2025年统编版选择性必修3生物下册阶段测试试卷

…………○…………内…………○…………装…………○…………内…………○…………装…………○…………订…………○…………线…………○…………※※请※※不※※要※※在※※装※※订※※线※※内※※答※※题※※…………○…………外…………○…………装…………○…………订…………○…………线…………○…………第=page22页，总=sectionpages22页第=page11页，总=sectionpages11页2025年统编版选择性必修3生物下册阶段测试试卷298考试试卷考试范围：全部知识点；考试时间：120分钟学校：______姓名：______班级：______考号：______总分栏题号一二三四五六总分得分评卷人得分一、选择题(共6题，共12分)1、下列表述正确的是（）A.微生物的培养基中都必须加入碳源、氮源、无机盐、水及特殊营养物质B.无菌技术包括对实验操作的空间、操作者的衣着和手进行灭菌C.微生物的生长除受营养因素影响外，还受pH、氧、渗透压的影响D.使用后的培养基丢弃前一定要进行消毒，以免污染环境2、植物被野生型农杆菌感染后会产生瘤状结构（类似愈伤组织）；主要原因是农杆菌附着植物细胞后，T-DNA首先在农杆菌中从右边界到左边界被剪切；复制，然后进入植物细胞并整合到染色体上，继而诱发细胞异常生长和分裂，形成植物肿瘤。Ti质粒中含有生长素合成基因、细胞分裂素合成基因和冠瘿碱合成基因。冠瘿碱是农杆菌生命活动必需的有机物质，而植物自身不能合成和利用。下图为农杆菌Ti质粒的T-DNA区段结构示意图。以下有关叙述正确的是（）

A.植物肿瘤的形成与生长素基因和细胞分裂素两个基因的在农杆菌细胞内表达有关B.清除植物肿瘤组织中的农杆菌后肿瘤不再生长C.利用T-DNA进行转基因时不需保留左边界和右边界序列D.去除冠瘿碱合成基因，农杆菌在被感染植物体内不能大量繁殖3、如图是单克隆抗体制备过程示意图；1~3代表相关过程，a~e代表相关细胞，其中c是两两融合的细胞。以下叙述错误的是（）

A.过程1是给小鼠注射特定抗原蛋白，可刺激小鼠产生特异性免疫反应B.过程2的促融方法可采用电融合技术，该技术能击穿核膜促使核融合C.c细胞有三种，每种细胞染色体组数都相等，e细胞是杂交瘤细胞D.过程3是进行抗体检测，并克隆产生阳性细胞的过程4、下列哪项是对待生物技术的理性态度（）A.转基因技术是按照人们的意愿对生物进行的设计，不存在负面影响B.转基因农作物对于解决粮食、能源等问题起了积极作用，同时也存在一定风险C.克隆技术如果被不合理利用将给社会造成灾难，应禁止任何克隆研究D.转基因技术如果被恐怖分子利用将可能导致人类灭绝，应停止转基因研究5、图甲是人类某单基因遗传病的系谱图，相关基因为A/a，在人群中该致病基因的频率为1/100。图乙为科研人员对1~6号个体（6号为胎儿）含相关基因的DNA片段扩增后，并进行电泳分析的结果，下列叙述正确的是（）

A.该遗传病为隐性病，但不能判断致病基因位于常染色体还是X染色体上B.利用PCR技术扩增含A和a两种基因的DNA片段时必须要设计两对引物C.3号个体与一表型正常的女性婚配，理论上后代患该病的概率是1/101D.6号应为女性，且表型正常，其M2片段可能来自1号或2号个体6、红细胞生成素（EPO）是体内促进红细胞生成的一种激素物质，是当今最成功的基因工程药物，可用于治疗肾衰性贫血等疾病。由于天然EPO来源极为有限，目前临床使用的红细胞生成素主要来自基因工程技术生产的重组人红细胞生成素（rhEPO）。其简要生产流程如图；下列相关叙述正确的是（）

