2025年人教版选择性必修3生物上册阶段测试试卷

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A.电泳技术可以用于人类亲子鉴定、生物间亲缘关系的鉴定B.图甲过程中至少需要应用到逆转录酶、DNA聚合酶、限制酶、DNA连接酶C.通过PCR技术从1个cDNA分子中特异性扩增出R蛋白基因，要得到24个不含黏性末端的R蛋白基因至少需要5次循环D.构建好的重组质粒长度共2000bp，据图乙可推测BamHⅠ在重组质粒上有3个酶切位点8、下列关于PCR技术的叙述，正确的是（）A.PCR反应体系中需要添加耐高温的解旋酶和DNA聚合酶B.PCR过程中在引物的3'端添加脱氧核苷酸实现子链延伸C.利用PCR对目的基因进行扩增时需要基因序列全部已知D.在设计两种引物时，需要让引物和引物之间的碱基序列互补评卷人得分二、多选题(共6题，共12分)9、大多数哺乳动物的早期胚胎具有调节发育的功能，去掉早期胚胎的一半，仍可以发育成一个完整的胎儿，调节能力随着发育进程逐渐减弱甚至消失。晚期桑椹胚分割后分离的卵裂球仍具有调整发育的能力，重新致密化使卵裂球重新分布而发育至囊胚。下列说法正确的是（）A.桑椹胚的每一个细胞都具有发育成完整胚胎的潜能B.桑椹胚不同部位的细胞致密化程度不同C.胚胎分割属于无性繁殖或克隆的范畴D.胚胎发育到原肠胚阶段，可将其取出向受体移植10、农杆菌Ti质粒上的T-DNA可以转移并随机插入到被侵染植物的染色体DNA中。研究者将下图中被侵染植物的DNA片段连接成环；并以此环为模板，利用PCR技术扩增出T-DNA插入位置两侧的未知序列，以此可确定T-DNA插入的具体位置。下列说法正确的是（）

A.进行PCR扩增的依据是DNA分子双链复制的原理B.进行PCR扩增需要的酶有解旋酶和热稳定DNA聚合酶C.利用图中的引物②、③组合可扩增出两侧的未知序列D.通过与受体细胞的基因组序列比对，可确定T-DNA的插入位置11、研究人员从土壤中筛选得到酵母菌纤维素酶高产菌株；并对其降解纤维素的条件进行了研究。据图分析正确的是（）

A.筛选该高产菌株需要在纤维素为唯一碳源的培养基中培养B.探究最适温度时应尽可能将发酵液的pH控制在9左右C.该酵母菌高产菌株产生纤维素酶的最适温度是35℃D.利用该高产菌株降解纤维素时需严格保持厌氧环境12、我国首例绿色荧光蛋白“转基因”克隆猪的培育过程如图所示，其中字母代表结构或生物，数字代表过程，下列相关叙述错误的是（）

A.为了①和②的顺利完成，需要用灭活的病毒对细胞进行诱导B.将C的细胞核去掉，实质上是去除纺锤体—染色体复合物C.为避免将E植入F时产生排斥反应，移植前应给F注射免疫抑制剂D.移入F的桑葚胚要经历囊胚、原肠胚等阶段才能形成猪的幼体13、科学家在蛙的核移植实验中发现，肠上皮核移植实验中有1％～2％能形成蝌蚪，囊胚核移植实验中有50％能形成蝌蚪或成蛙。下列叙述错误的是（）A.核移植得到的重组细胞须立即移植到蛙体内B.由于科技的进步，用猴进行体细胞核移植实验的成功率与用蛙的相当C.该实验说明胚胎细胞分化程度较低，全能性的表达更容易D.核移植得到的克隆蛙的遗传性状与供核蛙的完全相同14、自生固氮菌是土壤中能独立固定空气中N2的细菌，将玉米种子用自身固氮菌拌种后播种，可显著提高产量并降低化肥的使用量。科研人员进行了土壤中自生固氮菌的分离和固氮能力测定的研究，部分实验流程如图。以下叙述正确的是（）

A.步骤①土样应取自当地表层土壤；步骤③将土壤悬浮液稀释了1000倍B.自生固氮菌是自养型生物，不可用血细胞计数板来计数土壤悬浮液中的菌体数C.步骤②需充分振荡20min，主要目的是使土壤中的微生物充分释放到无菌水中D.步骤④所用的接种工具是涂布器，该选择培养基的特点是不添加氮源评卷人得分三、填空题(共9题，共18分)15、微生物________________的方法很多，最常用的是_____________和__________________。16、禁止生物武器公约。

（1）1972年4月10日，苏联、美国、英国分别在其首都签署了《禁止试制、生产和储存并销毁细菌（生物）和毒剂武器公约》（简称_____）；并于1975年3月26日生效。1984年11月15日，我国也加入了这一公约。

（2）我国在任何情况下_____、_____、_____生物武器，并反对生物武器及其技术和设备的扩散。17、DNA连接酶与DNA聚合酶作用的异同:

DNA聚合酶只能将______加到已有的核苷酸片段的末端，形成磷酸二酯键。DNA连接酶是连接_____的末端，形成磷酸二酯键。18、醋酸菌是一种____________细菌。醋酸生成反应式是_____________________。19、将DNA粗提取液在____________℃的恒温水浴箱中保温10—15分钟。20、利用DNA和蛋白质等其它成分在___________中的溶解度不同，选择适当的盐浓度就能使_______充分溶解，而使___________沉淀，或相反。21、生物武器的致病能力强、攻击范围广。它可以直接或通过食物、生活必需品和带菌昆虫等散布，经由呼吸道、消化道和皮肤等侵入人、畜体内，造成大规模伤亡，但对植物无害。（选择性必修3P111）()22、第四步：_____23、蛋白质工程在生物制药上有广泛的应用。如果已经确认某种新蛋白质可能具有特殊的抗癌功能，其氨基酸序列也已经确认，如何通过蛋白质工程生产这种新药？如果回答有困难，可以向老师请教或通过互联网查找答案。_____评卷人得分四、判断题(共4题，共16分)24、植物细胞培养的原理是植物细胞的全能性。()A.正确B.错误25、动物细胞核移植技术是将动物一个细胞的细胞核移入去核的卵母细胞中，使这个重新组合的细胞发育成新胚胎，继而发育成动物个体的技术，体现了动物细胞的全能性。（选择性必修3P52）()A.正确B.错误26、蛋白质工程是在基因工程的基础上，延伸出来的第二代基因工程。()A.正确B.错误27、生殖性克隆是指通过克隆技术产生独立生存的新个体。（选择性必修3P106）()A.正确B.错误评卷人得分五、实验题(共4题，共16分)28、被称为“水中小白鼠”的斑马鱼是一种体长4厘米左右的热带淡水鱼；与人类基因同源性高达87%，并有相似的器官；生理功能和信号通路。由于发育周期短、费用低、体外受精、透明等优点，斑马鱼现在越来越广泛地应用于毒性检测、疾病模型创制、药物筛选等领域中。

