流式细胞术简介课件

流式细胞术简介

张林西

生命科学研究中心流式细胞术简介0Background流式细胞术简介流式细胞术（FlowCytometry，FCM）是70年代发展起来的一种快速对单细胞定量分析和分选的新技术，能定量分析细胞的生物化学成分。其检测速度之快、统计学精度之高，是其他的方法无可比拟的。可同时从一个细胞中测得多种参数（如DNA、RNA、蛋白质、细胞体积等）进行多参数分析，为细胞生物学和生物医学的研究提供了强有力的手段。在80年代，流式细胞术已经广泛应用于基础和临床医学的研究，使之成为切实可行的有效的研究方法。流式细胞术简介FCM在医学领域中得到广泛推广应用。例如在免疫学、细胞遗传学、肿瘤学、病理学、放射生物学等学科。并形成了独特的学科分支，诸如流式免疫学、流式遗传学、流式病理学、流式细胞酶学等。近年来，随着科学技术的发展，多种新的荧光探针的不断出现，使FCM技术的应用范围不断扩大，特别是各种各样的荧光探针标记的单克隆抗体和其它蛋白质的出现，为FCM研究各种组织细胞膜和细胞内抗原、肿瘤性蛋白等开辟了新途径。新的肿瘤标志物的不断出现，大大提高了FCM在医学领域的的研究水平。其发展速度之快，应用层出不穷。流式细胞术简介

FCM是集现代电子物理技术、激光技术、电子计算机技术和流体力学等于一身的高科技仪器，开创了荧光技术的又一个崭新的领域。近年来，此项技术发展十分迅速。具有更高灵敏度、更高分辨率、双激光、多荧光参数分析的仪器不断问世，并在朝着经济实用、操作简便、小巧精制、自动化程度高的方向发展。确信，流式细胞分析技术进一步与其它技术的结合，将极大的推动生物医学的发展。流式细胞术简介流式细胞术简介流式细胞术简介流式细胞术简介流式细胞术简介FirstcommercialFCM流式细胞术简介流式细胞术简介流式细胞术简介流式细胞术简介流式细胞术简介FCMpapers流式细胞术简介一、流式细胞仪

品牌、型号简介流式细胞术简介1.BD(BecktonDickinson)公司▲1973年第一台：FACS

I（FluorescenceActivatedCellSorter）▲1980年中国第一台：FACSII▲市场占有率：全球75%，中国70%

2.BeckmanCoulter公司：逐年增多趋势??？流式细胞仪主要厂商流式细胞术简介荧光激活细胞分选仪（Fluorescenceactivatedcellsorter,FACS）名称介绍

流式细胞仪的发展，从开始的设想到第一台仪器的问世，经历了几十年的时间。随着现代激光技术、电子检测技术和电子计算机技术的迅速发展，该技术在近些年来有了迅速的发展，成为目前比较完善的细胞分析工具。

流式细胞术简介1.临床型（台式机）特点：光路调节系统固定，自动化程度高，操作简便，易掌握2.科研型（大型机）特点：分辨率高，选配多种波长和类型激光器，可感兴趣细胞分选到特定培养孔或板上，适用于科研。新型仪器特点：仪器选2-4根激光，可检测13种荧光参数，15种参数。适用于高速分选和多色分析。自动化程度很高，提高工作效率。流式细胞仪分类：流式细胞术简介FACSAnalyzerFACSⅡFACSⅢFACS420,440FACSstarFACScanFACSstar+FACSsortFACSVantageFACSCaliburFACSVantageSEBDLSRⅠFACSVantageDiVaBDLSRⅡFACSAriaFACScanto流式细胞计的进展B-D公司流式细胞计系列流式细胞术简介EPICSXL/XL-MCL台式机

