2025年人教新起点选择性必修3生物下册阶段测试试卷含答案

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A.离体的红豆杉组织细胞通过果胶酶分散处理后直接进行悬浮培养B.悬浮培养液中大多数细胞在形态上呈等径形，核-质比率大，胞质浓厚，液泡化程度高C.植物细胞悬浮培养培养液中一般细胞分裂素与生长素含量比值大于1D.植物细胞悬浮培养中细胞生长没有接触抑制，因此只要空间足够大，就可以扩大培养5、下列关于相关实验失败的原因分析，错误的是（）A.制作果酒时，未对发酵装置进行消毒处理，造成发酵失败B.制作果醋时，通入氧气不足或温度过低，造成发酵失败C.制作腐乳时，装瓶后未将瓶口密封，造成豆腐腐败变质D.制作泡菜时，放盐的比例过大，造成泡菜腐烂发霉6、如图表示通过植物细胞工程相关技术，利用甲（2n）、乙（2n）两种植物（各含有一种不同的优良性状）培育高产耐盐植株的过程，其中序号代表过程或结构。请分析下列说法正确的是（）

A.①过程常用胰蛋白酶作为化学诱导剂B.②不是甲和乙融合的杂种细胞C.由愈伤组织到④需经过脱分化和再分化的过程D.可通过配制选择培养基对目的植株进行选择7、蛋白质工程的基本流程正确的是（）

①蛋白质分子结构设计②DNA合成③预期蛋白质功能④根据氨基酸序列推出脱氧核苷酸序列A.①②③④B.④②①③C.③①④②D.③④①②8、为了示踪衰老细胞在机体中的分布，科研人员综合利用基因工程和细胞工程的技术手段，将绿色荧光蛋白基因gf插入到了小鼠p16基因的下游，使两个基因“融合”。转基因小鼠的衰老细胞中，p16和gfp会特异性表达，从而使其在紫外光下呈绿色。下列分析错误的是（）A.可用PCR技术特异性地快速扩增绿色荧光蛋白基因gfpB.转基因小鼠的p16基因和gfp基因具有各自独立的启动子C.常用显微注射法将改造好的融合基因注入小鼠的受精卵中D.可选择发育到桑葚胚期的转基因小鼠胚胎移植到受体母鼠子宫内评卷人得分二、多选题(共9题，共18分)9、下图为杂交瘤细胞制备示意图。骨髓瘤细胞由于缺乏次黄嘌呤磷酸核糖转移酶（HGPRT-）；在HAT筛选培养液中不能正常合成DNA，无法生长。下列叙述正确的是（）

A.可用灭活病毒诱导细胞融合B.未融合的细胞和融合的同种核细胞都能在HAT培养液中生长C.杂交瘤细胞需进一步筛选才能用于生产D.细胞膜的选择透过性是细胞融合的基础10、我国科学家提出的异种克隆大熊猫实验技术路线如下图。相关叙述错误的是（）

A.科学家通过对母兔注射孕激素，进行超数排卵处理以获得更多的卵母细胞B.异种重构囊胚在体外培养时，为保证无毒无菌环境，往往需要在培养液中加入维生素C.囊胚由滋养层细胞和内细胞团构成，后者将来可发育成胎儿的各种组织D.兔子宫提供的生理环境与大熊猫差异大，异种重构囊胚可能不能正常发育出大熊猫幼仔11、农杆菌Ti质粒上的T-DNA可以转移并随机插入到被侵染植物的染色体DNA中。研究者将下图中被侵染植物的DNA片段连接成环；并以此环为模板，利用PCR技术扩增出T-DNA插入位置两侧的未知序列，以此可确定T-DNA插入的具体位置。下列说法正确的是（）

A.进行PCR扩增的依据是DNA分子双链复制的原理B.进行PCR扩增需要的酶有解旋酶和热稳定DNA聚合酶C.利用图中的引物②、③组合可扩增出两侧的未知序列D.通过与受体细胞的基因组序列比对，可确定T-DNA的插入位置12、白地霉侵染是导致柑橘酸腐病的主要原因，实验证明桔梅奇酵母通过分泌普切明酸对白地霉具有生物防治能力。已知铁是真菌生长的必需元素，是胞内重要酶活性中心的组成部分。普切明酸是桔梅奇酵母产生的一种水溶性铁螯合剂，能快速在培养基中扩散并与其中的Fe3+形成稳定红色复合物。研究配制的含有不同浓度FeCl3的培养基如下表所示。实验结果为随FeCl3浓度增大，抑菌圈红色加深但变窄，如下图所示。相关叙述正确的是（）。成分MgSO4NaH2PO4蛋白胨FeCl3溶液水琼脂用量5g7g15g500mL7g20g

A.蛋白胨可以提供碳源、氮源、维生素，琼脂不是营养物质B.白地霉采用了平板划线法，桔梅奇酵母采用了涂布平板法C.结果表明，FeCl3浓度增大，普切明酸与Fe3+结合的数量减少D.结果表明，FeCl3能降低桔梅奇酵母对白地霉的防治效果13、在动物细胞培养的过程中，贴壁的细胞不一定都能增殖并形成克隆（单个细胞繁殖形成的细胞群体），而形成克隆的细胞必为贴壁和有增殖活力的细胞，这一特点可用于测定动物细胞的增殖能力。大致流程如下图，相关叙述不正确的是（）

A.出现接触抑制后，细胞克隆停止增殖B.克隆细胞与接种的细胞的遗传信息不一定相同C.胰蛋白酶可使细胞分散成单个利于计数D.需采用固体培养基培养才能形成细胞克隆14、勤洗手是预防病毒感染的有效措施。某公司在防控新型冠状病毒期间推出一款新型免洗洗手凝胶。为衡量该凝胶的清洗效果；研究人员检测了用凝胶洗手前后手部细菌的含量。凝胶洗手前的检测流程见下图。下列叙述错误的是（）

A.统计洗手前手部细菌的数量，选择的接种方法是平板划线法B.除图中操作外，还需要设置一组未接种的空白培养基进行培养C.培养基上的一个菌落只可能来源于样品稀释液中的一个活菌D.初步判断培养基上菌种的类型，需要用显微镜观察菌体的形状15、抗体的结构分为V区（识别并结合抗原的区域）和C区（抗体的支架），鼠源抗体具有外源性，会被人体免疫系统当作抗原而清除。用人抗体的C区替换鼠源抗体的C区，保留鼠单抗的V区，可构建人一鼠嵌合抗体，操作流程如图所示。下列相关说法错误的是（）