研究人员欲通过使胰岛素基因表达受阻从而构建糖尿病模型斑马鱼。吗啉反义寡核苷酸是一种RNA剪接抑制剂；通过将其注入斑马鱼受精卵可阻碍相关基因的表达。针对其作用原理，现有两种假说：

假说1：吗啉反义寡核苷酸导致RNA前体上内含子2的对应序列不能被剪切。

假说2：吗啉反义寡核苷酸导致RNA前体上内含子2和外显子3的对应序列同时被剪切。

为了验证上述假说；研究人员进行了如下实验：

(1)从受精卵发育了3天的实验组和对照组的细胞中提取总RNA，再通过逆转录获得cDNA。若假说1成立，选择上图所示引物2和引物3进行PCR后的结果为______（填字母）。A．实验组有杂交带B．实验组无杂交带C．对照组有杂交带D．对照组无杂交带(2)若要证明假说2成立，进行PCR时，需要选择上图所示引物有____________。

(3)采用PCR技术扩增DNA需要引物的原因是__________________。

(4)为了获取大量斑马鱼胚胎干细胞用于药物筛选，可加入__________________，用于分散斑马鱼囊胚中的__________________。再取分散细胞作为初始材料进行______培养，然后分瓶继续培养。培养瓶中添加输卵管上皮细胞作为______细胞，以提高斑马鱼胚胎干细胞的数量。29、苹果树腐烂病是由黑腐皮壳菌引起的；是限制苹果产量的重要因素之一。生产上主要以化学药剂防治该病。为开发生物防治途径，科研人员拟从土壤中分离筛选出能抑制黑腐皮壳菌生长的枯草芽孢杆菌，实验流程图如图1：

（1）①中木糖和硝酸钾的作用分别是______________。

（2）②→③中梯度稀释的目的是_____________________________________________。

（3）制作的平板需要倒置的目的除了防止培养基中水分过快蒸发之外，还有______________。

（4）现有经纯化后获得的4个枯草芽孢杆菌品系，为探究哪个品系对黑腐皮壳菌的抑制效果更好，科研人员在如图2平板中的A处接种黑腐皮壳菌，在距离A处等距离的B1～B4处分别接种等量的4个枯草芽孢杆菌品系，在适宜条件下培养3﹣5天后，通过观察_________________________筛选出抑菌更好的枯草芽孢杆菌菌株。

图2

（5）在利用稀释涂布平板法统计土样中活菌的数目时，为了保证结果准确，一般选择菌落数在______________的平板进行计数。该方法所得结果往往比实际细菌的数目要少，原因是__________________________________。30、两只克隆小猴“中中”和“华华”是世界首例非人灵长类动物的体细胞克隆猴；这是我国的研究成果。一年后5只世界首例生物节律紊乱的体细胞克隆猴诞生。下图为培育克隆猴的流程，回答下列问题：

(1)在“中中”“华华”之前，科学家已培育了胚胎细胞克隆猴，胚胎细胞核移植难度明显低于体细胞核移植的原因是_____。

(2)科学家首先将采集的卵母细胞培养至____期，然后去核，这里的“去核”实际上是指去除____。核移植过程中用灭活的仙台病毒进行了短暂处理，其目的是_____。形成的重构胚具有_____的能力。体外培养重构胚时，需提供适宜的营养及环境条件，推测环境条件包括_____（答出2点）。

(3)我国科研团队采集一只睡眠紊乱最明显的BMAL1基因敲除的猕猴的体细胞，通过核移植技术获得了5只克隆猴，理论上这5只克隆猴之间的细胞核基因型_____（填“相同”“不相同”或“不一定相同”）。为验证上述5只基因敲除猕猴存在昼夜节律紊乱问题，科学家用检测设备监测实验猴，通过行为学分析检测其是否明显表现出睡眠紊乱的症状，对照组的设置应为_____。在研究人类疾病致病机制、研发人类新药时，选用“模型猴”更优于“模型鼠”的原因是_____。31、我国有近一亿公顷的盐碱地，大部分植物无法在此生存，而耐盐植物藜麦却能生长。通过研究藜麦叶片结构后发现，其表皮有许多盐泡细胞，该细胞体积是普通表皮细胞的100倍以上，里面没有叶绿体，Na+和Cl-在盐泡细胞的转运如下图所示。请回答问题。

（1）据图推测，藜麦的耐盐作用机制是通过_________的方式，将Na+和Cl-运送到表皮盐泡细胞的________（细胞器）中储存起来；从而避免高盐对其他细胞的影响。

（2）下表为藜麦盐泡细胞和其他几种普通植物的叶肉细胞膜中部分蛋白的相对表达量。其中______（填下列选项字母）更可能是藜麦，理由是_______________________。

。

ABCDNa+载体蛋白812511Cl-载体蛋白2646葡萄糖转运蛋白38286668（3）藜麦根系从土壤中吸收盐分是主动运输还是被动运输？有同学设计实验进行了探究。

①实验步骤：

a．取甲、乙两组生长发育基本相同的藜麦幼苗植株，放入适宜浓度的含有Na+、Cl-的溶液中。

b．甲组给予正常的细胞呼吸条件，乙组加入______________。

c．一段时间后测定两组植株根系对Na+、Cl-的吸收速率。

②预测实验结果及结论：若乙组_______________；说明藜麦从土壤中吸收盐分的方式是主动运输。

（4）研究人员尝试将藜麦中的耐盐基因转移到其他植物体内，从而培育新型耐盐植物。若要从分子水平上检测耐盐基因是否成功转入受体细胞，请写出两种常用的检测方法_________、___________。从经济价值和生态价值角度考虑，培育耐盐植物的主要意义是_______________（写出两条）。评卷人得分六、综合题(共4题，共20分)32、下表为培养某种微生物的培养基配方，请回答有关问题：。KH2PO4Na2HPO4MgSO4·7H2O葡萄糖尿素蒸馏水1．4g2．1g0．2g10．0g1．0g定容至1000ml