CytomicsTMFC500系列——最新型EPICSAltra细胞分选仪——大型科研型

Coulter公司不同型号流式细胞仪流式细胞术简介流式细胞术简介FACSCaliburLSRIIFACSAriaFACSCountFACSVantage&DiVaFACSCantoBD公司不同型号流式细胞仪流式细胞术简介FACSCalibur(单激光）流式细胞术简介FACSCalibur流式细胞术简介BDFACSCaliburSystem

流式细胞术简介本仪器系统（TheBDFACSCaliburTMsystem）是BD公司的另一个第一：唯一的四色、双激光台式机，可进行细胞分析及分选。特别为更大范围的应用而设计。本仪器是一个完全的同时进行多参数分析系统。本仪器系统结合了唯一的双激光技术、自动化的上样功能及强大的软件，可满足临床实验室高度工作效率的需要。本系统的可调节及创新性技术还可以为研究者提供广泛的研究需要及灵活型需求。本仪器能够满足目前的临床及研究需求。它的灵活性可达到你将来的需求。流式细胞术简介本系统：容纳3色或4色荧光BDFACStationTM

数据管理系统灵活性及可升级性流式细胞术简介BDLSR流式细胞术简介BDLSRIISystem流式细胞术简介本仪器系统（TheBDLSRII）可最多配置4根激光、具有检测高达18色的能力。本仪器可配置488nm,405nm,633nm,and355nmUV激光。本仪器核心是新的数字化电子元件。本电子元件在16,384分散水平可数字化信号达到1千万次／秒，这样扩大了通道处理能力及增加了检测的敏感性。电子死亡时间被消除了，可进行更精确的荧光测量。这样增进了荧光测量线性、补偿及量化。BDLSRIISystem高达18色检测；数字化获取及分心系统；灵活性及将来的可升级性。激光选择:355nmUV,405nm,633nm流式细胞术简介BDFACSArrayBioanalyzerSystem流式细胞术简介BDFACSArrayBioanalyzerSystem:快速的微量滴定板sampler*

6参数检测（包括散射光及荧光）；直观的软件系统；数字化信号处理，可高达15,000／秒。台式组合结构。流式细胞术简介BDFACSCanto™Tomorrow’sflowcytometer...today!

流式细胞术简介BDFACSCanto™flowcytometerBD公司自从1974年第一台商用流式细胞仪问世一直致力于流式细胞仪的创新。BDFACSCanto™benchtopflowcytometer继承了这个传统。它的主要特这是：1.真6色容纳能力——从少量的样品量中获取每个细胞更多的信息。2.敏感性(<50MESFPE,<100MESFFITC*)——解决最微弱的events。3.快速(10,000events/sec)—加速稀少事件的获取。4.Lowcarryover(<0.1%)—使样品污染最小化。5.更换透镜键盘化—不用工具更换滤光片。6.Fixedopticalalignment—免除用户调节。7.日常管理自动化—为科研节约更多时间。流式细胞术简介流式细胞术简介流式细胞术简介流式细胞术简介流式细胞术简介流式细胞术简介BDFACSVantageSEflowcytometrysystem流式细胞术简介BDFACSVantageSEflowcytometrysystemHigh-performance,high-speedcellsorterTheBDFACSVantageTMSEflowcytometrysystemisthesuperiorcell-sortinginstrumentfortheresearchlaboratory.Forover25years,BDcellsortershavebeenthegoldstandardandarefoundinleadinguniversity,pharmaceutical,andbiotechnologyresearchfacilitiesthroughouttheworld.流式细胞术简介Tomeettheresearchdemandsoftoday,wehaveimprovedtheBDFACSVantageTMandaddedoptionsthatcustomizeit.TheresultistheBDFACSVantageSE,aflowcytometerthatperformswithmaximumflexibilityandreliability.Allofthistechnologyisaccessiblethroughafamiliaruserinterfaceandefficientergonomicdesign.TheBDFACSVantageSEflowcytometrysystemisfullymodular,fortheneedsoftodayandbeyond.多色分析及分选；BDFACStationTMSystem数据管理系统；灵活性及可升级性；非矩形分选窗口。流式细胞术简介FACSVantageDiVa流式细胞术简介FACSAria流式细胞术简介流式细胞术简介TheBDFACSAriaTMcellsortersetsanewstandardforhighperformanceflowcytometry.

