2025年人教B版选择性必修3生物上册阶段测试试卷

…………○…………内…………○…………装…………○…………内…………○…………装…………○…………订…………○…………线…………○…………※※请※※不※※要※※在※※装※※订※※线※※内※※答※※题※※…………○…………外…………○…………装…………○…………订…………○…………线…………○…………第=page22页，总=sectionpages22页第=page11页，总=sectionpages11页2025年人教B版选择性必修3生物上册阶段测试试卷28考试试卷考试范围：全部知识点；考试时间：120分钟学校：______姓名：______班级：______考号：______总分栏题号一二三四五六总分得分评卷人得分一、选择题(共9题，共18分)1、已知从脾脏中获取的B淋巴细胞包括两大类；一类是能产生抗体的浆细胞，另一类是不能产生抗体的B淋巴细胞。在单克隆抗体制备过程中，骨髓瘤细胞和B淋巴细胞诱导融合后，先用特定的选择培养基筛选出杂交瘤细胞。在这种培养基上不能存活；增殖的细胞有（）

①B淋巴细胞②骨髓瘤细胞③B淋巴细胞自身融合④骨髓瘤细胞自身融合⑤骨髓瘤细胞与B淋巴细胞融合⑥骨髓瘤细胞与浆细胞融合A.①②③④B.①②③④⑤C.①③D.①②④⑤2、下列关于生殖性克隆人的叙述，正确的是（）A.生殖性克隆人可以丰富人类基因的多样性B.可以运用重组DNA技术进行生殖性克隆人研究C.虽然生殖性克隆人存在伦理问题，但克隆技术已经成熟D.我国政府不赞成、不允许、不支持、不接受任何生殖性克隆人实验3、对微生物的基因改造是基因工程中研究最早、最广泛和取得实际应用成果最多的领域，关于其原因的描述，不正确的是（）A.微生物具有生理结构和遗传物质简单的优点B.微生物具有生长繁殖快的优点C.微生物具有适应性强、对环境因素不敏感的优点D.微生物具有容易进行遗传物质操作的优点4、平板划线法和稀释涂布平板法是常用的两种接种方法。下列相关叙述中错误的是（）A.平板划线法要求要连续多次划线，且除了第一次划线外，每一次划线的起点都是上一次划线的终点B.除了第一次划线需要将接种环灼烧灭菌外，以后的划线可以不用灭菌C.如果菌液本来浓度不高，则可以适当降低稀释倍数D.充分稀释和连续划线的目的都是为了使形成的菌落是由单一的细菌细胞繁殖而成5、爱德华兹因体外受精技术获得2010年诺贝尔生理学或医学奖，被誉为“试管婴儿之父”。下列相关说法错误的是（）A.收集的精子需诱导获能后才能用于体外受精B.采集来的初级卵母细胞可以直接用于体外受精C.早期胚胎植入子宫后需对母体进行妊娠检查D.试管婴儿技术解决了某些不孕夫妇的生育问题6、下列有关基因工程的叙述，正确的是（）A.基因工程所用的工具酶是限制酶和DNA聚合酶B.在重组质粒构建时只能用一种酶切割质粒和目的基因C.选用细菌作为重组质粒的受体细胞是因为细菌繁殖快D.只要目的基因进入了受体细胞就能成功地实现表达7、两种生物之间存在着天然的生殖隔离，用传统的有性杂交的方法很难得到杂种后代。经过长期的实验，科学家采用体细胞杂交的方法得到了两种植物的杂种植物，如图是植物体细胞杂交方法的流程图。下列有关说法错误的是（）

A.图中由B细胞获得B原生质体需要使用纤维素酶和果胶酶去除植物细胞的细胞壁B.杂交过程的关键是原生质体的融合，可以使用离心法、聚乙二醇融合法等方法来诱导C.若提供B细胞的植株都为二倍体，则图中杂种植株也为二倍体且是可育的D.图中培养愈伤组织发育为杂种植株的培养基中，需要加入蔗糖和一些植物激素等8、转基因抗虫棉的培育，番茄－马铃薯的创造，单克隆抗体的制备，同卵双胎依次所属的生物工程技术为（）A.基因工程、胚胎工程、细胞工程、基因工程B.细胞工程、细胞工程、胚胎工程、细胞工程C.基因工程、细胞工程、细胞工程、胚胎工程D.细胞工程、基因工程、基因工程、胚胎工程9、将某病毒的外壳蛋白（L1）基因与绿色荧光蛋白（GFP）基因连接；构建L1-GFP融合基因，再将融合基因与质粒连接构建下图所示表达载体。图中限制酶E1～E4处理产生的黏性末端均不相同。下列叙述错误的是（）

A.构建L1-GFP融合基因需要用到限制酶有E1、E2、E4B.E1、E4双酶切确保L1-GFP融合基因与载体的正确连接C.GFP可用于检测受体细胞中目的基因是否表达D.培育乳汁中含L1的转基因羊需将表达载体转入乳腺细胞评卷人得分二、多选题(共9题，共18分)10、我国研究人员创造出一种新型干细胞——异种杂合二倍体胚胎干细胞；具体研究过程如下图所示，下列叙述正确的是（）