(1).该培养基只允许分解尿素的细菌生长，这种培养基称为_____培养基。该培养基会抑制其它种类微生物生长，其原因是该培养基_____。

(2).若要通过统计培养基中菌落数来估计样品中的细菌数，上述培养基中还需要添加的成分是_____，接种时应采用_____法，该方法接种培养后的菌落，不可能是下图中的_____（单选）。

(3).从土壤中分离出分解尿素的细菌后，要对其作进一步的鉴定，可在上述培养基中加入_____指示剂，培养该菌后，如果指示剂变_____，可初步鉴定该种细菌能够分解尿素。33、甜瓣子是豆瓣酱的重要成分之一；其生产工艺如下图所示：

回答下面相关问题：

(1)制曲过程中，加入的蚕豆主要为米曲霉的生长提供___________营养物质。加入的蚕豆需经沸水漂烫约4min，过滤、冷却后使用，沸水漂烫和冷却的目的分别是___________。

(2)制曲时将米曲霉与蚕豆瓣混合相当于微生物培养的___________技术，主要目的是使米曲霉充分生长繁殖，并大量产生和积蓄所需要的酶。在统计米曲霉的数量以了解制曲进程时，可在显微镜下用___________直接计数；若要测定其活菌数量，可选用___________法进行计数。在制曲容器内，上层的米曲霉数量比底层的多，说明米曲霉的代谢类型是___________。

(3)待米曲霉达到一定数量后，向豆瓣曲中加入一定量盐水，开始制作酱醅，盐水的作用主要是___________（答出1点即可）。

(4)将酱醅转入发酵池进行发酵，该过程米曲霉可将蚕豆中的葡萄糖代谢为丙酮酸，在有氧条件下，丙酮酸可为该菌的生长提供___________和___________；大量分泌的蛋白酶可将蚕豆中的蛋白质分解成___________，这些因素都影响着甜瓣子的品质，从而形成独特的色香味和风味。34、分别以某种植物的绿色叶片和茎尖为材料；利用植物组织培养技术可以快速大量繁殖该植物。回答下列有关植物细胞工程的问题：

(1)以该植物的绿色叶片和茎尖作为外植体，在一定条件下进行组织培养，均能获得试管苗，上述技术依据的原理是_____。绿色叶片和茎尖相比，利用_____进行组织培养更容易获得试管苗，原因是_____。

(2)在诱导愈伤组织所用的培养基中需加入一定量的蔗糖，加入蔗糖的作用是_____。培养基中除需要加入各种营养物质外，还需要加入一定量的_____。

(3)花椰菜易受黑腐病菌的危害而患黑腐病。野生黑芥具有黑腐病抗性基因。用一定剂量的紫外线处理黑芥原生质体可使其染色体片段化；并丧失再生能力，再利用此原生质体作为部分遗传物质的供体与完整的花椰菜原生质体融合，以获得抗黑腐病杂种植株。流程如下图。

①过程①所需的酶是_____。过程②后，在显微镜下观察到杂种细胞成功融合的标志是_____。

②若要从杂种植株中筛选出具有高抗性的植株，需要对杂种植株进行_____接种实验。35、新冠病毒外壳中的5蛋白具有很强的抗原性；S蛋白与人细胞膜上ACE2受体结合后入侵人体细胞，导致人体患肺炎，抗体可阻断病毒的黏附或入侵。2021年12月8日，我国首个抗新冠病毒特效药——安巴韦单抗/罗米司韦单抗联合疗法特效药获得中国药监局的上市批准，这标志着中国拥有的首个全自主研发并证明有效的抗新冠病毒抗体特效药正式问世。回答下列问题：

(1)制备抗S蛋白单克隆抗体时，分多次间隔给小鼠注射S蛋白，能获得大量产生_________的B淋巴细胞。诱导小鼠B淋巴细胞和骨髓瘤细胞融合时，采用的诱导方法具体有_________（2点）。

(2)为选出能产生专一抗体的细胞，要从特定培养基上筛选出杂交瘤细胞，然后稀释滴入多孔培养板中，使多孔培养板每孔中_________，然后筛选出抗体检测呈_________（填“阳性”或“阴性”）的细胞进行克隆化培养；该克隆化培养细胞具有_________的特点（2点）。

(3)用抗S蛋白的单克隆抗体生产的新冠病毒抗原试纸能准确诊断出某人是否感染原因是抗S蛋白的单克隆抗体_________。

(4)鼠源单克隆抗体进入人体后，会使人体产生特异性免疫反应，导致该抗体失效。目前有多种技术可以解决抗体失效问题，如从杂交瘤细胞中提取编码鼠源单克隆抗体的_________（填“5区”或“6区”，抗体的结构如下图所示）序列的基因，与从人体中获得的编码抗体_________（填“5区”或“6区”）的基因进行拼接，然后导入骨髓瘤细胞中，进行培养获得新的抗体。

参考答案一、选择题(共8题，共16分)1、A【分析】【分析】

单克隆抗体的制备：

（1）制备产生特异性抗体的B淋巴细胞：向免疫小鼠体内注射特定的抗原；然后从小鼠脾内获得相应的B淋巴细胞。

（2）获得杂交瘤细胞。①将鼠的骨髓瘤细胞与脾细胞中形成的B淋巴细胞融合；②用特定的选择培养基筛选出杂交瘤细胞；该杂种细胞既能够增殖又能产生抗体。

（3）克隆化培养和抗体检测。

（4）将杂交瘤细胞在体外培养或注射到小鼠腹腔内增殖。

（5）提取单克隆抗体：从细胞培养液或小鼠的腹水中提取。

【详解】

A；从小鼠体内中分离获得的已免疫的B细胞；能产生抗体，但不能增殖，A错误；

B；将已免疫的小鼠的B淋巴细胞与骨髓瘤细胞融合；获得能分泌特定抗体的杂交瘤细胞的过程中至少要进行两次筛选，一次是通过选择培养基筛选出杂交瘤细胞，另一次是通过专一抗体检测筛选出能分泌特定抗体的杂交瘤细胞，B正确；