Basedonarevolutionarynewdesignininstrumentation,thiseasy-to-usebenchtopsystemdelivershigh-speedsortingandmulticoloranalysis.

TheBDFACSAriainstrumentisthefirstbenchtopsorterthatincorporatesafixed-alignmentcuvetteflowcell.

Thisnewflowcellprovidessuperiorfluorescencesensitivity.

Thefixedopticalsystemoffersfreedomfrominstrumentmaintenanceandalignment.

SortsetupandsortmonitoringfeaturesinthesystemsoftwaremaketheBDFACSAriainstrumenteasytouse.

BDTMAccuDropisintegratedintothesystemforquickandaccuratedrop-delaydetermination.

Streammonitoring

ofthebreakoffpointandclogdetectionareincorporatedforwalkawaysorting.流式细胞术简介·

第一个benchtop高速分选仪，有固定的线性流动细胞杯；·

Cuvette（小杯）flowcell更好的荧光敏感性；·

多至空气制冷的3根激光（488-nm,633-nm,and407-nm波长）；·

数字化获取速率高达70,000events/second；·

多色分析，最多可达到15个参数；·

2路和4路批量分选装置；·

OptionalBDTMAutomatedCellDepositionUnit(ACDU)用来进行分选到BDMultiwellTM

板或光镜的载玻片上；

·

可获得的气雾剂管理选择（Available

BDTM）；·

无需特别的设备。流式细胞术简介FCM自动细胞分离器流式细胞术简介BDFACS™LyseWashAssistant

withLargerTankIVD流式细胞术简介FeaturesoftheBDFACS™Lyse/WashAssistantwithLargerTankOption（特点）：·Lyses（溶解）·Mixes（混合）·Washes（洗涤）·Incubates（孵育）·Fixes（固定）·RemovesRBCs,hemoglobin,platelets,andunboundantibody（去除红细胞、血红蛋白、血小板和未结合的抗体）。·Savesvaluabletimewhencomparedtomanualmethod（与手工方法比较，节省大量宝贵时间）。·Processesfourfullloaderracks(160samples)withouthavingtochangefluids（处理160份样本而不用更换液体）。流式细胞术简介TheBDFACS™Lyse/WashAssistant（本系统）使样本准备自动化。它可溶解、混合、洗涤及固定样品，使你轻松进行流式细胞仪分析。应用更大的tanks选择，可使实验室效率显著提高。你可同时运行4个loaderracks(160个样本)而不必更换液体。较大的tanks可轻松与LWA（本仪器）融为一体，且较大的tanks垂直放置于一个箱体内最大程度地节省了空间。选择5个既定程序之一或创建多至10个客户程序以满足您实验室的需要。同时可处理最多40份样本。获专利的细胞－洗涤技术省去了样本需转到离心机进行离心。这样增加了自由时间同时提高了实验室效率）。本仪器系统：强大的自动化样本准备解决方案。流式细胞术简介BDMediMachineSystem流式细胞术简介BDMedimachineSystemTheBDTMMedimachinesystemisasamplepreparationsystemfortheautomated,mechanicaldisaggregationofsolidanimalorplanttissuesforflowcytometricanalysis,cellculture,orDNAamplification.TheBDMedimachinesystemconsistsofthreecomponents:theMedimachine,Medicons,andFilcons.Variousporesizesofdisposable,sterile,andnon-sterileMediconsandFilconsallowtheoperatortooptimizeexperimentalconditionstosuitthetissueunderstudy,ensuringclean,viablepreparationsofsinglecells,cellclusters,orcellnuclei.Theprocedureisfastandsimple.FeaturesoftheBDMedimachineSystemPreparestissuequicklyandautomaticallyStandardizestissuedisaggregationIseasytouseCanbeusedwithorwithoutenzymes流式细胞术简介BDFACSAriaIII流式细胞术简介持续创新的流式细胞分选仪