A.单倍体囊胚1最可能是由卵子发育预带的，单倍体ES应取自囊胚的内细胞团B.培养液中除了需要加入血清等营养物质，还需要加入抗生素等消灭病毒C.体外培养条件下ES细胞可以增殖而不发生分化D.ES细胞在形态上表现为体积大、细胞核小、核仁明显11、从胰岛素依赖型糖尿病患者的骨髓中分离骨髓间充质干细胞（MSC），诱导分化成胰岛样细胞，再导入该患者体内。放射性免疫分析结果表明诱导的胰岛样细胞团可以正常分泌胰岛素，患者的血糖恢复正常。下列说法正确的是（）A.培养骨髓间充质干细胞的培养液通常需加入血清B.在体外连续培养时，利用胰蛋白酶将接触抑制的骨髓间充质干细胞分开C.在功能上，骨髓间充质干细胞具有发育的全能性D.治疗成功后，康复者的血型有可能发生改变12、根据某基因上游和下游的碱基序列；设计合成了用于该基因PCR的两段引物（单链DNA）。引物与该基因变性DNA（单链DNA）结合为双链DNA的过程称为复性。下图是两引物的Tm（引物熔解温度，即50%的引物与其互补序列形成双链DNA分子时的温度）测定结果，以下分析正确的是（）

A.两引物分别与DNA的两条互补单链结合，是子链延伸的起点B.PCR过程中，复性温度应低于引物的Tm值以提高PCR效率C.若两引物的脱氧核苷酸数相同，推测引物2的（G＋C）含量较高D.适当减少引物2的脱氧核苷酸数，可使其Tm值接近引物113、将单克隆抗体与前体药物的专一性活化酶藕联（简称抗体导向酶偶联）是特异性治疗肿瘤并减少对正常细胞伤害的最新研究方向。碱性磷酸酶是抗肿瘤药物多柔比星前体的专一性活化酶，医学研究中利用抗体导向酶偶联机理将碱性磷酸酶与单克隆抗体制成“生物导弹”，通过活化多柔比星使其对DNA造成损伤，进而抑制以DNA为模板进行的生理活动，达到治疗肿瘤的目的。下列说法正确的是（）A.为获得单克隆抗体应首先给小白鼠注射肿瘤细胞表面抗原，得到能产生特定抗体的B淋巴细胞B.制备单克隆抗体的过程中至少要经过两次原理和目的均不同的筛选过程C.生物导弹综合利用了碱性磷酸酶的定向制导作用和单克隆抗体的特异性杀伤能力D.多柔比星只作用于有增殖能力的细胞14、生长图形法是一种测定微生物营养需求的简便方法。为探究某嗜热菌所需生长因子的种类；研究小组把该菌的悬浮液与不含任何生长因子但含有其他必需营养物质的培养基混合后倒成平板，然后在平板上划分数区，将甲；乙、丙三种生长因子分别添加到不同区域，培养结果如图所示，下列说法正确的是（）

A.倒成平板后直接培养可判断有无污染B.倒成平板后需要进行灭菌处理C.图示结果表明该菌需要生长因子乙或丙D.生长图形法还可用于某些菌种的筛选15、下列关于植物基因工程应用的说法，正确的是（）A.将某种含必需氨基酸多的蛋白质导入植物体中以提高该植物体内氨基酸的含量B.植物基因工程可用来培育高产、稳产、品质优良和抗逆性强的作物C.利用基因工程可以改造植物细胞的基因，使其能够生产人类所需要的药物D.通过植物基因工程培育的抗虫植物必然可以抗病毒16、利用胶体金检测技术检测抗原最常用的是双抗夹心法。双抗夹心法需要准备待测抗原的配对抗体；一个抗体用胶体金标记（即胶体金标记抗体）并固定在结合垫上，另一个抗体固定在NC膜的检测线（T线）上。另外，还需要准备能与金标抗体特异性结合的二抗并固定于NC膜的控制线（C线）上，如图所示。下列说法错误的是（）

A.样品中含有待测抗原时，T线和C线均会显色B.图中的抗体都需要与抗原结合C.结合垫是为了固定金标抗体D.若T线不显色说明检测结果无效17、如图为烟草植物组织培养过程的流程图。下列有关叙述错误的是（）

A.对过程①获取的根组织块应做较彻底的灭菌处理B.过程②应根据要求使用适宜的培养基，在避光的环境中进行C.过程③发生脱分化，其实质是基因的选择性表达D.定向诱导X细胞可得到有利的突变体18、图甲为培育转基因生物时选用的载体，图乙是含有目的基因的一段DNA序列，图中标注了相关限制酶的酶切位点。下列叙述错误的是（）

A.若通过PCR技术提取该目的基因，应该选用引物a和引物cB.构建表达载体时应选用BamHⅠ和HindⅡ这两种限制酶C.图乙中一个DNA分子在PCR仪中经过四轮复制得到所需目的基因的分子数为8个D.只利用含四环素的培养基就可以直接筛选出成功导入表达载体的受体细胞评卷人得分三、填空题(共8题，共16分)19、在课题1中，我们学习了稀释涂布平板法。这一方法常用来统计样品中_________________的数目。当样品的稀释度足够高时，____________________。20、人们按照微生物对营养物质的不同需求，配制出供其生长繁殖的营养基质一一培养基。其中，配制成的_______________的基质称为液体培养基，配制成的固体状态的基质称为________________________。在液体培养基中加入凝固剂_______________________后，制成琼脂固体培养基，它是实验室中最常用的培养基之一。微生物在_________________培养基表面生长，可以形成肉眼可见的菌落。（琼脂是一种从红藻中提取的____________________。琼脂在98℃以上熔化，在44℃以下凝固，在常规培养条件下呈现固态。）21、载体具备的条件：①_____。②具有一至多个限制酶切点，供外源DNA片段插入。③______。22、为了避免外源DNA等因素污染，PCR实验中使用的微量离心管、枪头、缓冲液以及蒸馏水等在使用前必须进行_____________。而使用的缓冲液并在__________℃存储。23、DNA的粗提取实验中，如果实验材料是非哺乳动物如鸡血细胞，需要在鸡血细胞中加入一定量的____________，如果实验材料是植物细胞，需要先使用_______________溶解细胞膜。24、细胞产物的工厂化生产。