A.与骨髓瘤细胞融合的B淋巴细胞为能分泌抗体的浆细胞B.用选择性培养基可筛选出能产生所需抗体的杂交瘤细胞C.为获得结构正确的嵌合抗体，受体细胞应选用大肠杆菌D.人一鼠嵌合抗体在保留抗体特异性的同时外源性下降16、某植物有甲、乙两品种，科研人员在设计品种乙组织培养实验时，参照品种甲的最佳激素配比（见下表）进行预实验。为确定品种乙的II阶段的最适细胞分裂素浓度，参照表中α2（α2>2．0μmol·L-1），以0．5μmol·L-1为梯度，设计5个浓度水平的实验，其中细胞分裂素最高浓度设为M。下列有关叙述正确的是（）。品种甲组织培养阶段细胞分裂素/（μmol·L-1）生长素/（μmol·L-1）I诱导形成愈伤组织α1b1II诱导形成幼芽α2b2Ⅲ诱导生根α3b3

A.表中发生基因选择性表达的是II和Ⅲ阶段B.实验中共配制了2种不同的培养基，即生根培养基和生芽培养基C.确定品种乙II阶段最适细胞分裂素浓度的实验中，M为α2+2μmol·L-1D.生长素和细胞分裂素的配比是启动细胞分裂、脱分化和再分化的关键因素17、DNA分子的糖-磷酸骨架中磷酸基团呈离子状态，不同相对分子质量DNA进行琼脂糖凝胶电泳时可分开成不同条带，相同分子量的为一条带。用某种限制性核酸内切酶完全酶切质粒后，电泳后出现3条带。下列叙述正确的是（）A.该质粒上只有3个酶切位点B.琼脂糖凝胶电泳可以用来分离DNAC.外加电场时，DNA向正极泳动D.琼脂糖带负电荷，有利于DNA的泳动评卷人得分三、填空题(共8题，共16分)18、平板冷凝后，为什么要将平板倒置？________19、虽然各种培养基的具体配方不同，但一般都含有_____________、___________________(提供碳元素的物质)、_________________(提供氮元素的物质)和__________________。20、动物细胞融合的意义：克服了______，成为研究_____、_____、肿瘤和生物新品种培育的重要手段。21、回答下列问题。

（1）果酒的制作离不开酵母菌，温度是酵母菌生长和发酵的重要条件，酒精发酵时一般将温度控制在_________，醋酸菌是一种________细菌，它的最适生长温度为_______________，乳酸菌是________细菌，在无氧的情况下，将葡萄糖分解成___________。

（2）微生物的接种方法很多，最常用的是_____________和__________________，稀释涂布平板法统计的菌落数往往比活菌的实际数目___________，这是因为______________________________。

（3）饮用水中大肠杆菌的数目可以通过滤膜法来测定，将滤膜放在____________培养基上培养，大肠杆菌的菌落呈现___________；从而计算出水样中大肠杆菌的数目。

（4）固定化酶和固定化细胞技术是利用物理或化学方法将酶或细胞固定在一定空间内的技术，包括化学结合法、____________和物理吸附法。酶更适合采用__________和___________固定化，而细胞多采用___________固定化。22、_______mol/L浓度下，DNA溶解度最大。23、沙门氏菌是一种常见的食源性致病菌；被感染了沙门氏菌的人或带菌者的粪便污染的食品，会使人发生食物中毒。沙门氏菌的最适繁殖温度为37°C，在20℃以上即能大出繁殖，其对热抵抗力不强，在60℃的条件下15min就能被杀死。肉桂精油是从肉桂树中提炼获得的，具有不溶于水；易溶于有机溶剂且易挥发的特性，能抑制沙门氏菌的繁殖。回答下列问题：

（1）培养沙门氏菌时要进行无菌操作，常用的灭菌方法有________（答出两种）。用平板培养沙门氏菌时一般需要将平板________（填“倒置”或“正置”）。单个细菌在平板上会形成菌落，研究人员通常可根据菌落的形状、大小和颜色等特征来初步区分不同种的微生物，原因是________。

（2）从鸡粪便取样，经选择培养后需要经过一系列________才能将样品涂布到鉴别培养基上。对获得的沙门氏菌常采用________的方法长期保存。

（3）根据题干信息，为避免食用被沙门氏菌污染的食品而引发的食物中毒，家庭中储存、加工食品的方法是________。

（4）根据肉桂精油的化学特性，可采用________法来提取，提取过程中影响精油品质的因素有________。24、生物武器的致病能力强、攻击范围广。它可以直接或通过食物、生活必需品和带菌昆虫等散布，经由呼吸道、消化道和皮肤等侵入人、畜体内，造成大规模伤亡，但对植物无害。（选择性必修3P111）()25、随着现代科技的发展，有些新的致病微生物被发现，它们的危害可能更大。通过互联网或图书馆搜集近年发现的致病微生物的相关资料，分析和归纳这些资料__________。评卷人得分四、实验题(共4题，共12分)26、尿素是一种重要的农业氮肥；但尿素并不能直接被农作物吸收，只有当土壤中的细菌将尿素分解成氨之后，才能被植物利用。某课题小组从土壤中分离能够分解尿素的细菌并进行计数的过程如图1所示，图2是乙中的培养基配方。请回答下列问题：

（1）为了获得尿素分解菌；可在__________取样；经系列处理后如图2所示培养基，为微生物的生长提供碳源和氮源的分别是___________；__________。

（2）甲中培养基与乙中培养基的成分相比；唯一的区别是___________。

（3）在涂平板前需要对甲中的菌液进行稀释；稀释涂布后能得到菌落数目在___________________的平板，则说明稀释操作比较成功。

（4）对分离得到的尿素分解菌作进一步鉴定时；可在上述培养基中加入酚红指示剂，指示剂变红的原因是尿素分解菌_____________________，再结合菌落的特征等进行确定。

（5）统计的菌落数往往比活菌的实际数目_________，除了上述的活菌计数法外，______________也是测定微生物数量的常用方法。27、如图为果酒与果醋发酵装置示意图；请据图回答：

（1）酿造葡萄酒时；在葡萄榨汁前，葡萄要先进行________再除去枝梗，可以避免除去枝梗时引起葡萄破损，增加被杂菌污染的机会。

（2）将发酵装置放在18～25℃环境中，每天拧开气阀b多次；排出发酵过程产生的大量________。装置中d处设计成弯曲形状的目的是____________________________________________。

（3）10天之后；利用酸性条件下的________对从出料口c取样的物质进行检验，若样液变为________色，说明产生了酒精。

（4）产生酒精后，若在发酵液中加入醋酸菌，然后将装置放在________环境中，适时打开______向发酵液中充气，原因是______________________________________________。28、玉米是重要的粮食作物；其叶片细胞中的P蛋白是一种水通道蛋白，由P基因编码，在植物生长发育过程中对水分的吸收具有重要的调节功能。科研人员成功培育出超量表达P蛋白转基因玉米，所用DNA片段和Ti质粒的酶切位点如图所示，请回答下列问题：