C；单克隆抗体的优点特异性强；灵敏度高，可大量制备，单克隆抗体检测草莓是否感染SCV，利用了抗原-抗体杂交的原理，C正确；

D；动物细胞培养技术是动物细胞工程技术的基础；动物细胞融合技术最重要的用途是制备单克隆抗体，D正确。

故选A。2、B【分析】【分析】

生物武器种类：包括致病菌；病毒、生化毒剂；以及经过基因重组的致病菌等。把这些病原体直接或者通过食物、生活必需品等散布到敌方，可以对军队和平民造成大规模杀伤后果。

【详解】

A；经过基因重组获得的致病菌属于生物武器的一种；A错误；

B；炭疽杆菌是一种让感染者死亡率极高的致病菌；使人具有该病菌的免疫力不是转基因技术的滥用，不属于恐怖行为，B正确；

C；把流感病毒基因改造；只会使具有某种易感基因的人群感染，属于恐怖组织的行为，C错误；

D；将生物毒素分子的基因与流感病毒的基因拼接在一起；导致毒素随着流感传播，属于恐怖组织的行为，D错误。

故选B。3、B【分析】【分析】

胚胎干细胞：（1）来源：哺乳动物的胚胎干细胞简称ES或EK细胞；来源于早期胚胎或从原始性腺中分离出来。（2）特点：具有胚胎细胞的特性，在形态上表现为体积小，细胞核大，核仁明显；在功能上，具有发育的全能性，可分化为成年动物体内任何一种组织细胞。另外，在体外培养的条件下，可以增殖而不发生分化，可进行冷冻保存，也可进行遗传改造。

【详解】

A；来源于早期胚胎或从原始性腺中分离出来；A正确；

B；胚胎干细胞在形态上表现为体积小；细胞核大，核仁明显的特点，B错误；

C；在饲养层细胞上；胚胎干细胞可维持不分化状态，C正确；

D；在ES细胞培养液中加入分化诱导因子牛黄酸或丁酰环腺苷酸等物质时；就可以诱导ES细胞向不同类型的组织细胞分化，D正确。

故选B。

【点睛】4、C【分析】【分析】

1；DNA的溶解性：（1）DNA和蛋白质等其他成分在不同浓度的NaCl溶液中溶解度不同（0.14mol/L溶解度最低）；利用这一特点，选择适当的盐浓度就能使DNA充分溶解，而使杂质沉淀，或者相反，以达到分离目的。（2）DNA不溶于酒精溶液，但是细胞中的某些蛋白质则溶于酒精。利用这一原理，可以将DNA与蛋白质进一步的分离。

2；DNA对酶、高温和洗涤剂的耐受性：蛋白酶能水解蛋白质；但是对DNA没有影响。大多数蛋白质不能忍受60-80℃的高温，而DNA在80℃以上才会变性。洗涤剂能够瓦解细胞膜，但对DNA没有影响。

3；DNA的鉴定：在沸水浴条件下；DNA遇二苯胺会被染成蓝色，因此二苯胺可以作为鉴定DNA的试剂。

【详解】

A；兔属于哺乳动物；哺乳动物成熟的红细胞中没有细胞核，细胞内不含DNA，不能用于DNA的粗提取，A错误；

B；植物材料需先用洗涤剂溶解细胞膜；B错误；

C；DNA不溶于95%的冷酒精和0.14mol/L的NaCl溶液；而溶于2mol/L的NaCl溶液，C正确；

D；将丝状物溶于2mol/L的NaCl溶液后加入二苯胺试剂；沸水浴冷却后呈蓝色，D错误。

故选C。5、C【分析】【分析】

制作果酒的菌种是酵母菌；制备果醋的菌种是醋酸菌，制备泡菜的菌种是醋酸菌；制备过程需要注意防止杂菌污染。

【详解】

A；对于生物类型来说；酵母菌属于真核生物，醋酸杆菌和乳酸菌属于原核生物，对于代谢类型来说，酵母菌代谢类型是异养兼性厌氧，醋酸菌的代谢类型是异养需氧菌，乳酸菌属于异养厌氧细菌，A错误；

B；灭菌应是杀灭物体上所有的微生物；包括芽孢和孢子，在果酒、果醋和泡菜制作时对原料只进行了清洗和消毒，没有进行灭菌，B错误；

C；不论是原核生物还是真核生物；都含有核糖体，故菌种的蛋白质合成都在自身的核糖体上进行，C正确；

D；乳酸菌代谢产物是乳酸；D错误。

故选C。

【点睛】6、D【分析】【分析】

采用PCR技术(聚合酶链式反应)扩增样品DNA的过程；第一步是是高温变性(解旋)的过程，该过程中键断裂，DNA分子解旋为单链：第二步是低温复性的过程，该过程中一对因为与模板结合形成局部双链结构：第三步是中温伸(复制)的过程。

【详解】

A；双链DNA在高温下解旋即使得DNA双链打开；破坏的是碱基对之间的氢键，磷酸二酯键没有断裂，A错误；

B；当温度降低时；引物与模板末端结合，在DNA聚合酶的作用下，引物沿模板延伸，最终合成2个DNA分子，此过程以4种氧核苷酸为原料，遵循碱基互补配对原则，单链DNA和引物结合的部分碱基序列互补，B错误；

C；以2条DNA单链为模板；以4种NTP为原料，温度下降到50℃左右，两种引物通过碱基互补配对与两条单链DNA结合合成2个新的DNA，C错误；

D、PCR的反应步骤为目的基因DNA受热变性后解链为单链，引物与单链相应互补序列结合，然后在热稳定DNA聚合酶作用下进行延伸，如此重复循环，因而每一次循环后目的基因的量可以增加一倍，即呈指数形式扩增(约为2n，其中n为扩增循环的次数；D正确。