组织培养技术除了在农业上的应用外，还广泛应用于另一个重要的领域，即______。25、应用：______（微型繁殖、作物脱毒、神奇的人工种子）、______、细胞产物的工厂化生产。26、动物细胞培养的条件：_____、_____、_____、_____等。评卷人得分四、判断题(共3题，共21分)27、酿酒酵母的最适生长温度为30度。()A.正确B.错误28、对微生物的基因改造是基因工程中研究最早、最广泛和取得实际应用成果最多的领域，是因为微生物具有生理结构和遗传物质简单、生长繁殖快、对环境因素敏感和容易进行遗传物质操作等优点。（选择性必修3P101）()A.正确B.错误29、“设计试管婴儿”与“试管婴儿”相比在植入前需要对胚胎进行遗传学诊断。()A.正确B.错误评卷人得分五、实验题(共2题，共18分)30、（1）在大肠杆菌培养过程中，除考虑营养条件外，还要考虑______、______和渗透压等条件。由于该细菌具有体积小、结构简单、变异类型容易选择、______、______等优点；因此常作为遗传学研究的实验材料。

（2）在微生物培养操作过程中，为防止杂菌污染，需对培养基和培养皿进行________（消毒、灭菌）；操作者的双手需要进行清洗和______；静止空气中的细菌可用紫外线杀灭，其原因是紫外线能使蛋白质变性，还能__________。

（3）若用稀释涂布平板法计数大肠杆菌活菌的个数，要想使所得估计值更接近实际值，除应严格操作、多次重复外，还应保证待测样品稀释的_______。

（4）通常，对获得的纯菌种还可以依据菌落的形状、大小等菌落特征对细菌进行初步的____________。

（5）培养大肠杆菌时，在接种前需要检测培养基是否被污染。对于固体培养基应采用的检测方法是_________。

（6）若用大肠杆菌进行实验，使用过的培养基及其培养物必须经过_______处理后才能丢弃，以防止培养物的扩散。31、黏多糖贮积症是由IDUA基因突变导致的遗传病。科研人员对此病的治疗进行相关研究。

(1)黏多糖贮积症患者细胞中IDUA基因由于碱基对___________造成突变，转录出的mRNA长度不变但提前出现终止密码子，最终导致合成的IDUA酶分子量___________；与正常IDUA酶的空间结构差异显著而失去活性，积累过多的黏多糖无法及时清除，造成人体多系统功能障碍。

(2)抑制性tRNA（sup-tRNA）与普通tRNA的结构、功能相同，但它的反密码子可以与终止密码子配对。在上述这一类突变基因的翻译过程中，加入sup-tRNA可以发挥的作用是___________；从而诱导通读获得有功能的全长蛋白。

(3)不同的sup-tRNA可以携带不同氨基酸；为比较它们的通读效果，科研人员进行了相关研究，实验结果如图。

注：“-”代表未加入。

据图分析，实验组将___________基因导入受体细胞，并采用___________技术检测导入基因的表达情况。据结果分析，携带酪氨酸的sup-tRNA能___________。

(4)科研人员利用携带酪氨酸的sup-tRNA对IDUA突变基因纯合小鼠及IDUA基因敲除小鼠进行治疗，检测肝脏细胞IDUA酶活性和组织黏多糖的积累量，与不治疗的小鼠相比较，实验结果为_____________，表明携带酪氨酸的sup-tRNA可以治疗黏多糖贮积症。评卷人得分六、综合题(共3题，共15分)32、类胡萝卜素具有抗癌；降血脂等多种生物学功能。P蛋白是催化类胡萝卜素形成的关键酶；研究者从裙带菜中克隆了P基因，按下图所示流程进行基因工程操作。

（1）研究者从裙带菜中提取了总RNA，利用逆转录方法获得_________（作为模板），设计特异性_________，利用PCR技术扩增得到P基因。将P基因与质粒载体重组时，需要使用的酶包括_________。流程图中①_______菌，②_________技术。

（2）随机选取9株转基因苗，利用PCR、电泳检测的结果如图2，分析结果说明没有成功转入P基因的植株是_________。检测P基因的mRNA相对含量，结果如图3，研究者选择转基因烟草植株2进行后续研究，请说明理由_________。

（3）同学A说：“因为大肠杆菌菌落本身无色，所以可以通过观察菌落颜色，检测P基因在工程菌株1中是否表达”。你是否同意他的说法，请说明理由___________。

（4）请预期基因工程菌株1的可能应用___________。33、2020年诺贝尔化学奖授予“CRISPR/Cas9基因编辑技术”的发明者；以表彰他们在基因组编辑领域的贡献。CRISPR/Cas9基因编辑技术能对基因进行定点编辑，其原理是由一条单链向导RNA（sgR-NA）引导核酸内切酶Cas9到一个特定的基因位点进行切割（如图）。回答下列问题：

(1)CRISPR复合体中的sgRNA的主要功能是_____，Cas9蛋白催化断裂的化学键位于_____之间。若采用基因工程的方法获得Cas9蛋白，构建重组质粒需要的酶是_____。

(2)一般来说，在使用CRISPR/Cas9基因编辑系统对不同基因进行编辑时，应使用Cas9和_____（填“相同”或“不同”）的sgRNA进行基因的相关编辑。

(3)若将CRISPR/Cas9基因编辑技术培育转基因生物，与传统的基因工程相比，其明显优点是_____。

(4)通过上述介绍，你认为CRISPR/Cas9基因编辑技术在_____（写出两点）等方面有广阔的应用前景。34、犬细小病毒（CPV）主要感染幼犬；传染性极强，死亡率也高。利用小鼠制备抗CPV单克隆抗体的基·本流程如图所示。回答下列问题：

