药品生物检定的基础知识-消毒灭菌技术

消毒灭菌技术一、基本原理§1

基本概念§2物理方法§3化学方法1.基本概念

灭菌－杀灭或除去所有微生物的繁殖体和芽胞。消毒－杀灭或除去病原微生物。消毒剂。防腐－抑制微生物的生长与繁殖。抑菌剂或防腐剂。除菌化疗无菌车间无菌操作台1.基本概念

无菌操作：防止微生物进入工作对象的方法。无菌制剂－系指采用某一无菌操作方法或技术制备的不含任何活的微生物繁殖体和芽胞的一类药物制剂。1.基本概念

2.物理方法热力灭菌法（干热灭菌、湿热灭菌）辐射灭菌法（紫外线、电离幅射、微波）滤过除菌法（除菌滤器、适用物品）其他超声波（机制：裂解细菌，主要用于粉碎细胞、提取抗原）干燥与低温抑菌(1)热力灭菌法原理使微生物蛋白质变性凝固；酶失活；微生物体内的DNA断裂。方法

干热灭菌法湿热灭菌法消毒与灭菌技术8

焚烧----最彻底的灭菌方法烧灼----直接用火焰灭菌方法如接种环、试管口、三角瓶口干烤----加热160-170℃2h

玻璃器皿、陶瓷a、干热灭菌法红外线----热效应，与干烤类似灭菌效果：可杀死营养体和芽胞干热灭菌箱9b.湿热灭菌法高压蒸汽灭菌法（热压灭菌法）最有效的湿热灭菌法121℃15-20mim（杀芽胞)煮沸消毒法水煮100℃5mim(杀繁殖体)-2h(杀芽胞)流通蒸汽消毒法巴氏消毒法间歇蒸汽灭菌法水蒸汽100℃15-30mim(杀繁殖体)反复多次流动蒸汽间歇加热灭菌(杀芽胞）较低的温度61℃30mim/71℃30s（杀致病菌）效果比干热好10消毒与灭菌技术

b.湿热灭菌法：湿热灭菌特点蒸气比热干空气穿透力强，所以灭菌效力高于干热灭菌法。灭菌效果可靠,简便、经济、易控制制剂生产中广泛可靠的灭菌方法。除对热敏感的药物外其他药物均可选用11消毒与灭菌技术

b.湿热灭菌法：热压灭菌法（高压蒸汽灭菌法高采用高压饱和蒸汽杀灭微生物，是最有效的灭菌方法115℃,70.91kPa,30min121℃，103.1kPa,15-20’培养基注射液手提式灭菌锅灭菌箱12高压蒸汽灭菌消毒与灭菌技术

b.湿热灭菌法：热压灭菌法（高压蒸汽灭菌法温度/℃压力/kPa(kg/cm2)时间/min11040.52(0.4)4011570.91(0.7)30120101.3(1.0)20125141.82(1.4)15130182.34(1,8)10热压灭菌所需温度与相当压力及时间13消毒与灭菌技术

b.湿热灭菌法：热压灭菌法（高压蒸汽灭菌法高压蒸汽灭菌常用设备手提式热压灭菌器（科研、检验、医务室）14消毒与灭菌技术

b.湿热灭菌法：热压灭菌法（高压蒸汽灭菌法）灭菌初期先排净锅内冷空气;灭菌时间：从达到规定压力和温度开始计；锅内水分要充足;灭菌物品装量不宜太满;灭菌结束需缓慢减压；灭菌结束，趁热取出物品。高压蒸汽灭菌注意事项15消毒与灭菌技术

b.湿热灭菌法：流通蒸汽灭菌法水蒸汽100℃30-60’(杀繁殖体)适用对象：不需杀死芽孢的物体的消毒。适用于一些注射剂生产，尤其是1－2ml注射剂及不耐高热的品种。若在药液中加入抑菌剂（0.1%~0.5%苯酚等），可杀死芽孢此法不能保证杀灭芽孢，因此制备过程要避免污染。16消毒与灭菌技术

b.