故选D。7、C【分析】【分析】

1；图甲中①是逆转录过程；②是经过复制形成双链cDNA，③是将R蛋白基因和质粒结合形成基因表达载体，图乙是用限制酶切割后形成的电泳图。

2；PCR原理：在高温作用下；打开DNA双链，每条DNA单链作为母链，以4种游离脱氧核苷酸为原料，合成子链，在引物作用下，DNA聚合酶从引物3'端开始延伸DNA链，即DNA的合成方向是从子链的5'端自3端延伸的。实际上就是在体外模拟细胞内DNA的复制过程。DNA的复制需要引物，其主要原因是DNA聚合酶只能从3'端延伸DNA链。

3；PCR反应过程是：变性→复性→延伸。

【详解】

A；不同生物的DNA切割后长度不同；切割后再进行电泳，可以用于人类亲子鉴定、生物间亲缘关系的鉴定，A正确；

B；图甲获得重组质粒过程；需要逆转录、形成双链cDNA分子以及R蛋白基因与质粒的重组，所以至少需要应用到逆转录酶、DNA聚合酶、限制酶、DNA连接酶，B正确；

C；通过PCR技术将cDNA分子扩增成双链DNA后；若要从中特异性扩增出完整的R蛋白基因，循环3次可获得2个不含黏性末端的R蛋白基因，循环4次可获得8个不含黏性末端的R蛋白基因，循环5次可获得22个不含黏性末端的R蛋白基因，C错误；

D、用HindIII将质粒2000bp切割后形成了200bp、400bp和1400bp共3个片段，说明HindIII在重组质粒上有2个酶切位点，而用HindIII和BamHI将质粒切割后形成了200bp、420bp、560bp的片段；2000=420×2+560+200×3，所以一共形成了6个片段，因此共有5个酶切位点，因此BamHI在重组质粒上有5-2=3个酶切位点，D正确。

故选C。8、B【分析】【分析】

基因工程技术的基本步骤：

（1）目的基因的获取：方法有从基因文库中获取；利用PCR技术扩增和人工合成。

（2）基因表达载体的构建：是基因工程的核心步骤；基因表达载体包括目的基因；启动子、终止子和标记基因等。

（3）将目的基因导入受体细胞：根据受体细胞不同；导入的方法也不一样。将目的基因导入植物细胞的方法有农杆菌转化法；基因枪法和花粉管通道法；将目的基因导入动物细胞最有效的方法是显微注射法；将目的基因导入微生物细胞的方法是感受态细胞法。

（4）目的基因的检测与鉴定：分子水平上的检测：①检测转基因生物染色体的DNA是否插入目的基因--DNA分子杂交技术；②检测目的基因是否转录出了mRNA--分子杂交技术；③检测目的基因是否翻译成蛋白质--抗原-抗体杂交技术。个体水平上的鉴定：抗虫鉴定；抗病鉴定、活性鉴定等。

【详解】

A；PCR反应体系中需要添加耐高温DNA聚合酶；不需要解旋酶，A错误；

B；脱氧核苷酸链是有方向的；一端为5'端，另一端为3'端，合成子链时，引物的小段核苷酸链先与模板链配对结合，然后在引物的3'端进行子链延伸，B正确；

C；利用PCR对目的基因进行扩增时只需要知道目的基因两端的序列即可；C错误；

D；在设计两种引物时；两个引物之间的碱基序列不能配对，D错误。

故选B。二、多选题(共6题，共12分)9、A:C【分析】【分析】

当胚胎细胞数目达到32个左右时；胚胎形成致密的细胞团，形似桑椹，叫做桑椹胚；实验证实，这一阶段前的每一个细胞都具有发育成完整胚胎的潜能，属于全能细胞，这些细胞都是由受精卵经有丝分裂产生的。

【详解】

A；桑椹胚前的每一个细胞都具有发育成完整胚胎的潜能；属于全能细胞，A正确；

B；囊胚期细胞可分化内细胞团和滋养层两部分；不同部位的细胞致密化程度有差异，桑椹胚不同部位的细胞致密化程度相同，B错误；

C；胚胎分割是指采用机械方法将早期胚胎切割成2等分、4等分或8等分等；经移植获得同卵双胚或多胚的技术，胚胎分割属于无性繁殖或克隆的范畴，C正确；

D；胚胎移植一般选择桑椹胚或囊胚期进行；D错误。

故选AC。10、A:D【分析】【分析】

PCR技术：

1；概念：PCR全称为聚合酶链式反应；是一项在生物体外复制特定DNA的核酸合成技术。

2；原理：DNA复制。

3；前提条件：要有一段已知目的基因的核苷酸序以便合成一对引物。

4；条件：模板DNA、四种脱氧核苷酸、一对引物、热稳定DNA聚合酶（Taq酶）。

5；过程：①高温变性：DNA解旋过程（PCR扩增中双链DNA解开不需要解旋酶；高温条件下氢键可自动解开）；低温复性：引物结合到互补链DNA上；③中温延伸：合成子链。

【详解】

A；PCR扩增依据的是DNA分子双链复制的原理；A正确；

B；进行PCR扩增需要热稳定DNA聚合酶（TaqDNA聚合酶）；但不需要解旋酶，B错误；

C；DNA的两条链反向平行；子链从引物的3′端开始延伸，则利用图中的引物①、④组合可扩增出两侧的未知序列，C错误；

D；通过与受体细胞的基因组序列比对；即可确定T-DNA的插入位置，D正确。

故选AD。

【点睛】11、A:B【分析】【分析】

分解纤维素微生物的分离实验原理：

（1）土壤中存在着大量纤维素分解酶；包括真菌；细菌和放线菌等，它们可以产生纤维素酶。纤维素酶是一种复合酶，可以把纤维素分解为纤维二糖，进一步分解为葡萄糖使微生物加以利用，故在用纤维素作为唯一碳源的培养基中，纤维素分解菌能够很好地生长，其他微生物则不能生长。

（2）在培养基中加入刚果红；可与培养基中的纤维素形成红色复合物，当纤维素被分解后，红色复合物不能形成，培养基中会出现以纤维素分解菌为中心的透明圈，从而可筛选纤维素分解菌。

【详解】

A；筛选该高产菌株需要在纤维素为唯一碳源的培养基中培养；A正确；

B；由pH与纤维素酶活性的曲线图分析可知；当pH为9时，纤维素酶的活性最高，故在探究最适温度时应尽可能将发酵液的pH控制在9左右，B正确；

C；由温度与纤维素酶活性的曲线图分析可知；当温度为35℃时纤维素酶的活性最大，但是由于缺少35℃之后的温度实验组，故无法判断该酵母菌高产菌株产生纤维素酶的最适温度是35℃，C错误；