(1)制备单克隆抗体依赖的生物学技术有__________和__________。步骤①中，用灭活的CPV免疫小鼠需要在一定时间内间隔注射3次，其目的是___________。

(2)经过步骤②后获得的是多种类型的杂交细胞，原因是__________。对杂交细胞用特定的选择培养基进行筛选得到杂交瘤细胞，对杂交瘤细胞进行__________；经过多次筛选才能获得足够数量的能分泌抗CPV抗体的细胞。

(3)体外培养杂交瘤细胞后从培养液中提取到抗CPV单克隆抗体。杂交瘤细胞的培养液中有各种营养物质，还需要添加__________以补充细胞生长所需的未知营养物质。

(4)对疑似感染CPV的幼犬进行确诊时，可用获得的抗CPV单克隆抗体进行___________检测。参考答案一、选择题(共9题，共18分)1、A【分析】【分析】

单克隆抗体的制备过程中；要经过两次筛选，第一次筛选是为了获得杂交瘤细胞，需要用到特定的选择培养基，第二次筛选是为了得到能产生所需要的特异性抗体的杂交瘤细胞。

【详解】

在单克隆抗体制备过程中；骨髓瘤细胞和B淋巴细胞诱导融合后，先用特定的选择培养基筛选出杂交瘤细胞，在这种培养基上不能存活；增殖的细胞有：未融合的细胞，同种核相融合的细胞，即①B淋巴细胞、②骨髓瘤细胞、③B淋巴细胞自身融合、④骨髓瘤细胞自身融合均不可存活，而⑤骨髓瘤细胞与B淋巴细胞融合、⑥骨髓瘤细胞与浆细胞融合属于杂交瘤细胞，能在特定的选择培养基上存活、增殖。

故选A。

【点睛】

解答本题的关键是明确单克隆抗体的制备过程，以及两次筛选的目的。2、D【分析】【分析】

1；生殖性克隆就是以产生新个体为目的克隆。即用生殖技术制造完整的克隆人。目的是产生一个独立生存的个体。于此相对的是治疗性克隆；指的是产生研究所用的克隆细胞，不产生可独立生存的个体。

2；中国政府禁止生殖性克隆人；坚持四不原则(不赞成、不允许、不支持、不接受任何生殖性克隆人实验)不反对治疗性克隆人。

【详解】

A；生殖性克隆人属于无性繁殖；不能丰富人类基因的多样性，A错误；

B；生殖性克隆人采用的技术有核移植和胚胎移植；不涉及重组DNA技术，B错误；

C；克隆技术不成熟；也存在伦理问题，C错误；

D；我国政府不赞成、不允许、不支持、不接受任何生殖性克隆人实验；D正确。

故选D。3、C【分析】【分析】

对微生物的基因改造是基因工程中研究最早；最广泛和取得实际应用成果最多的领域；这是因为微生物具有生理结构和遗传物质简单、生长繁殖快、对环境因素敏感和容易进行遗传物质操作等优点。

【详解】

A；微生物具有生理结构和遗传物质简单的优点；便于研究，A正确；

B；微生物的生长周期短；具有生长繁殖快的优点，B正确；

C；微生物对环境因素敏感；如在某种抗生素的环境中不能生存，C错误；

D；微生物的遗传物质简单；具有容易进行遗传物质操作的优点，D正确。

故选C。4、B【分析】微生物常见的接种的方法①平板划线法：将已经熔化的培养基倒入培养皿制成平板；接种，划线，在恒温箱里培养。在划线的开始部分，微生物往往连在一起生长，随着线的延伸，菌数逐渐减少，最后可能形成单个菌落。

②稀释涂布平板法：将待分离的菌液经过大量稀释后；均匀涂布在培养皿表面，经培养后可形成单个菌落。

【详解】

A；平板划线法要求要连续多次划线；且除了第一次划线外，每一次划线的起点都是上一次划线的终点，逐步稀释成单个菌，A正确；

B；接种环每次使用前都要进行灼烧灭菌；B错误；

C；如果菌液本来浓度不高；则可以适当降低稀释倍数，C正确；

D；充分稀释和连续划线的目的都是为了使形成的菌落是由单一的细菌细胞繁殖而成；D正确。

故选B。

【点睛】5、B【分析】【分析】

受精是精子与卵子结合形成合子(即受精卵）的过程；包括受精前的准备阶段和受精阶段。在自然条件下，哺乳动物的受精在输卵管内完成。

【详解】

A；收集的精子需诱导获能后才能与成熟的卵细胞体外受精；A正确；

B；采集来的初级卵母细胞需要进一步成熟后；才能用于体外受精，B错误；

C；早期胚胎植入子宫后需对母体进行妊娠检查；以便确认胚胎成功着床，C正确；

D；试管婴儿技术通过体外受精；解决了某些不孕夫妇的生育问题，D正确。

故选B。6、C【分析】【分析】

基因工程是将目的基因在体外接入基因表达载体；然后导入活细胞，并在活细胞中表达该基因，以改变生物原有的遗传特性；获得新品种、生产新产品的遗传技术。限制酶能够识别双链DNA分子的某种特定核苷酸序列，并且使每一条链中特定部位的两个核苷酸之间的磷酸二酯键断裂，DNA连接酶能在两个DNA片段之间形成磷酸二酯键，DNA聚合酶是用来将单个脱氧核苷酸连接起来形成脱氧核糖核酸链，是DNA复制需要的酶，基因工程所用的工具酶是限制酶和DNA连接酶；

