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4.4.5碳水化合物代谢实验-β-半乳糖苷酶实验CARBOHYDRATEMETABOLISMTEST-BETA-GALACTOSIDASETEST董慧一、原理细菌分解乳糖靠两种酶的作用，一种是β-半乳糖苷酶渗透酶，它位于细胞膜上，可运送乳糖分子渗入细胞，另一种是β-半乳糖甘酶，亦称乳糖酶，位于细胞内，能使乳糖水解成半乳糖和葡萄糖。具有上述两种酶的细菌，能在24-48h发酵乳糖，而缺乏此两种酶的细菌，不能分解乳糖。乳糖迟缓发酵只有β-半乳糖甘酶而缺乏β-半乳糖苷酶渗透酶，因面乳糖进入细胞很慢，需经培养基中1%乳糖较长时间的诱导，产生相当数量的渗透酶后，才能较快分解乳糖，故呈迟缓发现象。若β-D-半乳糖苷（ONPG）可迅速进入细菌细跑，被β-半乳糖苷酶水解，释放出黄色的邻硝基苯酚，培养液变黄可迅速得知β-半乳糖苷酶的存在，从面确定该菌为乳糖迟缓发酵菌。二、实验方法将待检菌接种到1%乳糖肉汤琼脂培养基上，35℃培养18-24h。用接种环取菌置于0.25ml无菌生理盐水中制成菌悬液，加入1滴甲苯并充分振摇，使酶释放。将试管置37℃水浴5mim，加入0.25mlONPG试剂，水浴20min~3h观察结果。三、实验结果菌悬液呈现黄色为阳性反应，一般在20~30min内显色。四、应用迅速及迟缓分解乳糖的细菌ONPG试验为阳性，而不发酵乳糖的细菌为阴性。本实验主要用于迟缓发酵乳糖菌株的快速鉴

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