(1)强启动子是一段有特殊结构的DNA片段，能被_______识别并结合，驱动基因的持续转录，如将强启动子插入到玉米叶绿体某基因内部，可获得该基因_______突变株。为使P基因在玉米植株中超量表达，应优先选用_______酶组合，将Ti质粒切开后构建重组表达载体。T-DNA在该实验中的作用是_______。

(2)将农杆菌浸泡过的玉米愈伤组织去菌后进行组织培养，培养基中需加入_______进行筛选，此物质属于氨基糖苷类抗生素，它能抑制蛋白质在叶绿体和线粒体中合成，使植物的光合作用和_______受到干扰；从而引起植物细胞死亡。

(3)愈伤组织是一种相对没有分化的_______团，经液体悬浮培养叮以分散成胚性细胞，在适宜的培养基中，这种单细胞可以发育成_______；再继续发育成转基因玉米株系。

(4)影响玉米愈伤组织能否成功再生出植株的因素有植物激素的配比、愈伤组织继代次数以及_______等。目前，组织培养过程中培养瓶常用透气封口膜封口，目的是_______。29、番茄果实在成熟的过程中；多聚半乳糖醛酸酶（PG）合成显著增加，以降解果胶使细胞壁破损，从而使果实变红变软，但不利于保鲜。科学家利用基因工程得到转基因番茄，大大延长果实保质期。操作流程如下，回答下列问题：

（1）利用RT—PCR技术即逆转录—多聚酶链式反应制备PG基因，最好从番茄的_____细胞中提取mRNA，此技术所需要的酶主要有_____。

（2）据图可知，转基因番茄主要通过抑制PG基因的_____过程；使PG合成量减少，从而延长果实保质期。

（3）图中的农杆菌。能够在含_____的培养基中生存，而在含_____的培养基中不能生存的即为已转化的所需农杆菌。

（4）图中将反向连接PC基因导入番茄细胞的方法称为_____。要检测感染农杆菌后的番茄细胞染色体DNA上是否插入了反向连接PC基因，_____（填“能”或“不能”）用标记的PG基因的单链作为探针进行检测，理由是_____。

（5）在将转化的番茄细胞通过植物组织培养技术形成番茄幼苗过程中，培养基_____（填“要”或“不要”）添加有机营养物质，原因是_____。评卷人得分五、综合题(共2题，共16分)30、阅读下列材料；回答问题。

获得2020年诺贝尔化学奖的CRISPR-Cas系统是一种高效的基因编辑技术。其中CRISPR-Cas9体系在作物遗传育种研究中应用较为广泛（原理如图）。

CRISPR-Cas9体系是由靶基因的向导RNA和Cas9蛋白构成的复合体。向导RNA约为20个碱基；在基因组中负责寻找靶基因并与其结合；Cas9蛋白在向导RNA的引导下切割靶基因，使DNA双链断裂产生平末端。在随后DNA自我修复的过程中，容易随机引起一些碱基对的插入或缺失，导致基因功能改变。

近年来；人们对长粒香型稻米的需求量越来越大，研究者利用CRISPR-Cas9体系，改造东北广泛种植的“龙粳”稻米，使其在保留了原来抗倒伏；耐寒性强等特点的同时，具备了长粒、香味浓厚的特点。通过研究，科学家已经发现许多与粒长相关的基因，例如GS9基因，以及与稻米香味相关的Badh2基因。当破坏GS9基因的正常表达时，稻米表现出粒长增加的特性；当破坏Badh2基因的正常表达时，稻米产生更多的香味。因此，科学家利用CRISPR-Cas9技术在“龙粳”稻中沉默GS9和Badh2基因获得了更长更香的稻米。

但是CRISPR-Cas的功能不仅限于切割靶基因。一些研究者进行如下设计：使Cas蛋白的剪切域失活；将新的蛋白与该蛋白融合，这样Cas9可被用于将这些蛋白运输至特定的DNA序列。举例来说，Cas与转录激活因子融合，将RNA聚合酶带到目标位置，以启动基因的转录。Cas与脱氨酶融合，能使特定的DNA碱基变异——使胸腺嘧啶（T）取代胞嘧啶（C），这种精准基因编辑意味着我们能将致病突变转变为一个健康版本的基因，或将终止密码子引入特定部位。涌现出来的这些新想法表明，目前取得的成果可能只是CRISPR-Cas应用潜力的冰山一角，无论接下来取得什么进展，CRISPR-Cas掀起的革命远没有结束。

（1）科学家利用CRISPR-Cas9体系构建了T0代水稻，水稻中同时含有GS9基因的向导RNA和Cas9蛋白复合体及_________复合体，其中，2个向导RNA依据_________原则寻找相应的靶基因，靶基因在Cas9蛋白的作用下被剪切，Cas9蛋白在这个过程中发挥了基因工程工具中_________酶的功能。

（2）由文中信息可知，为获得粒更长、香味更浓厚的水稻，可通过将T0代植株__________的方法，获得纯合的T1代水稻突变体植株。提取T1代突变体植株大DNA进行测序；挑选出GS9基因和Badh2基因突变的纯合子，如下图：

Cas9蛋白在向导RNA的引导下切割GS9基因和Badh2基因，在随后DNA自我修复的过程中，GS9基因和Badh2基因中_____________________；导致GS9和Badh2基因沉默。

（3）阅读材料可知，CRISPR-Cas9的功能有__________________________。31、下图是基因工程方法培育抗虫棉的过程。请回答相关问题：

(1)从苏云金芽孢杆菌的DNA上获取抗虫基因，需要用到的工具是_______，此工具主要是从______生物中分离纯化出来的，它能够识别双链DNA分子的某种特定核苷酸序列，并且使每一条链中特定部位的两个脱氧梭苷酸之间的______键断开。

(2)构建重组质粒时，常用Ti质粒作为载体，是因为Ti质粒上具有______它能把目的基因整合到受体细胞______。

(3)E过程是利用______技术完成的，要确定抗虫基因导入棉花细胞后，是否赋予了棉花抗虫特性，在个体水平上还需要做______实验。

(4)将目的基因导入植物细胞，除采用上图中的方法外，还可采用_____法和_____法。参考答案一、选择题(共8题，共16分)1、B【分析】【分析】

胚胎工程是指对动物早期胚胎或配子所进行的多种显微操作和处理技术。包括体外受精；胚胎移植、胚胎分割移植、胚胎干细胞培养等技术。胚胎工程的许多技术；实际是在体外条件下，对动物自然受精和早期胚胎发育条件进行的模拟操作。