D；酵母菌是兼性厌氧微生物；在有氧条件下，酵母菌进行有氧呼吸，大量繁殖，故在降解初期需要给酵母菌提高有氧环境，以保证酵母菌的数量，D错误。

故选AB。

【点睛】12、A:C【分析】【分析】

分析图解，可以看出绿色荧光蛋白“转基因”克隆猪涉及了多项生物工程技术。图中B表示基因表达载体的构建；然后将目的基因导入猪胎儿的成纤维细胞，经过动物细胞培养筛选出转基因体细胞，然后该细胞的细胞核与猪的卵细胞进行细胞核移植获得重组细胞。重组细胞经过早期胚胎培养到桑椹胚或囊胚期，最后经过胚胎移植技术将早期胚胎移植到代孕母猪子宫内，最后生成转基因克隆猪。由此可见，该过程中利用基因工程、动物细胞培养、细胞核移植、早期胚胎培养和胚胎移植等技术。

【详解】

A；①是将重组DNA导入受体细胞；直接采用显微注射法，无需对受体细胞进行诱导，②过程通常是将细胞注入去核卵母细胞中，然后利用电融合法使D构建成功，A错误；

B；C是处于MⅡ期的卵母细胞；这个时期的“核”实际上是纺锤体—染色体复合物，B正确；

C；受体对移入的外来胚胎基本上不发生免疫排斥反应；因此无需给F注射免疫抑制剂，C错误；

D；移入F的通常是桑葚胚；它要经历囊胚、原肠胚阶段的发育才能成为猪的幼体，D正确。

故选AC。13、A:B:D【分析】【分析】

1.细胞核移植技术；是指将一个动物细胞的细胞核移植至去核的卵母细胞中，使其重组并发育成一个新的胚胎，这个新的胚胎最终发育为动物个体。

2.高度分化的植物细胞具有全能性；已分化的动物体细胞的细胞核具有全能性。

【详解】

A；蛙是体外受精；生殖发育过程都是在体外完成的，所以实验中用到核移植技术得到的重组细胞，不用移植到蛙体内，A错误；

B；蛙是体外受精；生殖发育过程都是在体外完成的，猴子是体内受精、体内发育的，用猴进行体细胞核移植实验的成功率与用蛙无可比性，B错误；

C；题意显示；肠上皮核移植实验中有1%～2%能形成蝌蚪，囊胚核移植实验中有50%能形成蝌蚪或成蛙，该实验说明胚胎细胞分化程度较低，全能性的表达更容易，C正确；

D；蛙的性状有些是核基因控制；有些是质基因控制，核移植得到的克隆蛙的遗传性状与供核蛙的不完全相同，D错误。

故选ABD。14、A:C:D【分析】【分析】

微生物常见的接种的方法。

（1）平板划线法：将已经熔化的培养基倒入培养皿制成平板；接种，划线，在恒温箱里培养。在线的开始部分，微生物往往连在一起生长，随着线的延伸，菌数逐渐减少，最后可能形成单个菌落。

（2）稀释涂布平板法：将待分离的菌液经过大量稀释后；均匀涂布在培养皿表面，经培养后可形成单个菌落。

【详解】

A；自生固氮菌是需氧型生物；步骤①土样应取自表层的土壤，步骤③中的稀释梯度分别为10，100，1000倍，所以土壤悬浮液稀释了1000倍，A正确；

B；自生固氮菌是异养型生物；可用血细胞计数板或稀释涂布平板法来计数土壤悬浮液中的菌体数，B错误；

C；步骤②需充分振荡20min；主要目的是使土壤中的微生物充分释放到无菌水中，C正确；

D；步骤④为稀释涂布平板法接种；所用的接种工具是涂布器，该选择培养基的特点是不添加氮源，利用的是空气中的氮气，D正确。

故选ACD。三、填空题(共9题，共18分)15、略

【解析】①.接种②.平板划线法③.稀释涂布平板法16、略

【分析】【详解】

为最大程度的保障人类权益；签署了禁止生物武器公约：

（1）《禁止试制；生产和储存并销毁细菌（生物）和毒剂武器公约》；简称《禁止生物武器公约》。

（2）我国对于生物武器的态度是在任何情况下不发展、不生产、不储存生物武器，并反对生物武器及其技术和设备的扩散。【解析】①.《禁止生物武器公约》②.不发展③.不生产④.不储存17、略

【分析】【分析】

【详解】

略【解析】单个核苷酸两个DNA片段18、略

【分析】【分析】

【详解】

略【解析】好氧C2H5OH+O2→CH3COOH+H2O19、略

【分析】【分析】

【详解】

略【解析】60—7520、略

【分析】【分析】

【详解】

略【解析】不同浓度的NaCL溶液DNA杂质21、略

【分析】【详解】

生物武器是利用生物战剂杀伤人员、牲畜、毁坏植物的武器。致病能力强、攻击范围广。它可以直接或通过食物、生活必需品和带菌昆虫等散布，经由呼吸道、消化道和皮肤等侵入人、畜体内，造成大规模伤亡，同时可毁坏植物，该说法错误。【解析】错误22、略

【分析】【分析】

【详解】

略【解析】目的基因的检测和鉴定23、略

【分析】【详解】

蛋白质工程的基本途径：从预期的蛋白质功能出发，设计预期的蛋白质结构，推测应有的氨基酸序列，找到相对应的脱氧核苷酸序列，以下按照基因工程的一般步骤进行。该蛋白质的氨基酸序列已知，因此通过蛋白质工程，生产该蛋白质新药的基本过程为：根据已知的氨基酸序列→找到相对应的脱氧核苷酸序列→合成该蛋白质新药基因→将获得的目的基因与质粒构建形成基因表达载体→将重组质粒导入受体菌→获得工程菌→生产该蛋白质新药。【解析】根据已知的氨基酸序列→找到相对应的脱氧核苷酸序列→合成该蛋白质新药基因→将获得的目的基因与质粒构建形成基因表达载体→将重组质粒导入受体菌→获得工程菌→生产该蛋白质新药四、判断题(共4题，共16分)24、B【分析】【详解】

