Medina,J.Nat1.CancerInst.,1969,42:303-310;出处同上.,1976,57:1185-1189).接种的细胞在体内缓慢生长并形成实补有50μM巯基乙醇，0.2mMHepes缓冲溶液，1mM丙酮酸钠，2mML-谷氨酰胺，0.1mM非必需氨基酸，10mM维生素，10%胎牛血清，1%青链霉素。细胞在37℃,5%CO₂条件下孵育，在此条件下，DA3细胞可以增殖但不发生分化。在用于诱导肿瘤时，细胞在完全培养基中生长到70%融合成片后，使用胰蛋白酶-乙二胺四乙酸溶液收集细胞。细胞经离心后，用磷酸缓冲溶液(D-PBS,无Ca²+,Mg²+离子)洗细胞三次，并重悬成1X10⁷细胞/ml的细胞悬液。每只小鼠(n=15)接种0.1ml该细胞悬液，并每天口服软骨提取物或安慰剂(生理盐水)。随机分组后，治疗开始于接种DA3细胞的当日或7日以后。进行了各种不同浓度的软骨提取物的试验。软骨提取物的剂量水平以每千克体重所给予的软骨提取物的干重的量来表每三天检测一次肿瘤生长情况，测量瘤体的长度和宽度，并按下列方法计算肿瘤相对体积(cm³):[长(cm)X宽²(cm²)/2]。接种肿瘤后第54天处死小鼠，分离瘤体并称重。当每天给予DA3小鼠100到400mg/kg的软骨提取物(干重)时，治疗48天后，可以观察到肿瘤大小较对照减少50%(资料未显示)。我们在Lewis肺癌模型(LLC)上，通过对不同浓度的软骨提取物单独9或与顺铂(CDDP)联合给药试验，证实了软骨提取物具有抗肿瘤功效和LLC细胞重悬于无菌PBS(10⁶细胞/0.2ml)中并植入C57BL/6小鼠体内。11天后，原发肿瘤体积平均达到1.0cm³并被手术切除。术后，小鼠被随机分组，每组15只。对照组(服用生理盐水)和软骨提取物组小鼠每天被按照指定的剂量水平管饲法给药，共给药15天。术后16天，动物被处死，肺脏被10%福尔马林固定，并计数肺部转移灶的数目。动物在实验过程中总是处于受控环境中：温度为22℃,湿度40%到50%,明/暗循环时间：12小时。动物可任意进食和饮水。在首先进行的实验中，共对小鼠进行了五次顺铂(CDDP)腹腔注射，每三天一次(剂量分别为1,2,3mg/kg)。软骨提取物每天经口给药(剂量为31,125,500mg/kg)。另有服用生理盐水的对照组。实验结果总结为表2.表2与对照相比缩减的百分数321000软骨提取物(mg/kg)我们可以注意到软骨提取物既不表现协同作用也不表现拮抗作用，而可使肺转移灶降低54%,而单独使用125和500mg/kg的软骨提取物可分别降低65%和69%。使用最高剂量的软骨提取物(500mg/kg/天)和CDDP(3mg/kg)联合治疗所达到的降低转移灶的效果(降低85%)与单独使用的毒性却没有在联合治疗中观察到(资料未显示)。也就是说，将软骨提取物添加到次佳剂量的、低毒性剂量水平的CDDP中，治疗结果将会保持在第二个独立实验中，所用CDDP的剂量是4mg/kg,软骨提取物的剂量分别是75,150,500mg/kg。同样设生理盐水对照组。其降低转移灶的结果总结在图1中。单独使用CDDP可使转移灶降低大约71%。软骨提取物在所有受试剂量水平都具有降低转移灶数目的功效。在使用150mg/kg或更高剂量时，其降低转移灶的功效最大。与单独使用最佳剂量的CDDP所能达到的最大功效(大约71%)相比，CDDP与两个最大剂量(150和500mg/kg)的软骨提取物联合使用将会达到超高功效(85%-87%)。毒副作用通过监测体重进行评估。结果如图2所示。在实验的第一周内，所有各组小鼠的体重均有增加。药物治疗始于记录的第十二天，在图上的第二和第三时间点之间所看到的体重降低的情况是由于进行了必要的手术(在第十一天)以切除原发LLC肿瘤团块所治疗的小鼠体重下降了大约16%,表明其毒性很大。当单独使用软骨提取物时，所有剂量都不影响体重的降低，而只发挥降低转移灶数目的功效。当它与CDDP联合使用时，软骨提取物则对用CDDP所引起的体重损耗起到了某种保护作用(75,150,500mg/kg剂量介于150-500mg的所有剂量的软骨提取物都可以与3-4mgCDDP联合使用，从而达到超高功效，同时又不增加毒性，即使最高剂量的CDDP时。毒性是通过荷瘤动物的体重降低来进行评估的。我们还通过检测一项血液学参数，也就是外周血白细胞数，来进一步阐述软骨提取物的保护作用的性质。在实验记录的第1,4,7,10,13天给正常小鼠注射(腹腔注软骨提取物经口服给药，剂量分别为75,15