【详解】

A；基因工程所用的工具酶是限制酶和DNA连接酶；A错误；

B；构成重组质粒的限制酶并不一定只能用一种酶切割质粒和目的基因；为防止出现自身环化，需要尽量用两种限制酶切割质粒和目的基因，B错误；

C；选用细菌作为重组质粒的受体细胞是因为细菌繁殖快；并且遗传物质少，C正确；

D；目的基因导入受体细胞后需要检测和鉴定；不一定能成功实现表达，D错误。

故选C。7、C【分析】【分析】

植物的体细胞杂交是将不同植物的细胞通过细胞融合技术形成杂种细胞；进而利用植物的组织培养将杂种细胞培育成多倍体的杂种植株。植物体细胞杂交依据的原理是细胞膜的流动性和植物细胞的全能性。

【详解】

A；获得原生质体需要去掉植物的细胞壁；植物细胞壁主要由纤维素和果胶组成，所以需要使用纤维素酶和果胶酶，A正确；

B、杂交过程的关键是原生质体的融合，人工诱导原生质体融合的方法有物理法（电融合法、离心法等）和化学法（聚乙二醇融合法、高Ca2+—高pH融合法等）；B正确；

C；若提供A、B细胞的植株都为二倍体；则图中杂种植株应该为异源四倍体且是可育的，C错误；

D；培养愈伤组织发育为杂种植株的培养基为MS培养基；MS培养基中需要加入蔗糖和一些植物激素（主要是生长素和细胞分裂素）等，D正确。

故选C。8、C【分析】【分析】

1；基因工程又叫DNA重组技术；是指按照人们的意愿，进行严格的设计，并通过体外DNA重组和转基因等技术，赋予生物以新的遗传特性，从而创造出更符合人们需要的新的生物类型和生物产品。

2；细胞工程包括植物细胞工程和动物细胞工程；植物细胞工程包括植物组织培养和植物体细胞杂交等技术，动物细胞工程包括动物细胞培养、动物细胞融合和单克隆抗体的制备等。

3；胚胎工程包括胚胎移植、体外受精、胚胎分割、胚胎干细胞等技术。

【详解】

抗虫棉的培育采用了基因工程技术；番茄－马铃薯的创造采用了细胞工程中的体细胞杂交技术；单克隆抗体的制备采用了动物细胞融合和动物细胞培养技术；属于细胞工程；胚胎分割技术属于胚胎工程。C正确。

故选C。

【点睛】9、D【分析】【分析】

限制酶的选择依据：（1）根据目的基因两端的限制酶切点确定限制酶的种类：①应选择位于目的基因两端的限制酶；②不能选择目的基因内部的限制酶。（2）根据质粒的特点确定限制酶的种类：①通常选择与切割目的基因相同的限制酶；以确保出现相同的黏性末端；②在只有一种标记基因时，选择的限制酶不能破坏标记基因。

【详解】

A；构建L1-GFP融合基因需要先用内切酶处理获得L1基因和GFP基因；并将二者连接，故需要用到E1、E2、E4三种酶，A正确；

B；图中限制酶E1—E4处理产生的黏性末端均不相同；E1、E4双酶切可以有效减少载体自身连接和融合基因自身连接，保证L1-GFP融合基因与载体准确连接，B正确；

C；绿色荧光蛋白（GFP）在紫外光或蓝光激发下会发出绿色荧光；这一特性可用于检测细胞中目的基因的表达，C正确；

D；为了获得L1蛋白；可将表达载体转入受精卵中而不是乳腺细胞，用于培育乳汁中含有L1蛋白的转基因羊，D错误。

故选D。二、多选题(共9题，共18分)10、A:C【分析】【分析】

分析题图：小鼠的卵细胞体外培养到囊胚时期；取内细胞团细胞培养成孤雌单倍体ES细胞，取大鼠的精子体外培养到囊胚时期，取内细胞团细胞培养成孤雄单倍体ES细胞，两种ES细胞融合成异种杂合二倍体胚胎干细胞，据此答题。

【详解】

A；图中的单倍体囊胚1最可能是由小鼠的卵子（卵细胞）发育而来；所采用的技术应为早期胚胎培养技术，图中的单倍体ES应取自囊胚的内细胞团细胞，该部位的细胞具有发育的全能性，A正确；

B；培养过程中使用的培养液除含有一些无机盐和有机盐外；还需添加维生素、激素、氨基酸、核苷酸等营养成分以及血清等物质，为避免杂菌污染，需要加入抗生素，B错误；

CD；ES在形态上表现为体积小、细胞核大、核仁明显；且在体外培养时可以维持只增殖不分化的状态，C正确、D错误。

故选AC。11、A:B【分析】【分析】

动物细胞培养的原理利用的是细胞的增殖；培养过程需要无毒无菌的环境；充足的营养、适宜的温度和pH以及适宜的气体环境。

【详解】

A；细胞体外培养所需的营养物质与体内基本相同；需要加入血清，以补充培养基中缺乏的物质，A正确；

B；在体外连续培养时；常采用胰蛋白酶或者胶原蛋白酶将细胞分开，B正确；

C；骨髓间充质干细胞可以分化成胰岛样组织细胞；但没有发育成一个完整的个体人，不能说明其具有发育的全能性，C错误；

D；由于导入的是胰岛样细胞；与血型无关，治疗成功后康复者的血型不可能发生改变，D错误。

故选AB。12、A:B:C:D【分析】【分析】

分析曲线图：引物2的Tm高于引物1；说明引物2的热稳定性较高。

【详解】

A；PCR过程是目的基因DNA受热变性后解链为单链；引物与单链互补结合，合成的子链在Taq聚合酶的作用下进行延伸，所以两引物分别与DNA的两条互补单链结合，是子链延伸的起点，A正确；