【详解】

A；稀有动物可以通过胚胎工程中的体外受精；胚胎移植繁殖数量更多的后代，完成种族的延续。把药物基因与动物的乳腺细胞中的调控元件组合导入动物受精卵中，就可以作为生物制药反应器，A正确；

B；人工受精不需要对精子进行获能处理；B错误；

C；早期胚胎培养与动物细胞培养的培养液中都需要加入血清或血浆；C正确；

D；经过同情发情处理；使得受体与供体的生理状态基本相同，则被移植胚胎继续正常发育，D正确。

故选B。2、D【分析】【详解】

先利用特定的抗原注射小鼠；再从小鼠脾脏中分离B淋巴细胞，抗原主要成分是蛋白质，蛋白质饲喂小鼠，水解失去活性，A错误；

杂交瘤细胞具有浆细胞与癌细胞的所有遗传物质；获得的融合细胞包括杂交瘤细胞；浆细胞自身融合型、癌细胞自身融合型，B错误；

选择培养基筛选出的杂交瘤细胞还需通过抗体检测后才能通过体外或体内培养生产单克隆抗体；C错误；

单克隆抗体制备最广泛的用途是用作体外诊断试剂，具有准确、快速等优点，D正确。3、D【分析】【分析】

DNA的粗提取的步骤主要有：实验材料的选取；破碎细胞、获得含DNA的滤液、去除滤液中的杂质、DNA的析出与鉴定。

【详解】

A；猪红细胞没有细胞壁；可用蒸馏水涨破细胞的方法从猪红细胞中提取蛋白质，A正确；

B；透析法分离蛋白质的依据是蛋白质不能通过半透膜；小分子杂质可以通过，B正确；

C；鸡血细胞中含有丰富的DNA和血红蛋白；可以用鸡血作为血红蛋白和DNA提取的良好材料，C正确；

D；加入木瓜蛋白酶会将蛋白质水解；D错误。

故选D。4、B【分析】【分析】

植物组织培养的原理是植物细胞的全能性；其过程是：离体的植物组织；器官或细胞（外植体）脱分化形成愈伤组织，愈伤组织再分化形成胚状体，进一步发育植株（新植体）。

【详解】

A；离体的红豆杉组织细胞通过纤维素酶和果胶酶分散处理后直接进行悬浮培养；A错误；

B；悬浮培养液中细胞脱分化形成愈伤组织；大多数细胞在形态上大小相差不大，细胞的核-质比率大，胞质浓厚，液泡化程度高，B正确；

C；脱分化过程一般细胞分裂素与生长素含量比值小于1；C错误；

D；植物细胞悬浮培养中植物细胞生长没有接触抑制；但是受营养物质的影响，不可能无限扩大培养，D错误。

故选B。5、D【分析】【分析】

传统发酵技术是指直接利用原材料中天然存在的微生物；或利用前一次发酵保存下来的面团；卤汁等发酵物中微生物进行发酵、制作食品的技术。

【详解】

A；制作果酒时；未对发酵装置进行消毒处理，可能会有杂菌污染，造成发酵失败，A正确；

B；制作果醋时；利用的微生物是醋酸菌，醋酸菌是需氧微生物，培养的条件为30-35℃，所以通入氧气不足或温度过低，造成发酵失败，B正确；

C；制作腐乳时；装瓶后未将瓶口密封，造成杂菌污染，造成豆腐腐败变质，C正确；

D；制作泡菜时；盐具有抑制微生物生长的作用，放盐的比例过小，会造成泡菜腐烂发霉，D错误。

故选D。6、B【分析】【分析】

该图是植物原生质体融合以及植物细胞培养过程图；①表示利用化学或物理方法融合细胞，②表示正在融合的细胞，③表示杂种细胞，④表示杂种植株。植物组织培养：在无菌和人工控制的条件下，将离体的植物器官；组织、细胞，培养在人工配制的培养基上，给予适宜的培养条件，诱导其产生愈伤组织、丛芽，最终形成完整的植株。

【详解】

A；在培育高产耐盐植株时；若使用化学方法诱导甲、乙原生质体融合，则①过程可选用聚乙二醇作为诱导剂，A错误；

B；甲、乙原生质体经诱导融合后可能形成甲和甲融合、乙和乙融合及甲和乙融合的细胞；且②为尚未再生出细胞壁的原生质体，不是细胞，B正确；

C；愈伤组织到④只需经过再分化的过程；C错误；

D；对目的植株进行筛选应从植物性状水平筛选；而运用选择培养基培养属于细胞水平，故应当用高盐环境对目的植株进行筛选，D错误。

故选B。7、C【分析】【分析】

蛋白质工程指以蛋白质的结构规律及其与生物功能的关系作为基础；通过基因修饰或基因合成，对现有蛋白质进行基因改造，或制造一种新的蛋白质，以满足人类的生产和生活的需要。

【详解】

蛋白质工程的基本流程是：③预期蛋白质功能→①预期蛋白质分子结构组成→④根据氨基酸序列推出脱氧核苷酸序列→②合成DNA。综上所述；C正确，ABD错误。

故选C。8、B【分析】【分析】

基因工程的操作步骤：(1)目的基因的获取；方法有从基因文库中获取；利用PCR技术扩增和人工合成；(2)基因表达载体的构建：是基因工程的核心步骤。基因表达载体包括目的基因、启动子、终止子和标记基因等；(3)将目的基因导入受体细胞；根据受体细胞不同；导入的方法也不一样，将目的基因导入植物细胞的方法有农杆菌转化法和花粉管通道法；将目的基因导入动物细胞最有效的方法是显微注射法；将目的基因导入微生物细胞的方法是感受态细胞法；(4)目的基因的检测与鉴定：分子水平上的检测：①检测转基因生物染色体的DNA是否插入目的基因-DNA分子杂交技术②检测目的基因是否转录出了mRNA-分子杂交技术；③检测目的基因是否翻译成蛋白质：抗原-抗体杂交技术；个体水平上的鉴定：抗虫鉴定、抗病鉴定、活性鉴定等。