BDFACSAriaIIIBDFACSAria™III是基于专利的稳定性光路技术、卓越的多色分析和分选性能、非凡的自动化操作的基础上创新而成最新一代流式细胞分选平台，是BDFACSAria系列高端流式细胞分选仪在分选领域的最新成功力作。自2003年第一台BDFACSAria问世以来，每一次更新换代都使复杂的分选应用扩展到更加宽广的研究领域，拓展了更广的应用范围。现在，全新的BDFACSAriaIII功能更强大、性能更可靠、拥有超乎想象的可操作性。流式细胞术简介详细参数指标全球第一台台式高速细胞分选仪，使用石英杯流动检测池固定光路校准技术，不需每日调整光路，仪器随开随用。石英杯流动检测池荧光检测灵敏度度及佳，<125MESF;可以使用达三根激光：激光波长为488nm、633nm和407nm.获取速度达70,000细胞/秒，分析速度达50,000细胞/秒;多色分析，分析参数可达15色之多;完全数字化电子处理系统，分辨率达262,144道，分选精度达1/32液滴;液流系统车装载鞘液、废液和洗液，液流自动控制系统，软件自动清洗程序;进样仓自动加压，自动混匀样本，自动冲洗进样管路;喷嘴选择70mm或100mm，满足绝大多数细胞分选的要求，喷嘴拆换简便、精确;两管或四管分选，可以使用多种规格的收集管;配件BDACDU装置，可以在微孔板或载波片上定量分选细胞;软件自动仪器控制和计算分选设置，液滴监控，自动检查堵塞;样本和分选细胞冷却系统;配件BDAMO，工作时控制浮质，避免污染;工作无特殊环境要求，不需要额外辅助设备.流式细胞术简介技术参数

BDFACSAria流式细胞分选仪为流式细胞仪高速分选和多色分析技术设定了更新更高的标准。仪器的设计采用全新理念，极大地简化了高速分选和多色分析的操作和实验要求。

BDFACSAria流式细胞仪是全球独一无二的台式高速细胞分选仪，使用石英杯流动检测池固定光路校准技术。其荧光检测灵敏度度极佳，而仪器维护和调校却非常简单。

BDFACSAria流式细胞仪系统软件的分选设定和监测功能大大简化了操作。仪器内置的BDAccuDrop系统可以快速准确地确定液滴延迟时间。液流监测系统自动监测液流断点，检查堵塞，实现了细胞分选的无人操作。流式细胞术简介

流式细胞术是对单个细胞和其他生物微粒进行快速定量分析和分选的学问。这种分析和分选是一种过程。这个过程中经过处理的细胞和微粒被包在鞘液中通过一个聚焦的光源被激发出散射光荧光，进而通过各种光学敏感元件测量这些光强度达到测量其物理性质和化学性质的目的，并可根据这些性质分选出高纯度的细胞亚群。实现这个过程的仪器叫流式细胞计。二、流式细胞术的一般介绍

1.什么是流式细胞术？流式细胞术简介●流式细胞术（FlowCytometry，FCM）

利用流式细胞仪对处在快速直线流动状态中的单细胞或生物颗粒进行多参数、快速定量分析，同时对特定群体加以分选的现代细胞分析技术。●流式细胞仪（FlowCytometer)

集激光技术、电子物理技术、光电测量技术、电子计算机技术、细胞荧光化学技术、单克隆抗体技术为一体的一种新型高科技仪器。流式细胞术简介▲只要是单细胞悬液均可分析▲高速：分析速度最高达上万个细胞/秒▲单细胞中同时测定多个参数▲精度高、准确性好（与传统荧光镜相比）▲当代最先进的细胞定量分析技术。▲同时测定液相中多种可溶性成分：流式微球芯片技术2.FCM特点：流式细胞术简介FSC—前向角散射光(ForwardLightScatter)SSC—侧向角散射光(SideScatter)FL1—荧光1(Fluorescence1)FL2—荧光2(Fluorescence2)………FLn—荧光n(Fluorescencen)3.流式细胞计的参数(原理还要介绍）流式细胞术简介