湿热灭菌法：低温间歇灭菌法将灭菌物体置于60~80℃

，1h后，置于20~25℃

，24h。反复三次(杀芽胞）

不宜高压灭菌的培养基不耐热的药物和营养物发酵车间的管道等中药注射剂常用该法适用对象缺点：时间长、功效低，消灭芽孢效果差17消毒与灭菌技术

b.湿热灭菌法：煮沸灭菌法煮沸灭菌法100℃5’(杀繁殖体)，2h(杀芽胞)适用对象：注射器和外科器械的消毒。18消毒与灭菌技术

b.湿热灭菌法：巴氏消毒法巴氏消毒法（杀致病菌）61℃30’或71℃15’’82℃处理4秒适用对象：奶制、果汁、酒、糖浆等食品消毒。19消毒与灭菌技术

－影响湿热灭菌的因素微生物的种类和数量蒸汽的性质（饱和蒸汽、湿饱和蒸汽、过热蒸汽）灭菌时间（灭菌温度与时间成反比）被灭菌物品的性质（所含营养、pH）高压灭菌锅消毒与灭菌技术

(2)热力法：湿热灭菌与干热灭菌的比较同一温度下，湿热灭菌比干热灭菌效果好湿热中细菌菌体蛋白较易凝固湿热的穿透力比干热大湿热的蒸汽有潜热21消毒与灭菌技术

(2)辐射灭菌波长240-300nm（254nm）杀菌机理：干扰DNA的复制与转录

特点：紫外线穿透力较弱房间静态空气消毒时剂量一般为0.1～0.4w/m2

通风管内流通空气可采用大于100w/m2的大剂量22消毒与灭菌技术

(2)辐射：紫外线灭菌法使用方法一般6－15m3房间装30w紫外灯一只；灯距地面2.5—3m温度10－55℃，湿度45﹪－60﹪应在操作前照射1－2h,操作时关闭。23消毒与灭菌技术

－辐射：紫外线灭菌法注意事项杀灭繁殖体需3~5s杀灭芽孢需10min以上紫外灯必须无尘、无油垢可在使用前照射1~2h，操作时关闭紫外灯有效使用期为3000h消毒与灭菌技术

－辐射：辐射灭菌法包括：β射线（电子束灭菌，适用薄、密度低的物料）

60Co－γ射线（同位素辐射灭菌法）杀菌机理：产生游离基,破坏DNA。特点：射线穿透力强、被灭菌物体温度变化小适用范围：一次性医用塑料制品的消毒、食品的消毒-不破坏其营养成分25消毒与灭菌技术

－辐射灭菌法特点适用于热敏性药物的灭菌；γ射线穿透力强,特别适用于已包装密封的药品消毒灭菌可防二次污染；杀菌作用可靠，广泛适用于固、液、半固体物料。有可能使药效活性降低，使用中注意安全保护。26消毒与灭菌技术

(3)滤过灭菌法指药液通过无菌滤器，除去活的和死的微生物而得到无菌滤液的方法。特点：（1)适用于很不耐热的药物溶液的除菌（2)必须无菌操作（滤球、容器、药液、环境无菌等过程）。消毒与灭菌技术

(3)滤过除菌法杀菌机理：含有微细小孔<0.22μm,只允许液体或气体及孔径<0.22μm的颗粒通过，细菌不能滤过。适用范围：血清、毒素、输液、生物制品、抗生素以及空气等的除菌。28消毒与灭菌技术

(3)滤过除菌法杀菌机理：含有微细小孔<0.22μm,只允许液体或气体及孔径<0.22μm的颗粒通过，细菌不能滤过。不能除病毒、支原体适用范围：血清、毒素、输液、生物制品、抗生素以及空气等的除菌。29消毒与灭菌技术