B；PCR过程中；复性温度应低于引物的Tm值以提高PCR效率，B正确；

C；DNA含有的氢键数越多；其热稳定性越高，而A和T碱基对间有两个氢键，C和G碱基对间有三个氢键，曲线图显示：引物2的Tm高于引物1，说明引物2的热稳定性较高，因此若两引物的脱氧核苷酸数相同，推测引物2的（G＋C）含量较高，C正确；

D；适当减少引物2的脱氧核苷酸数；会降低引物2的热稳定性，可使其Tm值接近引物1，D正确。

故选ABCD。13、A:B【分析】【分析】

单克隆抗体的制备。

（1）制备产生特异性抗体的B淋巴细胞：向免疫小鼠体内注射特定的抗原；然后从小鼠脾内获得相应的B淋巴细胞。

（2）获得杂交瘤细胞。①将鼠的骨髓瘤细胞与脾细胞中形成的B淋巴细胞融合。②用特定的选择培养基筛选出杂交瘤细胞；该杂种细胞既能够增殖又能产生抗体。

（3）克隆化培养和抗体检测。

（4）将杂交瘤细胞在体外培养或注射到小鼠腹腔内增殖。

（5）提取单克隆抗体：从细胞培养液或小鼠的腹水中提取。

【详解】

A；单克隆抗体制备过程中；需要给小白鼠注射肿瘤细胞表面抗原，刺激小鼠产生体液免疫，才能得到能产生特定抗体的B淋巴细胞，A正确；

B；制备单克隆抗体的过程中至少要经过两次原理和目的均不同的筛选过程；第一次筛选杂交瘤细胞，第二次筛选能产生特异性抗体的杂交瘤细胞，B正确；

C；生物导弹综合利用了单克隆抗体的定向制导作用和碱性磷酸酶的特异性杀伤能力；C错误；

D；根据题干信息“通过活化多柔比星使其对DNA造成损伤；进而抑制以DNA为模板进行的生理活动”，说明多柔比星还可以抑制细胞的转录过程，而不增殖的细胞也具有转录过程，D错误。

故选AB。14、A:D【分析】【分析】

培养基的概念及营养构成。

（1）概念：人们按照微生物对营养物质的不同需求；配制出的供其生长繁殖的营养基质。

（2）营养构成：各种培养基一般都含有水；碳源、氮源、无机盐；此外还要满足微生物生长对pH、特殊营养物质以及氧气的要求．例如，培养乳酸杆菌时需要在培养基中添加维生素，培养霉菌时需将培养基的pH调至酸性，培养细菌时需将pH调至中性或微碱性，培养厌氧微生物时则需要提供无氧的条件。

【详解】

A；平板上不含任何生长因子；若倒成平板后直接培养，出现菌落说明已被杂菌感染，因为该嗜热菌不能在缺乏生长因子的培养基中生长，A正确；

B；制备平板时；先灭菌再倒平板，B错误；

C；图中菌落生活在乙丙区域之间；说明同时需要乙和丙，C错误；

D；不同菌种所需生长因子不同；可利用生长图形法筛选菌种，D正确。

故选AD。15、B:C【分析】【分析】

基因工程是指按人们的意愿；进行严格的设计，并通过体外重组DNA分子和转基因技术，获得人们需要的新的生物类型和生物产品。其基因改变的方向是认为决定的。

【详解】

A；科学家将必需氨基酸含量多的的蛋白质相关基因导入植物中；或者改变这些氨基酸合成途径中某种关键酶的活性，以提高氨基酸的含量，A错误；

B；可以将某些比如抗逆性、高产等基因导入植物体内；培育出高产、稳产、品质优良和抗逆性强的作物，B正确；

C；利用基因工程可以改造植物细胞的基因；使其能够生产人类所需要的药物，比如紫草宁等药品，C正确；

D；用基因工程培育的抗虫植物只含有抗虫特性；但不能抗病毒，D错误。

故选BC。16、B:D【分析】【分析】

T线和C线处同时显示横杠；即阳性，若样品中不含病毒，样品经过结合垫时由于不存在病毒抗原，则不存在抗原抗体特异性结合，显色组分仍会随样品继续向前运动，由于不存在病毒抗原，抗体不能与待测抗原结合，故在T线不会显色。

【详解】

A；分析题图可知；若有抗原存在，T线上的抗体能够结合抗原（该抗体经过结合垫时已经与胶体金抗体结合），则T线显色，过量的胶体金抗体会移动到C线处与二抗结合，C线也会显色，故样品中含有待测抗原时，两条线均会显色，A正确；

B；题图中过量的胶体金抗体没有结合抗原；而是与二抗结合，B错误；

C；据题意可知；样本中含有某种抗原，就会首先被结合垫上的胶体金标记抗体结合，形成“抗原—金标抗体”复合物，所以结合垫中固定了金标抗体，C正确；

D；若T线不显色；说明样品中没有抗原，D错误。

故选BD。17、A:C:D【分析】分析题图：图示表示烟草植物组织培养过程的流程图；其中①表示获取外植体，②表示脱分化，③表示再分化，④表示从愈伤组织中获取细胞X，⑤表示进一步发育形成幼苗。

【详解】

A；对过程①获取的根组织块应进行消毒处理；如果采用灭菌技术，会使根组织块失去活力，无法进行组织培养，A错误；

B；过程②是脱分化形成愈伤组织的过程；需要在避光的环境中进行，B正确；

C；过程③发生再分化；其实质是基因的选择性表达，C错误；

D；可以通过诱导使细胞产生突变；但突变是不定向的，D错误。

故选ACD。18、B:D【分析】【分析】

分析题图：构建表达载体时；不能选用限制酶BamHⅠ，否则会导致两种抗性基因都被破坏，因此应该选择Bc1I和HindⅢ这两种限制酶，根据引物的延伸方向，所用的引物为图乙中引物a和引物c。