【详解】

A；绿色荧光蛋白基因gfp为DNA片段；可用PCR技术特异性地快速扩增，A正确；

B；将绿色荧光蛋白基因gfp插入到了小鼠p16基因的下游；使两个基因“融合”，因此p16基因和gfp基因共用了一个启动子，它们之间关联表达，B错误；

C；将目的基因导入动物细胞最有效的方法是显微注射法；C正确；

D；胚胎移植时；应选择处于桑葚胚或囊胚期的胚胎，D正确。

故选B。二、多选题(共9题，共18分)9、A:C【分析】【分析】

（1）动物细胞融合的原理是细胞膜的流动性；细胞的增殖；诱导手段有电激、聚乙二醇、灭活的病毒等，结果产生杂交细胞，主要用于制备单克隆抗体。

（2）单克隆抗体制备的原理包括：①免疫理：B淋巴细胞能产生特异性抗体；②细胞融合原理：利用病毒对宿主细胞的穿透性使B淋巴细胞与骨髓瘤细胞融合；③动物细胞培养技术：对杂交瘤细胞进行体内；体外培养。

（3）制备单克隆抗体过程中的几种细胞：①免疫B细胞（浆细胞）：能产生单一抗体；但不能无限增殖；②骨髓瘤细胞：能无限增殖，但不能产生抗体；③杂交瘤细胞：既能产生单一抗体，又能在体外培养条件下无限增殖。

【详解】

A；诱导动物细胞融合的方法有电激、聚乙二醇、灭活的病毒（如灭活的仙台病毒）等；A正确；

B；两两融合的细胞包括免疫B细胞与免疫B细胞融合的具有同种核的细胞、骨髓瘤细胞与骨髓瘤细胞融合的具有同种核的细胞、免疫B细胞与骨髓瘤细胞融合的杂交瘤细胞；骨髓瘤细胞虽然能无限增殖，但缺乏次黄嘌呤磷酸核糖转移酶，免疫B细胞虽然有次黄嘌呤磷酸核糖转移酶，但不具有无限增殖的本领，所以在HAT筛选培养液中，两两融合的具有同种核的细胞都无法生长，只有杂交瘤细胞才能生长，B错误；

C；因每个免疫B细胞只分泌一种特异性抗体；因此在HAT筛选培养液中筛选出来的众多的杂交瘤细胞所分泌的抗体，不一定都是人类所需要的，还需要进一步通过专一抗体阳性检测，把能分泌人类所需要抗体的杂交瘤细胞筛选出来，C正确；

D；动物细胞融合是以细胞膜的流动性为基础的；D错误。

故选AC。

【点睛】10、A:B【分析】【分析】

分析图解：异种克隆大熊猫的培育首先通过核移植技术获得重组细胞；然后经过早期胚胎培养获得异种重构囊胚，再利用胚胎移植技术将重构囊胚移植如代孕兔体内。

【详解】

A；科学家通过对母兔注射促性腺激素；进行超数排卵处理以获得更多的卵母细胞，A错误；

B；异种重构囊胚在体外培养时；往往需要在培养液中加入抗生素，从而保证无毒无菌环境，B错误；

C；囊胚由滋养层细胞和内细胞团构成；其中滋养层细胞将来发育为胎盘和胎膜，内细胞团将来发育成胚胎的各种组织，C正确；

D；目前；异种重构囊胚在代孕兔的子宫内能正常着床，但是不能正常发育生产出大熊猫幼仔，很可能是代孕兔提供的营养物质不能让异种重构囊胚正常发育，D正确。

故选AB。

【点睛】11、A:D【分析】【分析】

PCR技术：

1；概念：PCR全称为聚合酶链式反应；是一项在生物体外复制特定DNA的核酸合成技术。

2；原理：DNA复制。

3；前提条件：要有一段已知目的基因的核苷酸序以便合成一对引物。

4；条件：模板DNA、四种脱氧核苷酸、一对引物、热稳定DNA聚合酶（Taq酶）。

5；过程：①高温变性：DNA解旋过程（PCR扩增中双链DNA解开不需要解旋酶；高温条件下氢键可自动解开）；低温复性：引物结合到互补链DNA上；③中温延伸：合成子链。

【详解】

A；PCR扩增依据的是DNA分子双链复制的原理；A正确；

B；进行PCR扩增需要热稳定DNA聚合酶（TaqDNA聚合酶）；但不需要解旋酶，B错误；

C；DNA的两条链反向平行；子链从引物的3′端开始延伸，则利用图中的引物①、④组合可扩增出两侧的未知序列，C错误；

D；通过与受体细胞的基因组序列比对；即可确定T-DNA的插入位置，D正确。

故选AD。

【点睛】12、A:D【分析】【分析】

1；培养基是人们按照微生物对营养物质的不同需求；配制出供其生长繁殖的营养基质；根据物理性质分为固体培养基和液体培养基，培养基中一般含有水、碳源、氮源和无机盐。在提供上述几种主要营养物质的基础上，培养基还需要满足微生物生长对pH、特殊营养物质和氧气的要求。

2；微生物常见的接种的方法：

（1）平板划线法：将已经熔化的培养基倒入培养皿制成平板；接种，划线，在恒温箱里培养。在线的开始部分，微生物往往连在一起生长，随着线的延伸，菌数逐渐减少，最后可能形成单个菌落。

（2）稀释涂布平板法：将待分离的菌液经过大量稀释后；均匀涂布在培养皿表面，经培养后可形成单个菌落。

【详解】

A；蛋白胨可以提供碳源、氮源、维生素；琼脂是凝固剂的一种，并不是营养物质，在培养液中加入琼脂可以使液体培养基成为琼脂固体培养基，A正确；

B；白地霉、桔梅奇酵母的接种都采用了涂布平板法；B错误；

C、随培养基中FeCl3浓度的增加，普切明酸与Fe3+的结合增强；抑菌圈的红色加深，C错误；

D、普切明酸与Fe3+形成红色复合物，但随培养基中FeCl3浓度的增加，抑菌圈变窄，说明FeCl3能降低桔梅奇酵母对白地霉的防治效果；D正确。

故选AD。13、D【分析】【分析】

动物细胞培养的过程：取动物组织块→剪碎组织→用胰蛋白酶处理分散成单个细胞→制成细胞悬液→转入培养液中（原代培养）→放入二氧化碳培养箱培养→贴满瓶壁的细胞用酶分散为单个细胞；制成细胞悬液→转入培养液（传代培养）→放入二氧化碳培养箱培养。

【详解】

A；在动物细胞培养的过程中；当出现接触抑制后，细胞克隆停止增殖，A正确；

B；在细胞分裂的过程中；可能会发生基因突变，因此，克隆细胞与接种的细胞的遗传信息不一定相同，B正确；

C；胰蛋白酶可使细胞分散成单个；从而利于计数，C正确；

D；需采用液体培养基培养才能形成细胞克隆；D错误。

故选D。14、A:C:D【分析】微生物常见的接种方法（稀释涂布平板法可用于微生物的计数）：

①平板划线法：将已经熔化的培养基倒入培养皿制成平板；接种，划线，在恒温箱里培养。在线的开始部分，微生物往往连在一起生长，随着线的延伸，菌数逐渐减少，最后可能形成单个菌落。