(3)滤过除菌法常用滤过除菌滤器微孔薄膜滤器垂熔玻璃滤器砂率棒垂熔玻璃漏洞垂熔玻璃滤球垂熔玻璃棒30过滤灭菌31消毒与灭菌技术

－物理灭菌法方法主要技术参数应用特点干热灭菌药典规定180℃，1h或160-170℃，2-4h穿透力弱，温度不易均匀，温度高，不适于大部分药品湿热灭菌热压灭菌98kPa(1kg/cm2),15-20min穿透力强，效果可靠，适用广流通蒸汽100℃，30-60min不能杀灭细菌芽胞低温间歇60-80℃，1h+室温24h，重复操作3次以上适于必须加热灭菌而又不耐高温者；时间长，效果不理想；须加抑菌剂消毒与灭菌技术

－物理灭菌法紫外线灭菌200-300nm，254nm最强用于空气灭菌和表面灭菌，效果与微生物敏感性有关，对酵母菌和霉菌力弱微波灭菌2450MHz，3-6min强热效应，快速高效，适于热不稳定者辐射灭菌γ射线60Co穿透力强不升高温度，设备费用高，辐射能引起一些药物pH值、含量、活性等改变，某些制品不宜选用β射线由电子加速器产生，穿透力弱，灭菌效果差34利用化学药物（消毒防腐剂）破坏微生物的化学组成、物理结构和生理活动，达到防腐灭菌目的。消毒与灭菌技术

2化学消毒法35促进菌体蛋白质变性凝固（酚、醇、醛、酸碱类等）干扰细菌酶系统和代谢（氧化剂、重金属盐类等）损伤细菌细胞膜，增加其通透性（表面活性剂、脂溶剂等）菌体成分氧化、水解或结构改变（氧化剂、卤素、醛、酚等）消毒与灭菌技术

3化学消毒剂作用机制36

消毒与灭菌技术

3化学消毒：气体消毒与灭菌环氧乙烷：车间、制药设备、注射器、生物制品甲醛溶液：车间、制药设备醋酸、乳酸丙二醇臭氧37消毒与灭菌技术

3化学消毒：气体灭菌法使用能形成气体或蒸汽的化学药品适用于不耐热又不能过滤的药品（混悬液、固体药物等环氧乙烷灭菌法（制药设备、注射器、生物制品）

甲醛蒸汽熏蒸灭菌法（车间、制药设备）其他蒸汽熏蒸灭菌法38灭菌物品灭菌器减压排气预热通环氧乙烷混合气体抽真空排除环氧乙烷送无菌空气消毒与灭菌技术

气体灭菌法:环氧乙烷灭菌法39消毒与灭菌技术

气体消毒与灭菌:环氧乙烷灭菌法环氧乙烷混合气体10%环氧乙烷90%二氧化碳12%环氧乙烷88%氟里昂40消毒与灭菌技术

气体灭菌法:环氧乙烷灭菌法环氧乙烷维持时间浓度450mg/L45℃维持5h浓度850~900mg/L45℃,维持3h相对湿度：40%~60%温度：22~55℃41消毒与灭菌技术

－化学消毒：浸泡与表面消毒法0.1%新洁尔灭（苯扎溴铵）0.2%—0.5%过氧乙酸2%煤酚皂溶液（来苏水）洁净区地面、门、墙、玻璃窗、天花板、清洁间水池和清洁工具的消毒70%—75%乙醇：皮肤、直接接触药物的仪器设备4243消毒与灭菌技术

̶常用的消毒防腐剂及应用类型名称及使用方法作用原理应用范围醇类70%—75%乙醇脱水、蛋白质变性皮肤、器皿醛类0.5%—10%甲醛2%戊二醛（pH=8）蛋白质变性房间、物品消毒（不适合食品厂）酚类3%—5%石炭酸2%来苏儿（煤酚皂）3%—5%来苏儿破坏细胞膜、蛋白质变性地面、器具皮肤地面、器具氧化剂0.1%高锰酸钾3%过氧化氢0.2%—0.5%过氧乙酸氧化蛋白质活性基团，酶失活皮肤、水果、蔬菜皮肤、物品表面水果、蔬菜、塑料等44类型名称及使用方法作用原理应用范围重金属盐类0.05%—0.1%升汞2%红汞0.1%—1%硝酸银0.1%—0.5%硫酸铜蛋白质变性、酶失活变性、沉淀蛋白蛋白质变性、酶失活非金属器皿、体温计皮肤、粘膜、伤口皮肤、新生儿眼睛防治植物病害表面活性剂0.05%—0.1%新洁尔灭（苯扎溴铵）0.05%—0.1%杜灭芬蛋白变性、破坏细胞膜皮肤、粘膜、器械皮肤、金属、棉织品、塑料消毒与灭菌技术