【详解】

A；PCR技术要求两种引物分别和目的基因的两条单链结合；根据引物的延伸方向，所用的引物为图乙中引物a和引物c，A正确；

B；根据图甲可知；BamHⅠ会导致两种抗性基因都被破坏，同时为防止目的基因自身环化，因此只能选BclI和HindⅢ两种限制酶切割，B错误；

C；图乙中一个DNA分子在PCR仪中经过四轮复制可得到16个DNA片段；其中所需目的基因的分子数为8个，C正确；

D；由于选择BclI和HindⅢ这两种限制酶；破坏了氨苄青霉素抗性基因，但没有破坏四环素抗性基因，因此应该先用含四环素的培养基筛选出含有基因表达载体和普通质粒的大肠杆菌，再用含氨苄青霉素的培养基筛选含重组质粒的大肠杆菌，培养基加氨苄青霉素含普通质粒的大肠杆菌能生存，而含重组质粒的不能生存，从而筛选出成功导入表达载体的受体细胞，D错误。

故选BD。三、填空题(共8题，共16分)19、略

【解析】①.活菌②.培养基表面生长的一个菌落，来源于样品稀释液中的一个活菌20、略

【解析】①.液体状态②.固体培养基③.琼脂④.固体⑤.多糖21、略

【分析】【分析】

【详解】

略【解析】能在受体细胞中复制并稳定保存具有标记基因，供重组DNA的鉴定和选择22、略

【分析】【分析】

【详解】

略【解析】高压灭菌—2023、略

【分析】【分析】

【详解】

略【解析】蒸馏水洗涤剂和食盐24、略

【分析】【分析】

【详解】

略【解析】细胞产物的工厂化生产。25、略

【分析】【分析】

【详解】

略【解析】植物繁殖的新途径作物新品种的培育（单倍体育种、突变体利用）26、略

【分析】略【解析】营养无菌、无毒的环境适宜的温度、pH和渗透压气体环境四、判断题(共3题，共21分)27、B【分析】【详解】

酿酒酵母的最适生长温度是28℃；但在发酵过程中，一般将温度控制在18-30℃，这是因为果皮表面附着的野生酵母菌可能有多种（有多种酵母菌参与了发酵过程），从实践的角度看，大致控制温度范围比较简单易行。

故本说法错误。28、A【分析】【详解】

微生物具有生理结构和遗传物质简单的优点，便于研究，生长周期短，具有生长繁殖快的优点，遗传物质简单，具有容易进行遗传物质操作的优点，对环境因素敏感，因此对微生物的基因改造是基因工程中研究最早、最广泛和取得实际应用成果最多的领域，这句话是正确的。29、A【分析】【分析】

“设计试管婴儿”在植入前需要对胚胎进行遗传学诊断；而“试管婴儿”是解决不孕不育等问题，不需要进行遗传学诊断。

【详解】

“设计试管婴儿”与“试管婴儿”相比在植入前需要通过多种技术手段对胚胎进行遗传学诊断；以便选择合适的设计出来的试管婴儿。

故正确五、实验题(共2题，共18分)30、略

【分析】【分析】

1；大肠杆菌属于细菌；是原核生物。微生物营养成分主要有碳源、氮源、水和无机盐等，另外还需要注意渗透压、温度、pH等条件。大肠杆菌常作为遗传学研究的实验材料．微生物培养的关键是无菌技术，防止外来杂菌的污染。

2；微生物培养的关键是无菌操作。使用强烈的理化因素杀死物体内外一切微生物的细胞、芽孢和孢子的过程称为灭菌；常用的方法有灼烧灭菌、干热灭菌和高压蒸汽灭菌。消毒是指用较为温和的物理或化学方法仅杀死物体体表或内部的一部分微生物的过程。常用的方法有煮沸消毒法、巴氏消毒法、紫外线或化学药物消毒法等。

【详解】

（1）大肠杆菌具有体积小；结构简单、变异类型容易选择、易培养、生活周期短等优点；培养过程中，除考虑营养条件外，还要考虑温度、酸碱度和渗透压等条件。

（2）灭菌使用强烈的理化因素杀死物体内外所有的微生物；所以对培养基和培养皿进行灭菌；消毒使用较为温和的物理或化学方法，仅杀死物体表面或内部一部分对人体有害的微生物，操作者的双手需要进行清洗和消毒，紫外线能使蛋白质变性，还能损伤DNA的结构。

（3）稀释涂布平板法是将菌液进行一系列的梯度稀释；然后将不同稀释度的菌液，分别涂布到琼脂固体培养基的表面进行培养，应保证样品稀释的比例适合。

（4）对获得的纯菌种还可以依据菌落的形状；大小等菌落特征对细菌进行初步的鉴定。

（5）培养大肠杆菌时；在接种前需要检测培养基是否被污染。对于固体培养基应采用的检测方法是将未接种的培养基在适宜的温度下放置适宜的时间，观察培养基上是否有菌落产生。

（6）因为有的大肠杆菌会释放一种强烈的毒素；并可能导致肠管出现严重症状，使用过的培养基及其培养物必须经过灭菌处理后才能丢弃，以防止培养物的扩散。

【点睛】

本题主要考查微生物培养的相关知识，要求考生能够识记大肠杆菌的培养条件以及其作为遗传实验的优点，区分掌握不同材料消毒和灭菌的方法，识记菌种鉴定的方法等，属于基础题。【解析】①.温度②.酸碱度③.易培养④.生活周期短⑤.灭菌⑥.消毒⑦.损伤DNA的结构⑧.比例合适⑨.鉴定(或分类)⑩.将未接种的培养基在适宜的温度下放置适宜的时间，观察培养基上是否有菌落产生.⑪.灭菌31、略