②稀释涂布平板法：将待分离的菌液经过大量稀释后；均匀涂布在培养皿表面，经培养后可形成单个菌落。

【详解】

A；平板划线无法得知稀释倍数；不能用于活菌计数，故统计洗手前手部细菌的数量，选择的接种方法是稀释涂布平板法，A错误；

B；除图中操作外；还需要设置一组未接种的空白培养基进行培养，以验证培养基是否被杂菌污染，B正确；

C；由于当两个或多个细胞连在一起时；平板上显示的只是一个菌落，故培养基上的一个菌落可能来源于样品稀释液中的一个、甚至几个活菌，C错误；

D；由于菌落肉眼可见；故初步判断培养基上菌种的类型，可用肉眼观察菌体的形态特征，D错误。

故选ACD。15、A:B:C【分析】【分析】

1；骨髓瘤细胞为无限增殖的细胞；分裂能力强，制备单克隆抗体的过程中还需该杂交细胞具备分泌特异性抗体的功能，而浆细胞为能够分泌抗体的细胞，故与骨髓瘤细胞融合的B淋巴细胞为能分泌抗体的浆细胞。

2；骨髓瘤细胞与B淋巴细胞在融合的过程中可能会出现多种融合结果；如骨髓瘤细胞与骨髓瘤细胞融合，B淋巴细胞与B淋巴细胞融合，而实验需要的是骨髓瘤细胞与B淋巴细胞融合的细胞，需要用选择性培养基进行筛选，但只能筛选出能杂交瘤细胞，而要筛选出能产生所需抗体的杂交瘤细胞则需要进行专一性抗体检测。

【详解】

A；与骨髓瘤细胞融合的B淋巴细胞取自脾脏；不一定是能分泌抗体的浆细胞，A错误；

B；骨髓瘤细胞与B淋巴细胞在融合的过程中可能会出现多种融合结果；如骨髓瘤细胞与骨髓瘤细胞融合，B淋巴细胞与B淋巴细胞融合，而实验需要的是骨髓瘤细胞与B淋巴细胞融合的细胞，需要用选择性培养基进行筛选，但是只能筛选出能杂交瘤细胞，而要筛选出能产生所需抗体的杂交瘤细胞则需要进行专一性抗体检测，B错误；

C；抗体为分泌蛋白；需要内质网和高尔基体对其进行加工，大肠杆菌为原核生物，无高尔基体和内质网，为获得结构正确的嵌合抗体，受体细胞不应该选用大肠杆菌，C错误；

D；结合题干“鼠源抗体具有外源性；会被人体免疫系统当作抗原而清除。用人抗体的C区替换鼠源抗体的C区，保留鼠单抗的V区，可构建人一鼠嵌合抗体”可知，该抗体不是原本的鼠源抗体，保留了其V区，但是其中还有一部分来自于人本身，使得人一鼠嵌合抗体在保留抗体特异性的同时外源性下降，D正确。

故选ABC。16、A:B:D【分析】【分析】

植物组织培养中植物激素使用：物组织培养中关键性激素是生长素和细胞分裂素；同时使用生长素和细胞分裂素时；两者用量的比例影响植物细胞的发育方向；先使用细胞分裂素，后使用生长素，细胞既分裂又分化。

【详解】

A；Ⅰ阶段为脱分化；II阶段和Ⅲ阶段为再分化，Ⅰ、II、Ⅲ阶段中会发生基因的选择性表达，A错误；

B；实验至少配制了3种不同的培养基；即形成愈伤组织的培养基、生根培养基和生芽培养基，B错误；

C、由于参照品种B的激素配比（a2＞2.0），以0.5μmol/L为梯度，设计5个浓度水平的实验，则细胞分裂素浓度依次为a2-1.0μmol/L、a2-0.5μmol/L、a2μmol/L、a2+0.5μmol/L、a2+1.0μmol/L，可见细胞分裂素的最高浓度M应设为a2+1.0μmol/L；C错误；

D；生长素和细胞分裂素的配比是启动细胞分裂、脱分化和再分化的关键因素；D正确。

故选ABD。17、B:C:D【分析】【分析】

分析题干：质粒上的DNA分子为环状；某种限制性内切酶完全酶切环状质粒后，出现3条带（相同分子量的为一条带），即3种不同分子量DNA（至少被切割成3条DNA片段），因此环状质粒上至少有3个酶切位点。

【详解】

A；由分析可知；该质粒上至少含有3个酶切位点，A错误；

B；DNA分子的糖-磷酸骨架中磷酸基团呈离子状态；带负电，DNA在一定的电场力作用下，在凝胶中向正极泳动，DNA分子越大，泳动越慢，因此琼脂糖凝胶电泳可以用来分离DNA，B正确；

C；DNA分子的糖-磷酸骨架中磷酸基团呈离子状态；带负电，因此外加电场时，DNA向正极泳动，C正确；

D；DNA分子的糖-磷酸骨架中磷酸基团呈离子状态；带负电，若琼脂糖带负电荷，使得电场力增强，有利于DNA向正极泳动，D正确。

故选BCD。三、填空题(共8题，共16分)18、略

【解析】平板冷凝后，皿盖上会凝结水珠。将平板倒置，既可以防止皿盖上的水珠落入培养基造成污染，又可避免培养基中的水分过快挥发19、略

【解析】①.水②.碳源③.氮源④.无机盐20、略

【分析】【分析】

【详解】

略【解析】远缘杂交的不亲和性细胞遗传细胞免疫、21、略

【分析】【分析】

果酒制作菌种是酵母菌；来源于葡萄皮上野生型酵母菌或者菌种保藏中心，条件是无氧；温度是18～25℃，pH值呈酸性．果醋制备的菌种是醋酸菌，条件是发酵过程中充入无菌氧气，温度为30～35℃。

【详解】

（1）酒精发酵时一般将温度控制在18～25℃；醋酸菌是一种好氧细菌，它的最适生长温度为30～35℃。乳酸菌是厌氧细菌，在无氧的情况下，将葡萄糖分解成乳酸。

（2）微生物的接种方法很多；最常用的是平板划线法和稀释涂布平板法，稀释涂布平板法统计的菌落数往往比活菌的实际数目低，这是因为当两个或多个细胞连在一起时，平板上观察到的只是一个菌落。