̶常用的消毒防腐剂及应用45类型名称及使用方法作用原理应用范围卤素及其化合物0.2—0.5mg/L氯气10%—20%漂白粉0.5%—1%漂白粉2.5%碘酒破坏细胞膜、蛋白质饮水、游泳池水地面水、空气等皮肤染料2%—4%龙胆紫与蛋白质的羧基结合皮肤、伤口酸类

0.1%苯甲酸

0.1%山梨酸食品防腐食品防腐消毒与灭菌技术

̶常用的消毒防腐剂及应用二、实验器材

溶液和试剂：牛肉膏、蛋白胨、NaCl、可溶性淀粉、KNO3、K2HPO4·3H2O、MgSO4·7H2O、FeSO4·7H2O、KH2PO4、葡萄糖、孟加拉红（1%的水溶液）、链霉素（1%的水溶液）、1mol/LNaOH、1mol/LHCl。仪器和其他用品：试管、三角烧瓶、烧杯、量筒、玻璃棒、培养基分装器、天平、牛角匙、高压蒸汽灭菌锅、pH试纸（pH5.5～9.0）、棉花、牛皮纸（或铝箔）、记号笔、麻绳和纱布等。三、操作步骤

高压蒸汽灭菌法具体操作步骤：

1、将配制好的培养基按要求包扎好。

2、标记：班级、组别、培养基名称、配制时间

3、检查高压锅外锅水位是否合适、密封是否完好。

4、将欲灭菌的物品放置于内锅中，小能太挤。

5、加盖并拧紧螺旋。

6、加热：打开源开关，开始通电。

7、排冷空气：温度上升至105℃时，打开放气阀，放出冷空气，待压力降至0，此为第一次放气完成。继续加热。当温度再次上升至105℃时，实施第二次放气重复第一次放气步骤。

8、继续加热至0.llMlPa，121.3℃，开始计时并控制温度，维持30min。

9、灭菌时间到达后，关闭电源停止加热，使压力自然降至零，

10、打开盖，小心取出灭菌好的物品。液体培养基、半固体培养直立放置，需要斜面放置倾斜30。，需要倒半板的培养基，待冷却至40-60℃时倒半板。

消毒与灭菌技术

一、

基本概念二、

物理方法三、

化学方法消毒－杀灭或除去病原微生物。灭菌－杀灭或除去所有微生物的繁殖体和芽胞。防腐－抑制微生物的生长与繁殖。抑菌剂或防腐剂。除菌:用冲洗、过滤等机械手段除去微生物的方法。无菌操作：防止微生物进入工作对象的方法。一、基本概念二、物理灭菌法热力灭菌法（干热灭菌、湿热灭菌）辐射灭菌法（紫外线、电离幅射、微波）滤过除菌法（除菌滤器、适用物品）其他超声波（机制：裂解细菌，主要用于粉碎细胞、提取抗原）干燥与低温抑菌

焚烧----最彻底的灭菌方法烧灼----直接用火焰灭菌方法如接种环、试管口、三角瓶口干烤----加热160-170℃2h

玻璃器皿、陶瓷1、干热灭菌法红外线----热效应，与干烤类似灭菌效果：可杀死营养体和芽胞2.湿热灭菌法高压蒸汽灭菌法（热压灭菌法）最有效的湿热灭菌法121℃15-20mim（杀芽胞)煮沸消毒法水煮100℃5mim(杀繁殖体)-2h(杀芽胞)流通蒸汽消毒法巴氏消毒法间歇蒸汽灭菌法水蒸汽100℃15-30mim(杀繁殖体)反复多次流动蒸汽间歇加热灭菌(杀芽胞）较低的温度61℃30mim/71℃30s（杀致病菌）效果比干热好湿热灭菌特点蒸气比热干空气穿透力强，所以灭菌效力高于干热灭菌法。灭菌效果可靠,简便、经济、易控制制剂生产中广泛可靠的灭菌方法。除对热敏感的药物外其他药物均可选用