【分析】【分析】

基因突变是指DNA分子中发生碱基对的替换；增添和缺失；而引起的基因结构的改变。翻译是指在核糖体上，以mRNA为模板、以氨基酸为原料合成蛋白质的过程，该过程还需要tRNA来运转氨基酸。

密码子由位于mRNA上决定一个氨基酸的三个相邻的碱基组成。终止密码子的作用是终止翻译过程。

基因工程中检测目的基因在受体细胞内是否成功表达可以用抗原-抗体杂交技术。

【详解】

（1）由题干信息可知；黏多糖贮积症患者细胞中IDUA基因突变后，转录出的mRNA长度不变，说明其没有发生碱基对的增添和缺失，因为这两者改变会导致转录出的mRNA长度改变，因此推测其基因突变是由于碱基对替换。由于终止密码子提前出现，导致翻译提前终止，肽链变短，IDUA酶分子量变小，空间结构改变而失活。

（2）由题干可知；抑制性tRNA（sup-tRNA）可以最终诱导核糖体通读mRNA上的遗传信息合成具有功能的全长蛋白，并且抑制性tRNA（sup-tRNA）与普通tRNA的结构；功能相同，据此推测该抑制性tRNA可以携带氨基酸至核糖体并与终止密码子碱基配对使翻译过程继续。

（3）本实验目的是比较携带不同氨基酸的sup-tRNA的通读效果；需要保证实验组细胞含有突变IDUA基因，即其不能合成具有正常功能的IDUA酶（防止正常IDUA酶对实验结果产生干扰），同时保证在不同的实验组细胞中可以转录出携带不同中氨基酸的sup-tRNA，因此实验组中受体细胞中应该含有导入携带不同氨基酸的sup-tRNA基因和突变IDUA基因。若要判断各个实验组细胞中携带不同氨基酸的sup-tRNA是否成功诱导了具有功能的IDUA酶，可以采用该酶的特异性抗体对其进行检测，即进行抗原-抗体杂交。分析题图可知，与对照组（含正常IDUA基因的组）相比，含携带酪氨酸的sup-tRNA的受体细胞中表达的全长IDUA蛋白量比其他实验组都多，说明其能有效恢复细胞中全长IDUA蛋白的合成，且效果最好。

（4）由以上实验可知，携带酪氨酸的sup-tRNA能有效诱导核糖体对突变IDUA基因转录出的mRNA进行通读，进而产生具有正常功能的IDUA酶，因此利用携带酪氨酸的sup-tRNA对IDUA突变基因纯合小鼠进行治疗，与不进行治疗的IDUA突变基因纯合小鼠相比，治疗组小鼠的IDUA酶活性高，组织黏多糖积累量少；同时，利用携带酪氨酸的sup-tRNA对IDUA基因敲除小鼠进行治疗，与不进行治疗的IDUA基因敲除小鼠相比，由于二者都不含有IDUA基因，则其细胞内都没有相应mRNA，因此携带酪氨酸的sup-tRNA无法发挥作用，最终导致治疗组与不治疗组的IDUA酶活性与组织黏多糖积累量无明显差异。【解析】(1)替换减少。

(2)识别终止密码子并携带氨基酸至核糖体使翻译过程继续。

(3)携带不同氨基酸的suptRNA基因和变IDUA抗原一抗体杂交恢复细胞中全长IDUA蛋白的合成；且效果最好。

(4)IDUA突变基因纯合小鼠IDUA酶活性高，组织黏多糖积累量少；IDUA基因敲除小鼠IDUA酶活性与组织黏多糖积累量无明显差异六、综合题(共3题，共15分)32、略

【分析】【分析】

基因工程技术的基本步骤：（1）目的基因的获取：方法有从基因文库中获取；利用PCR技术扩增和人工合成。（2）基因表达载体的构建：是基因工程的核心步骤；基因表达载体包括目的基因、启动子、终止子和标记基因等。（3）将目的基因导入受体细胞：根据受体细胞不同，导入的方法也不一样．将目的基因导入植物细胞的方法有农杆菌转化法、基因枪法和花粉管通道法；将目的基因导入动物细胞最有效的方法是显微注射法；将目的基因导入微生物细胞的方法是感受态细胞法。（4）目的基因的检测与鉴定：分子水平上的检测：①检测转基因生物染色体的DNA是否插入目的基因--DNA分子杂交技术；②检测目的基因是否转录出了mRNA--分子杂交技术；③检测目的基因是否翻译成蛋白质--抗原-抗体杂交技术．个体水平上的鉴定：抗虫鉴定、抗病鉴定、活性鉴定等。

【详解】

（1）逆转录是以RNA为模板；形成DNA的过程，研究者从裙带菜中提取了总RNA，利用逆转录方法获得CDNA，设计特异性引物，利用PCR技术扩增得到P基因。将P基因与质粒载体重组时，需要使用的酶包括限制酶和DNA连接酶，流程图中①农杆菌，流程②是植物组织培养技术。

（2）从图上可以看出；1和4电泳没有条带，说明没有成功转入P基因的植株。植株2的P基因转录量（mRNA相对含量）最高，推测可能合成的P蛋白最多，所以选择转基因烟草植株2进行后续研究。

（3）同意；若工程菌的菌落颜色为黄色（或橙黄色），则表明P基因编码的P蛋白发挥了催化形成类胡萝卜素的功能