A.过程①用到的工具酶有DNA聚合酶、限制酶和DNA连接酶B.构建的重组表达载体中终止子的作用是终止翻译过程C.检测重组细胞是否表达出rhEPO常用抗原—抗体杂交技术D.用乳腺生物反应器生产EPO可将人EPO基因导入哺乳动物体细胞获得评卷人得分二、多选题(共8题，共16分)7、下列有关生物技术的安全性的叙述，正确的是（）A.病毒可感染动物细胞，因此诱导动物细胞融合一般不用病毒B.我国对农业转基因生物实行了严格的标识制度C.经过基因重组的致病菌可能成为生物武器D.转基因物种的迅速扩散有利于增加生物多样性8、生长图形法是一种测定微生物营养需求的简便方法。为探究某嗜热菌所需生长因子的种类；研究小组把该菌的悬浮液与不含任何生长因子但含有其他必需营养物质的培养基混合后倒成平板，然后在平板上划分数区，将甲；乙、丙三种生长因子分别添加到不同区域，培养结果如图所示，下列说法正确的是（）

A.倒成平板后直接培养可判断有无污染B.倒成平板后需要进行灭菌处理C.图示结果表明该菌需要生长因子乙或丙D.生长图形法还可用于某些菌种的筛选9、某实验小组利用下图所示质粒和目的基因来构建基因表达载体，将目的基因导入大肠杆菌细胞并表达。下列叙述正确的是（）

A.图中的质粒用酶A切割后，会产生4个游离的磷酸基团B.在构建重组质粒时，可用酶A和酶C切割质粒和目的基因C.成功导入目的基因的大肠杆菌可在含四环素的培养基中生长D.若用酶B和酶C切割，可以避免质粒的自身环化10、进行土壤中尿素分解菌的选择培养时，利用的培养基组分及含量如表所示。下列分析错误的是（）。组分含量KH2PO41.4gNa2HPO42.1gMgSO4•7H2O0.2g葡萄糖10.0g尿素1.0g琼脂15.0gH2O定容至1000mL

A.KH2PO4和Na2HPO4既可为菌体提供无机盐，又可调节培养基的pHB.尿素既可为尿素分解菌提供氮源，又可对培养基中的微生物起选择作用C.琼脂既可为尿素分解菌提供碳源，又起到凝固剂的作用D.蒸馏水既可进行定容，又可对培养液进行稀释以便于计数11、下列关于传统发酵技术的说法中，错误的是（）A.果酒的制作离不开酵母菌，酵母菌属于兼性厌氧生物，在有氧条件下大量繁殖B.制作果醋需要醋酸菌，它是一种严格厌氧的微生物，可将葡萄中的糖分解为乙酸C.多种微生物参与了腐乳的制作，如酵母菌、毛霉、曲霉等D.制作泡菜利用的乳酸菌是一种厌氧微生物，可以通过无氧呼吸产生乳酸和二氧化碳12、下列有关菊花组织培养的叙述，正确的是（）A.实验中使用的培养基、器械和外植体都要灭菌B.外植体用酒精消毒30s后，再用流水充分冲洗C.诱导愈伤组织期间不需要光照，后续培养需要适当的光照D.一般先诱导根的形成，再转接到诱导生芽的培养基上13、下列叙述中错误的是（）A.改变NaCl溶液的浓度只能使DNA溶解而不能使其析出B.细胞代谢产物的工厂化生产体现了细胞的全能性C.在pH和温度相同时加酶洗衣粉的洗涤效果好于普通洗衣粉D.透明带反应是防止多精入卵的第一道屏障14、下列关于微生物发酵的叙述，错误的是（）A.制备培养基过程中，需要在灭菌后进行pH的调节B.制作果酒时适当加大接种量可以提高发酵速率，抑制杂菌生长C.现代发酵工程选育出性状优良的菌种后即可进行发酵罐内的发酵D.醋酸菌能将乙醇变成乙醛而后变为乙酸，故夏天开瓶后的红酒容易变酸评卷人得分三、填空题(共8题，共16分)15、在灼烧接种环之后，为什么要等其冷却后再进行划线？____________________________16、功能：能够识别双链DNA分子的某种特定的核苷酸序列，并且使每一条链中______部位的两个核苷酸之间的______断开，因此具有______。17、第三步：将目的基因导入______18、来源：主要是从______中分离纯化出来的。19、在____________的温度范围内，DNA的双螺旋结构解体，双链分开，这过程成为__________。20、95%的______________以使DNA析出，用玻璃棒沿一个方向搅拌，卷起的丝状物的颜色是____________。获取的丝状物后加入到质量浓度为______________mol/L浓度的NaCL溶液的试管中，使丝状物重新溶解。21、请回答有关植物细胞工程的问题：