细胞的相对大小和截面积的大小。因为在前向主要为光的衍射作用，这一方向细胞经过激光后形成衍射环。测量光波长定了，喷嘴和前向的距离不变后。细胞的大小和衍射环大小有一定关系。要注意FSC—SSC点图，有时它含许多有意义的内容。4.FSC的物理意义流式细胞术简介

双激光七参数流式细胞计光路示意图流式细胞术简介

三激光八参数流式细胞计光路示意图流式细胞术简介1细胞DNA含量、倍体及细胞周期分析；2细胞内钙离子浓度、pH测定。3检测癌基因与抗癌基因表达在肿瘤发生、发展过程中的作用；4细胞凋亡；5化疗药物作用机制及疗效评价；6白细胞分型、白血病、淋巴瘤研究；7网织红细胞计数，血小板疾病诊断；8HLA群体分析；9AIDS研究等。10细胞分选

三、主要功能及适用领域流式细胞术简介▲细胞生物学▲免疫学▲遗传学▲药理学▲肿瘤学▲血液学▲病理学▲临床检验▲植物学▲海洋生物学●流式细胞术应用学科领域：流式细胞术简介流式细胞术简介流式细胞术简介●临床研究：1.淋巴细胞亚群测定（绝对数、相对数）2.血小板分析（活化、聚集、微粒、膜糖蛋白）3.网织红细胞分析：派若宁Y标记，测定Reticulocyte中RNA4.白血病、淋巴瘤免疫分型：多色标记检测膜或胞++质内抗原5.HLA-B27分析：强直性脊柱炎诊断参考依据6.PNH诊断（阵发性睡眠性血红蛋白尿）：检测CD55、CD597.人类同种异体器官移植中应用（供体选择、术后排斥反应监测、指导临床治疗）8.细胞因子测定（肿瘤、肾炎、感染、自身免疫病、超敏反应、移植排斥反应等）9.AIDS诊断与治疗：CD4+T数量减少、CD8+T中CD38分子数增多10.疗效评价（寄生虫、营养失调、创伤、手术、放化疗、疫苗）11.flow-FISH法测定端粒长度：用荧光标记核酸-（CCCTAA）3

端粒序列特异探针，应用于肿瘤研究

流式细胞术简介●基础研究：1.淋巴细胞功能研究：Th1、Th2、Tc1、Tc2、NK1、NK2、NKT2.树突状细胞（DC）研究：3.造血干细胞研究4.细胞周期分析：G0G1、S、G2M期的DNA含量5.细胞DNA倍体性分析（肿瘤异倍体）6.细胞凋亡分析（Caspase-3、AnnexinⅤ/PI、TUNNEL、APO-BrdU、APO-DIRECT）7.凋亡相关蛋白分析（Fas、Bcl-2、P53）8.细胞功能研究（细胞内PH值、细胞内钙离子流、细胞膜电位、线粒体膜电位）流式细胞术简介9.多药耐药基因研究（MDR）：P170蛋白、MDR-1基因检测10.肿瘤相关基因表达研究11.RNA测定12.DNA测定13.总蛋白测定14.癌基因、抑癌基因表达产物测定：(Myc基因组、ras基因组、P53、c-erbB2基因、HER-2/new蛋白）15.血管内皮细胞研究流式细胞术简介四、常见荧光素及其应用流式细胞术简介流式细胞术简介常用荧光染料光谱流式细胞术简介FLUOROCHROMEEX.EM.APPLICATIONIndo-1(unbound)335490CalciumFluxIndo-