－湿热灭菌法：热压灭菌法（高压蒸汽灭菌法）高采用高压饱和蒸汽杀灭微生物，是最有效的灭菌方法115℃,30min121℃,15-20min培养基注射液手提式灭菌锅灭菌箱

－湿热灭菌法：热压灭菌法（高压蒸汽灭菌法）灭菌初期先排净锅内冷空气;灭菌时间：从达到规定压力和温度开始计；锅内水分要充足;灭菌物品装量不宜太满;灭菌结束需缓慢减压；灭菌结束，趁热取出物品。高压蒸汽灭菌注意事项

－热力灭菌法：湿热灭菌与干热灭菌的比较同一温度下，湿热灭菌比干热灭菌效果好湿热中细菌菌体蛋白较易凝固湿热的穿透力比干热大湿热的蒸汽有潜热

辐射灭菌法̶非电离辐射：紫外线波长240-300nm（254nm）杀菌机理：干扰DNA的复制与转录

特点：紫外线穿透力较弱房间静态空气消毒时剂量一般为0.1～0.4w/m2

通风管内流通空气可采用大于100w/m2的大剂量

辐射灭菌法̶非电离辐射：紫外线一般6－15m3房间装30w紫外灯一只；灯距地面2.5—3m温度10－55℃，湿度45﹪－60﹪应在操作前照射1－2h,操作时关闭。

辐射灭菌法：非电离辐射：紫外线杀灭繁殖体需3~5s杀灭芽孢需10min以上紫外灯必须无尘、无油垢可在使用前照射1~2h，操作时关闭紫外灯有效使用期为3000h辐射灭菌法特点适用于热敏性药物的灭菌；γ射线穿透力强,特别适用于已包装密封的药品消毒灭菌可防二次污染；杀菌作用可靠，广泛适用于固、液、半固体物料。有可能使药效活性降低，使用中注意安全保护。滤过灭菌法指药液通过无菌滤器，除去活的和死的微生物而得到无菌滤液的方法。特点：（1)适用于很不耐热的药物溶液的除菌（2)必须无菌操作（滤球、容器、药液、环境无菌等过程）。滤过除菌法杀菌机理：含有微细小孔<0.22μm,只允许液体或气体及孔径<0.22μm的颗粒通过，细菌不能滤过。不能除病毒、支原体适用范围：血清、毒素、输液、生物制品、抗生素以及空气等的除菌。利用化学药物（消毒防腐剂）破坏微生物的化学组成、物理结构和生理活动，达到防腐灭菌目的。三、化学消毒法气体灭菌法使用能形成气体或蒸汽的化学药品适用于不耐热又不能过滤的药品（混悬液、固体药物等环氧乙烷灭菌法（制药设备、注射器、生物制品）

甲醛蒸汽熏蒸灭菌法（车间、制药设备）其他蒸汽熏蒸灭菌法浸泡与表面消毒法0.1%新洁尔灭（苯扎溴铵）0.2%—0.5%过氧乙酸2%煤酚皂溶液（来苏水）洁净区地面、门、墙、玻璃窗、天花板、清洁间水池和清洁工具的消毒70%—75%乙醇：皮肤、直接接触药物的仪器设备药品生物检定技术的基本操作提纲一、药品微生物检定技术的基本程序二、常用仪器三、无菌操作四、消毒灭菌（一）采样

药品微生物检定的采样除了与理化分析法的抽样一样，遵循随机、客观、均匀、合理的抽样原则外，还必须对抽样过程实施有效防止微生物污染的措施，以保证微生物检测结果的代表性、真实性和有效性。为此，采样应由专门的无菌采样员或微生物检验员进行具体的采样工作或实施采样的监管工作。一、药品微生物检定技术的基本程序（二）样品检验前处理