（1）在植物中，一些分化的细胞，经过________的诱导，可以脱分化失去其__________而转变成未分化细胞。

（2）胡萝卜的组织培养中，将接种后的胡萝卜组织块，放在恒温_________（填：“光照”或“黑暗”）条件下培养。一段时间后，将生长良好的愈伤组织转接到_________培养基上继续培养。

（3）在植物组织培养过程中，由于培养细胞一直处于不断的分生状态，因此容易受到__________的影响而产生突变。为筛选出具有抗盐性状的突变体，需将种子播种在含_____的培养基上，获得所需个体。22、科学家采用定点诱变的方法构建T4溶菌酶的新蛋白质，发现其中一种新蛋白质的第9和第164位氨基酸残基被转换为半胱氨酸残基，并形成一个二硫键。这种新蛋白质的热稳定性会有什么变化？这项技术的要点是什么？_________评卷人得分四、判断题(共2题，共4分)23、植物细胞培养的原理是植物细胞的全能性。()A.正确B.错误24、我国对转基因技术的方针是研究上要大胆，坚持自主创新；推广上要慎重，做到确保安全；管理上要严格，坚持依法监管。（选择性必修3P104）()A.正确B.错误评卷人得分五、实验题(共4题，共28分)25、丙肝病毒引起的丙型肝炎可导致肝脏慢性炎症坏死和纤维化；部分患者可能发展为肝硬化甚至肝癌。为研制丙肝病毒的单克隆抗体，某研究者以小鼠为实验材料设计了以下实验流程。回答下列问题：

(1)为使单细胞悬液中的B淋巴细胞产生的抗体中一定含有能与丙肝病毒结合的抗体，需要进行的操作是______。融合之前的两种细胞中，能通过动物细胞培养大量增加数量的是____

(2)诱导细跑融合时利用的病毒表面含有的糖蛋白和一些酶，能够与细胞膜上的______（填化学本质）发生作用，使得细胞互相凝聚，细胞膜上的______重新排布，细胞发生融合。筛选1利用______进行筛选，而筛选2通过多次的_______来完成。

(3)得到大量丙肝病毒单克隆抗体的方法之一是将杂交瘤细胞在体外培养液中进行培养，接入培养液中杂交瘤细胞的量是单克隆抗体产量的重要影响因素之一，为探究一定培养液中接种杂交瘤细胞的最佳数量，实验思路为_______。26、科研人员进行了土壤中某种固氮菌的分离和纯化培养；实验流程如图1所示。农药；除草剂的长期使用，会使土壤受到严重污染。某科研小组为筛选能分解除草剂草甘膦的微生物，其流程示意图如图2所示。回答下列问题：

(1)图1中，“？”处是__________，纯化培养时采用的接种方法是_______________，该方法可用于菌落数的统计，原因是_________________________。

(2)图1中纯化培养所利用的培养基在营养成分和物理性质上的特点分别是____________________，图1和图2中的两个培养基在用途方面的共同点是____________________。

(3)图2中的接种方法需要连续划线，且除第一次划线外，后面的每一次划线都要从上一次划线的末端开始，目的是_________________。结果有的菌落周围有透明圈而有的没有，原因是________________。27、T-2毒素是一种由霉菌分泌的脂溶性小分子；可通过污染饲料引起畜禽中毒反应。CYP3A是猪体内降解T-2毒素的关键酶，T-2毒素可诱导CYP3A基因表达水平升高。