（3）饮用水中大肠杆菌的数目可以通过滤膜法来测定；将滤膜放在伊红美蓝培养基上培养，大肠杆菌的菌落呈现黑色，从而计算出水样中大肠杆菌的数目。

（4）固定化技术一般包括化学结合法；包埋法和物理吸附法。酶更适合采用化学结合法和物理吸附法固定化；而细胞多采用包埋法固定化。

【点睛】

本题考查果酒和果醋制备原理，意在考查学生理解所学知识的要点，把握知识间的内在联系，形成知识的网络结构，属识记内容。【解析】18－25℃好氧30－35℃厌氧乳酸平板划线法稀释涂布平板法低当两个或多个细胞连在一起时，平板上观察到的只是一个菌落伊红美蓝黑色包埋法化学结合法物理吸附法包埋法22、略

【分析】【分析】

【详解】

略【解析】0．1423、略

【分析】【分析】

微生物实验中常用的灭菌方法有干热灭菌；高压蒸汽灭菌和灼烧灭菌；其中对于培养基一般用高压蒸汽灭菌，对于接种环一般用灼烧灭菌，对于培养皿等可以用干热灭菌。培养基放入培养箱中需要倒置培养，既可以使培养基表面的水分更好地挥发，又可以防止皿盖上的水珠落入培养基造成污染。对于频繁使用的菌种，可以采用临时保藏的方法，即将菌种接种到试管的固体斜面培养基上，在合适的温度下培养，当菌落长成后将试管放入4℃的冰箱中保藏，以后每3-6个月都要重新将菌种从旧的培养基上转移到新鲜的培养基上；对于需要长期保存的菌种可以采用甘油管藏法，在3mL的甘油瓶中装入1mL甘油后灭菌，将1mL培养的菌液转移到甘油瓶中，与甘油充分混匀后放在-20℃的冷冻箱中保存。植物有效成分的提取方法主要有蒸馏法、压榨法和萃取法，如玫瑰精油的化学性质稳定，难溶于水，易溶于有机溶剂，能随水蒸气一同蒸馏，常采用蒸馏法提取；对于如橘皮精油，其主要储存在橘皮部分，由于橘皮精油的有效成分在用水蒸气蒸馏时会发生部分水解，又会产生原料焦糊问题，所以一般采用压榨法提取。

【详解】

（1）微生物培养中常用的灭菌方法有高压蒸汽灭菌法；灼烧灭菌法、干热灭菌法等。用平板培养沙门氏菌时一般需要将平板倒置；可以防止皿盖上的水珠落入培养基造成污染。在一定的培养条件下，不同种微生物表现出各自稳定的菌落特征，因此单个细菌在平板上会形成菌落，通常可根据菌落的形状、大小和颜色等特征来初步区分不同种的微生物。

（2）从鸡粪便取样；经选择培养后，如果要将样品涂布到鉴别培养基上，需要经过一系列梯度稀释。对获得的沙门氏菌进行长期保存常采用甘油管藏法。

（3）根据题干信息；沙门氏菌的最适繁殖温度为37°C，在20℃以上即能大出繁殖，其对热抵抗力不强，在60℃的条件下15min就能被杀死，因此为避免食用被沙门氏菌污染的食品而引发的食物中毒，家庭中可采取低温储存；高温加工方法进行处理。

（4）根据题意；肉桂精油不溶于水；易溶于有机溶剂且易挥发，故可采用水蒸气蒸馏法进行提取，提取过程中蒸馏的温度、时间都会影响精油品质。

【点睛】

本题主要考查现代生物科技的原理和运用，意在考查考生的识记能力和理解所学知识要点，把握知识间内在联系，形成知识网络结构的能力，能运用所学知识，准确判断问题的能力。【解析】灼烧灭菌法、高压蒸汽灭菌法、干热灭菌法倒置在一定的培养条件下，不同种微生物表现出各自稳定的菌落特征梯度稀释甘油管藏低温储存、高温加工水蒸气蒸馏蒸馏的温度、时间24、略

【分析】【详解】

生物武器是利用生物战剂杀伤人员、牲畜、毁坏植物的武器。致病能力强、攻击范围广。它可以直接或通过食物、生活必需品和带菌昆虫等散布，经由呼吸道、消化道和皮肤等侵入人、畜体内，造成大规模伤亡，同时可毁坏植物，该说法错误。【解析】错误25、略

【分析】【详解】

致病微生物是指可以侵犯人体，引起感染甚至传染病的微生物，包括病毒、细菌、真菌、原生动物和蠕虫等，其中以细菌和病毒的危害性最大。致病微生物可以通过空气、体液、食品、水等传播途径，从一个宿主转移到另一个宿主，致病微生物由于看不见、摸不着，难于防范，且存在传染性，因而危害极大。同时近年来由于温室效应加剧，也会使致病微生物的繁殖周期变短，可能会使危害性更大，因此我们需要积极开展科学研究，掌握防范的措施和防范，实现最好的防护，目前对致病微生物最好的防护措施还是疫苗的研究和使用。【解析】致病微生物是指可以侵犯人体，引起感染甚至传染病的微生物，包括病毒、细菌、真菌、原生动物和蠕虫等，其中以细菌和病毒的危害性最大。致病微生物可以通过空气、体液、食品、水等传播途径，致病微生物由于看不见、摸不着，难于防范，且存在传染性，因而危害极大。目前对致病微生物最好的防护措施还是疫苗的研究和使用。四、实验题(共4题，共12分)26、略

【分析】【分析】

自然界中目的菌株的筛选要根据它对生存环境的要求；到相应的环境中去寻找，要分离尿素细菌应该使用只含有尿素为唯一氮源培养基进行培养，这样的培养基其他细菌不能生存，存活下来的细菌则是可以分解尿素。

【详解】

（1）自然界中目的菌株的筛选要根据它对生存环境的要求；到相应的环境中去寻找，要获得分解尿素的细菌，应到含尿素较多的土壤中去取样，图2中培养基为微生物提供碳源的是葡萄糖，提供氮源的是尿素；

（2）甲为液体培养基；乙为固体培养基，唯一的区别在于甲培养基内无琼脂；

（3）为了保证结果的准确性；一般应选择菌落数在30-300的平板进行计数，在30-300范围内的菌落数说明稀释比较成功；

（4）酚红遇碱变红；合成的脲酶将尿素分解成氨，使培养基的碱性增强；

（5）该小组采用稀释涂布平板法统计土壤溶液中活菌的数目时；统计的菌落数比活菌的实际数目低，是因为当两个或多个菌落连在一起时，只能统计一个菌落，细菌还可以使用显微镜直接计数。

【点睛】

熟记并理解微生物的实验室培养、微生物的分离与计数等相关基础知识、形成清晰的知识网络，在此基础上从题意中提取信息并进行作答。【解析】含尿素较多的土壤中葡萄糖尿素甲中培养基无琼脂30~300的平板（则说明稀释操作比较成功）合成的脲酶将尿素分解成氨，使培养基的碱性增强低显微镜直接计数27、略