植物组织培养是指将离体的植物器官、组织或细胞等，培养在人工配制的培养基上，给予适宜的培养条件，诱导其形成完整植株的技术，最终获得了完整的植株，体现了植物细胞的全能性，而植物细胞培养的目的使获得大量的植物细胞，从而获得次生代谢物，利用的原理是细胞增殖，故错误。25、B【分析】【详解】

动物细胞核移植技术体现了动物细胞核的全能性，不能体现动物细胞的全能性，高度分化的动物细胞的全能性受到了限制，故错误。26、A【分析】【详解】

蛋白质工程是在分子水平上通过基因修饰或基因合成来完成的，是在基因工程的基础上延伸出来的第二代基因工程。故该说法正确。27、A【分析】【详解】

生殖性克隆，即通常所说的克隆人，通过克隆技术产生独立生存的新个体，即通常所说的克隆人，该说法正确。五、实验题(共4题，共16分)28、略

【分析】【分析】

根据题干信息分析；糖尿病模型斑马鱼的构建的原理是使胰岛素基因表达受阻，而使胰岛素基因表达受阻是通过给斑马鱼受精卵注射吗啉反义寡核苷酸实线的；吗啉反义寡核苷酸是一种RNA剪接抑制剂，其作用的机理有两种假说：可能是导致RNA前体上内含子2的对应序列不能被剪切，也可能是导致RNA前体上内含子2和外显子3的对应序列同时被剪切。

(1)

根据引物2和引物3在胰岛素基因片段上的位置；通过PCR扩增能得到内含子2的序列，若假说1成立，即吗啉反义寡核苷酸导致RNA前体上内含子2的对应序列不能被剪切，故实验组中应含有内含子2的序列，而对照组的该片段被切除了，因此用引物2和引|物3进行PCR反应，其结果为实验组中有杂交带，而对照组中无杂交带。

故选AD。

(2)

若要证明假说2成立；即RNA前体上内含子2和外显子3的对应序列同时被剪切下去，则可以选择图示引物5和引物2；引物5和引物6进行PCR，观察是否有杂交带出现。

(3)

由于DNA聚合酶不能从头合成DNA；而只能从引物3′端延伸DNA链，因此DNA复制需要引物。

(4)

用胰蛋白酶处理斑马鱼囊胚中的内细胞团；可以获得分散的斑马鱼胚胎干细胞，然后对其进行原代培养，接着分瓶继续培养。培养瓶中添加输卵管上皮细胞作为饲养层细胞，以提高斑马鱼胚胎干细胞的数量。

【点睛】

解答本题的关键是掌握基因的表达的相关知识点，明确基因转录出来的mRNA是要经过加工成为成熟的mRNA才能作为翻译的模板的，并能够根据题干提取有效信息进行答题。【解析】(1)AD

(2)5、65；2

(3)DNA聚合酶不能从头合成DNA；只能从3′端延伸DNA链，因此DNA复制需要引物。（得分点：“只能从3′端延伸DNA链”）

(4)胰蛋白酶内细胞团原代饲养层29、略

【分析】【分析】

微生物的分离：①利用该分离对象对某一营养物质的“嗜好”；专门在培养基中加入该营养物质，使该微生物大量增殖。这些物质主要是一些特殊的碳源；氮源，如纤维素可用来富集纤维素分解微生物，尿素可用来富集尿素分解微生物。②利用该分离对象对某种抑制物质的抗性，在混合培养物中加入该抑制物质，经培养后，由于原来占优势的它种微生物的生长受到抑制，而分离对象却可趁机大量增殖，使之在数量上占优势。如筛选酵母菌和霉菌，在培养基中加入青霉素，因青霉素可抑制细菌和放线菌的细胞壁的合成，从而抑制两类微生物的生长，而酵母菌和霉菌正常生长增殖。

【详解】

（1）微生物的生长需要碳源；氮源、水和无机盐；①中木糖含有C、H、O元素，故能提供碳源，硝酸钾中含有N元素，可以提供氮源和无机盐。

（2）分离筛选枯草芽孢杆菌需要得到单菌落；②→③中梯度稀释的目的是将聚集在一起的微生物分散成单个细胞，从而能在固体培养基表面形成单个菌落。

（3）制作的平板需要倒置的目的除了防止培养基中水分过快蒸发之外；还可以防止冷凝水落入培养基造成污染。

（4）分析题意可知，A处接种黑腐皮壳菌，在距离A处等距离的B1~B4处分别接种等量的4个枯草芽孢杆菌品系；在适宜条件下培养3－5天，由于枯草芽孢杆菌能抑制黑腐皮壳菌生长，通过观测黑腐皮壳菌菌落的形状（黑腐皮壳菌菌落边缘与4个枯草芽孢杆菌菌落的距离），就能筛选出抑菌更好的枯草芽孢杆菌菌株。

（5）在利用稀释涂布平板法统计土样中活菌的数目时；为了保证结果准确，一般选择菌落数在30~300的平板进行计数。当两个或多个细菌连在一起时平板上观察到的只是一个菌落，故该方法所得结果往往比实际细菌的数目要少。

【点睛】

本题考查微生物的分离和计数的相关知识，意在考查考生利用所学知识解决实际问题的能力，难度中等。【解析】提供碳源，提供氮源和无机盐将聚集在一起的微生物分散成单个细胞，从而能在固体培养基表面形成单个菌落防止冷凝水落入培养基造成污染观测黑腐皮壳菌菌落的形状（黑腐皮壳菌菌落边缘与4个枯草芽孢杆菌菌落的距离）30～300当两个或多个细菌连在一起时平板上观察到的只是一个菌落30、略

【分析】【分析】

1；克隆动物概念：将动物的一个细胞的细胞核移入一个已经去掉细胞核的卵母细胞中；使其重组并发育成一个新的胚胎，这个新的胚胎最终发育成动物个体。用核移植的方法得到的动物称为克隆动物。

2；原理：动物细胞核的全能性。

3；动物细胞核移植可分为胚胎细胞核移植和体细胞核移植。体细胞核移植的难度明显高于胚胎细胞核移植。原因：动物胚胎细胞分化程度低；恢复其全能性相对容易，动物体细胞分化程度高，恢复其全能性十分困难。