(1)T-2毒素是霉菌的_____（选填“初级”或“次级”）代谢产物，主要以_____方式进入猪细胞。

(2)B1和B2是CYP3A基因启动子上游的两个调控序列，为研究T-2毒素诱导CYP3A基因表达的机理，研究者首先将不同调控序列分别和CYP3A基因启动子及荧光素酶基因（LUC基因）连接构建表达载体，再分别导入猪肝细胞，然后向各组猪肝细胞培养液中加入_____，适宜条件下进行培养；24h后检测LUC酶活性，计算启动子活性相对值，结果如图1所示。据图可知，B1和B2调控序列是CYP3A基因响应T-2毒素的核心元件，理由是_____。

(3)研究表明NF-Y和Sp1两种蛋白均参与T-2毒素对CYP3A的诱导；B2是Spl的结合位点。研究者推测，NF-Y通过与B1结合，与Sp1共同调控CYP3A基因的表达。

①为证明Bl是NF-Y的结合位点，研究者依据B1序列制备了野生型和突变型探针，分别与猪肝细胞核蛋白提取物混合，实验分组及结果如图2．据实验结果推测，第4组出现阻滞带的原因是_____，进而推测第5组结果产生的原因是_____。

②研究者设计实验进一步证明了NF-Y和Spl通过互作共同发挥调控功能，实验设计思路是：增大或缩小B1和B2两者之间的距离，检测CYP3A基因的启动子活性。据此分析，实验假设是_____。28、微生物因具有体积小；易培养，繁殖快，且自身遗传物质结构简单，经人工处理或自然突变可获得新性状等特点，在发酵工程中应用广泛。回答下列问题：

(1)大肠杆菌是发酵工程中应用较为广泛的菌种之一。培养大肠杆菌时，需要将培养基的pH调至____性，再利用_________________法灭菌后进行接种。

(2)在发酵工程中，常常需要对菌种数目进行统计。相对真菌来说，细菌的体积较小，因此对细菌数目进行统计时，适合使用_________________（填“细菌计数板”或“血细胞计数板”）进行计数，且统计的细菌数目往往比实际活菌数目_________________（填“多”或“少”）。

(3)人工处理或自然突变往往会使菌种成为营养缺陷型菌株；现欲设计实验证明野生型大肠杆菌经紫外线照射后，可获得组氨酸缺陷型突变菌株，请简单描述实验思路并预计实验结果：

实验思路：_____________________________；

实验结果：_____________________________。评卷人得分六、综合题(共4题，共32分)29、结球甘蓝是我国重要的蔬菜品种；危害甘蓝生长的主要是菜青虫；小菜蛾等鳞翅目害虫。为使结球甘蓝获得抗虫性状，科研人员将苏云金芽孢杆菌细胞中获得的BT毒蛋白基因导入结球甘蓝。

（1）转运肽能引导细胞质中合成的蛋白质进入叶绿体。为构建BT毒蛋白基因和转运肽基因的融合基因（见下图）；需用限制酶_____处理相关的DNA片段，再用_____连接。

注：E1；E2、E3、E4为限制酶。

（2）构建基因表达载体时，应将融合基因插入Ti质粒的_____区。用Ca2+处理农杆菌后获得_____细胞；将其与基因表达载体混合完成转化后，在添加_____的培养基中，经筛选1得到含基因表达载体的农杆菌。

（注：GUS基因表达产物经染色能由无色变成蓝色）

（3）鉴定愈伤组织中是否含有目的基因；可以用分子水平的_____方法，还可以通过肉眼观察选择_____的愈伤组织，以确定目的基因是否_____。两次筛选后得到的转基因愈伤组织经过细胞的再分化过程，获得转基因水稻。