【分析】【分析】

1；果酒制作过程中的相关实验操作：

（1）材料的选择与处理：选择新鲜的葡萄；榨汁前先将葡萄进行冲洗，除去枝梗。

（2）灭菌：①榨汁机要清洗干净；并晾干；②发酵装置要清洗干净，并用70%的酒精消毒。

（3）榨汁：将冲洗除枝梗的葡萄放入榨汁机榨取葡萄汁。

（4）发酵：①将葡萄汁装人发酵瓶；要留要大约1/3的空间，并封闭充气口；②制葡萄酒的过程中，将温度严格控制在18℃～25℃，时间控制在10～12d左右，可通过出料口对发酵的情况进行，及时的监测。③制葡萄醋的过程中，将温度严格控制在30℃～35℃，时间控制在前7～8d左右，并注意适时通过充气口充气。

2；参与果醋制作的微生物是醋酸菌；其新陈代谢类型是异养需氧型，果醋制作的原理：当氧气、糖源都充足时，醋酸菌将葡萄汁中的果糖分解成醋酸；当缺少糖源时，醋酸菌将乙醇变为乙醛，再将乙醛变为醋酸。

【详解】

（1）酿造葡萄酒时；在葡萄榨汁前，葡萄要先进行进行冲洗，然后再除去枝梗，可以避免除去枝梗时引起葡萄破损，增加被杂菌污染的机会。

（2）榨汁机要清洗干净，并晾干，发酵装置要清洗干净，并用70%的酒精消毒，再装入葡萄汁，将发酵装置放在18～23℃环境中，发酵过程中由于酵母菌呼吸作用会产生二氧化碳，因此每天拧开气阀b多次；排出发酵过程产生的大量二氧化碳。装置中d处设计成弯曲形状利用了巴斯德的鹅颈瓶的原理，即为了防止排气时空气中微生物的污染。

（3）酵母菌发酵的产物中会产生酒精；利用橙色的重铬酸钾可以检测酒精的存在，酒精遇到橙色的重铬酸钾会变为灰绿色，从而鉴定酒精的存在。

（4）温度是酵母菌生长和发酵的重要条件；20℃左右最适合酵母菌繁殖，因此需要将温度控制在其最适温度范围内。而醋酸菌是嗜温菌，最适生长温度为30℃～35℃，因此要将温度控制在30℃～35℃。醋酸菌是好氧菌，在将酒精变为醋酸时需要氧的参与，因此要适时向发酵装置中充气，需要打开a阀通入空气。

【点睛】

本题考查果酒和果醋的制作过程的知识点，要求学生掌握果酒的制作的原理、过程以及发酵过程中的注意事项是该题的重点，识记果酒的制作过程是解决重点的关键。理解并识记果醋的发酵过程和原理是解决第（4）问的关键。【解析】冲洗CO2防止排气时空气中微生物的污染重铬酸钾灰绿30～35℃气阀a醋酸菌是好氧细菌，酒精转变为醋酸需要氧气才能进行28、略

【分析】【分析】

基因工程技术的基本步骤：

（1）目的基因的获取：方法有从基因文库中获取；利用PCR技术扩增和人工合成。

（2）基因表达载体的构建：是基因工程的核心步骤；基因表达载体包括目的基因；启动子、终止子和标记基因等。

（3）将目的基因导入受体细胞：根据受体细胞不同；导入的方法也不一样。将目的基因导入植物细胞的方法有农杆菌转化法；基因枪法和花粉管通道法；将目的基因导入动物细胞最有效的方法是显微注射法；将目的基因导入微生物细胞的方法是感受态细胞法。

（4）目的基因的检测与鉴定：分子水平上的检测：①检测转基因生物染色体的DNA是否插入目的基因——DNA分子杂交技术；②检测目的基因是否转录出了mRNA——分子杂交技术；③检测目的基因是否翻译成蛋白质——抗原—抗体杂交技术。个体水平上的鉴定：抗虫鉴定；抗病鉴定、活性鉴定等。

【详解】

（1）启动子是RNA聚合酶识别并结合的位点；能驱动基因的转录；如将强启动子插入到玉米叶绿体某基因内部，则会破坏该基因，获得该基因沉默（失活）突变株。为使P基因在玉米植株中超量表达，则需要强启动子和P基因不被破坏，因此应优先选用BamHⅠ和SacⅠ酶组合，将Ti质粒切开后构建重组表达载体。农杆菌中的Ti质粒上的T-DNA可转移至受体细胞，并且整合到受体细胞染色体的DNA上，因此T-DNA在该实验中的作用是将强启动子和P基因带入玉米细胞并整合到玉米细胞染色体DNA上。

（2）由图可知；G418抗性基因位于Ti质粒的T-DNA上，随T-DNA一起整合到玉米细胞染色体DNA上，因此将农杆菌浸泡过的玉米愈伤组织去菌后进行植物组织培养，培养基中需加入G418进行筛选，此物质属于氨基糖苷类抗生素，它能抑制蛋白质在叶绿体和线粒体中合成，其中叶绿体是光合作用的场所，线粒体是细胞有氧呼吸的主要场所，因此可使植物的光合作用和呼吸作用（能量代谢）受到干扰，从而引起植物细胞死亡。

（3）愈伤组织是一种相对没有分化的薄壁细胞团；经液体悬浮培养可以分散成胚性单细胞，在适宜的培养基中，这种单细胞可以发育成胚状体，再继续发育成转基因玉米株系。

（4）影响玉米愈伤组织能否成功再生出植株的因素有植物激素的配比、愈伤组织继代次数以及玉米的基因型等。目前，组织培养过程中培养瓶常用透气封口膜封口，目的是防止杂菌污染。【解析】(1)RNA聚合酶沉默##失活BamH和SacⅠ酶将强启动子和P基因带入玉米细胞并整合到玉米细胞的染色体DNA上。

(2)G418呼吸作用##能量代谢

(3)薄壁细胞胚状体。

(4)玉米的基因型防止杂菌污染29、略

【分析】【分析】

基因工程技术的基本步骤：

（1）目的基因的获取：方法有从基因文库中获取；利用PCR技术扩增和人工合成。

（2）基因表达载体的构建：是基因工程的核心步骤；基因表达载体包括目的基因；启动子、终止子和标记基因等。

（3）将目的基因导入受体细胞：根据受体细胞不同；导入的方法也不一样。将目的基因导入植物细胞的方法有农杆菌转化法；基因枪法和花粉管通道法；将目的基因导入动物细胞最有效的方法是显微注射法；将目的基因导入微生物细胞的方法是感受态细胞法。

（4）目的基因的检测与鉴