【详解】

（1）体细胞分化程度高；表现全能性困难，而胚胎细胞分化程度低，表现全能性容易，因此动物体细胞核移植的难度明显高于胚胎细胞核移植。

（2）去核前应保证采集的卵母细胞在体外培养至减数分裂II中期；去核是指去除纺锤体—染色体复合物；核移植前需用灭活的仙台病毒对体细胞进行短暂处理，在此过程中，灭活的仙台病毒的作用是诱导体细胞与去核卵母细胞融合。目前动物细胞核移植技术普遍使用的去核方法是显微操作法，核移植的具体操作是将体细胞注入去核卵母细胞，从而得到重构胚，使其具有发育成完整个体的能力；体外培养重构胚时，培养液中除应含有细胞所需要的各种营养物质外，通常需要加入动物血清等一些天然成分，并将其置于含有95%空气和5%CO2混合气体的CO2培养箱中培养；培养过程中需要定期更换培养基，并创造无菌；无毒环境。胚胎移植前还需对代孕母猴进行同期发情处理，这样可以使移植的胚胎获得相同的生理环境，以保证胚胎能够继续发育。

（3）通过核移植技术获得了5只克隆猴，理论上这5只克隆猴之间的细胞核基因型相同，细胞质基因来源于受体细胞；为了验证这5只基因敲除猕猴是否存在昼夜节律紊乱问题，该实验的自变量是BMAL1基因是否敲除，因变量是是否出现睡眠紊乱症状。所以对照组的设置应为与克隆猕猴生理状态相同的正常的猕猴个体(或不存在BMAL1缺失）。在研究人类疾病致病机制、研发人类新药时，因为猴与人的亲缘关系更近，故选用“模型猴”更优于“模型鼠”。【解析】(1)胚胎细胞分化程度低；表现全能性相对容易。

(2)MⅡ纺锤体-染色体复合物诱导细胞融合发育成完整个体无菌；无毒的环境；温度、pH、渗透压，气体环境。

(3)相同与克隆猴生理状态相同的正常个体（或不存在BMAL基因缺失个体）猴与人的亲缘关系更近31、略

【分析】【分析】

物质跨膜运输的方式包括自由扩散；协助扩散、主动运输；自由扩散不需要载体和能量；协助扩散需要载体，但不需要能量；主动运输需要载体，也需要能量；自由扩散和协助扩散是由高浓度向低浓度运输，是被动运输。

【详解】

（1）由图中信息可知Na+和Cl-的运输需要借助载体蛋白；同时逆浓度梯度运输，为主动运输。钠离子和氯离子进入表皮细胞后储存在液泡中，从而避免高盐对其它细胞的影响。

（2）由题干信息可知盐泡表皮细胞吸收钠离子和氯离子；同时细胞内无叶绿体，则细胞膜表面钠离子和离子载体蛋白含里较多，由于细胞不能产生有机物供能，故所需能量只能通过其他细胞转运的葡萄糖分解提供，故葡萄糖转运蛋白含量也较多(细胞内无叶绿体，营养依靠外部细胞），所以D更可能是藜麦的盐泡细胞。

（3）①主动运输和被动运输的区别在于是否需要ATP；故ATP为自变量（细胞呼吸条件），所以甲组应给予正常呼吸条件，乙组应完全抑制其细胞呼吸；

②一段时间后观察两组植株对钠离子和氯离子的吸收速率；若乙组植株根系对钠离子；氯离子的吸收速率明显小于甲组吸收速率或基本不吸收，则说明其吸收盐分的方式为主动运输。

（4）可用DNA分子杂交技术检测目的基因是否成功转入受体细胞；如可用耐盐基因制作成的探针进行DNA分子杂交（或用该探针进行RNA分子杂交），或用基因测序法进行检测。通过大面积种植多种耐盐植物，可提高土地利用率；减缓土壤盐碱化程度；改善盐碱地的生态环境、减少温室气体的释放、提高生物多样性。

【点睛】

本题主要考查物质运输的方式，意在考查考生对各种运输方式的区分和实验的设计分析能力。【解析】主动运输液泡D三种载体蛋白的含量均相对较高。盐泡细胞从表皮细胞通过主动运输吸收大量Na+、Cl-，需要较多两种离子的载体蛋白。盐泡细胞中没有叶绿体，不能生产有机物供能，细胞所需能量只能通过其他细胞转运的葡萄糖分解提供，因此葡萄糖转运蛋白需要量也较高细胞呼吸抑制剂（或阻断ATP产生的物质）吸收速率明显小于甲组吸收速率或基本不吸收用耐盐基因制作成的探针进行DNA分子杂交（或用该探针进行RNA分子杂交）基因测序、PCR等通过大面积种植多种耐盐植物，提高土地利用率；减缓土壤盐碱化程度、改善盐碱地的生态环境、减少温室气体的释放、提高生物多样性。六、综合题(共4题，共20分)32、略

【分析】【分析】

测定微生物数量的常用方法：

（1）显微镜直接计数法。

①原理：利用特定细菌计数板或血细胞计数板；在显微镜下计算一定容积的样品中微生物的数量。

②方法：用计数板计数。

③缺点：不能区分死菌与活菌。

（2）间接计数法（活菌计数法/稀释涂布平板法）

①原理：当样品的稀释度足够高时；培养基表面生长的一个菌落来源于样品稀释液中的一个活菌。通过统计平板上的菌落数，就能推测出样品中大约含有多少活菌。

②操作：设置重复组；增强实验的说服力与准确性，同时为了保证结果准确，一般选择菌落数在30～300的平板进行计数。【小问1】

分析培养基配方可知；该培养基以尿素为唯一氮源，只允许分解尿素的细菌生长，会抑制不能分解尿素的其它种类微生物生长，因此这种培养基称为选择培养基。【小问2】

上述培养基中缺少凝固剂；为液体培养基，若要通过统计培养基中菌落数来估计样品中的细菌数，应使用固体培养基，因此在上述培养基中还需要添加琼脂。常用稀释涂布平板法来统计样品中活菌的数目。从图中信息可知，A；B、C图采用的是稀释涂布平板法，D图采用的是平板划线法，ABC错误，D正确。

故选D。【小问3】

对分离的菌种作进一步的鉴定；在以尿素为唯一氮