（4）为获得具有抗性的转基因结球甘蓝；还需要进行个体水平的检测。请设计实验方案：

_____

（5）转基因结球甘蓝的抗虫效果逐年下降；以下_____措施能减缓害虫对BT毒蛋白产生抗药性。

a.将转基因结球甘蓝与非转基因结球甘蓝间隔种植。

b.同时转入两种或两种以上不同机理的杀虫基因。

c.大量使用苏云金芽孢杆菌杀虫剂。

（6）种植转基因结球甘蓝的过程中，在生态安全方面可能会出现什么问题？（答出一点）_____30、α1－抗胰蛋白酶缺乏症是一种在北美较为常见的单基因遗传病；患者成年后会出现肺气肿及其他疾病，严重者甚至死亡。对于该致病患者常可采用注射人α1－抗胰蛋白酶来缓解症状。据此回答：

（1）图1表示获取人α1－抗胰蛋白酶基因的两种方法；请回答下列问题：

①a过程是在____________酶的作用下完成的，该酶的作用特点是__________________。

②c过程需要的原料是______________________。

③要确定获得的基因是否是所需的目的基因，可以从分子水平上利用_______技术检测该基因的碱基序列。

（2）利用转基因技术将控制该酶合成的基因导入羊的受精卵；最终培育出能在乳腺细胞表达人α1－抗胰蛋白酶的转基因羊，从而更易获得这种酶，简要过程如图2所示。

①获得目的基因后，常利用PCR技术在体外将其大量扩增，其过程是高温变性解旋，低温复性______________，然后中温延伸，在相关酶的作用下从___________________进行互补链的合成。

②载体上绿色荧光蛋白（GEP）基因的作用是便于__________________。基因表达载体d，除图中的标示部分外，还必须含有_______________。

（3）在基因工程的基础上发展起了蛋白质工程，蛋白质工程目标是________________。31、器官移植中供体器官的严重缺乏一直是困扰需要器官移植患者的问题。科学家们培育出了猴鼠嵌合体——“猴鼠”；期待成果可用于人体角膜等器官的移植。请据图回答下列问题：

(1)①培养过程中为了防止细胞代谢积累物对细胞自身造成危害，需要的操作是__________。

(2)常采用__________激素处理雌鼠，使其排出更多的卵子，然后从输卵管中冲取卵子，直接与_________的精子在体外受精。

(3)实验中③和④要同时注射激素在操作上称为_______，将囊胚植入受体母鼠体内的④过程运用了_________技术。

(4)囊胚已出现细胞分化，应将猴子的皮肤干细胞注射到小鼠囊胚的_______部位，才能伴随其发育成某种组织。若想进一步提高胚胎的利用率，可对图中囊胚进行_________。

(5)胚胎工程包括胚胎移植，胚胎分割、_________和_____________。32、学习以下材料；回答（1）~（5）题。

基因治疗在探索中前进。20世纪60年代；科学家首次提出基因治疗的概念，为基因治疗的发展奠定基础。1990年，研究者用逆转录病毒将正确编码腺苷脱氨酶的基因导入离体培养的患者淋巴细胞，再将细胞输回患者体内，恢复了患者体内腺苷脱氨酶的合成。此次成功是基因治疗史上的重要里程碑。此后，科学家开展了大量的基因治疗试验，一些基因治疗产品陆续获得批准上市。近年来，以CRISPR/Cas9为代表的基因编辑技术的兴起让基因治疗步入了全新的起点。利用基因编辑技术，可在体内或体外对靶基因进行精准编辑，比如将目的基因插入到指定位点，或敲除特定基因；通过单碱基编辑技术，可对靶位点进行精准的碱基编辑，从而纠正原来的基因突变。目前，基于基因编辑技术的临床试验显示了良好的治疗效果。基因治疗在取得积极进展的同时，也面临着诸多问题，如安全性；伦理问题等。目前基因治疗常用的载体是病毒载体，包括逆转录病毒、腺相关病毒（AAV）等。逆转录病毒可整合外源基因到宿主基因组而使产物长期稳定表达，但这种随机整合的特性会带来潜在的安全隐患。病毒有一定的免疫原性，可激活机体的特异性免疫应答，导致基因治疗失败，甚至危及生命。2017年，首例利用AAV载体携带凝血因子基因对血友病的临床治疗以失败告终，就与载体输注后AAV病毒衣壳引起的免疫应答有关。基因编辑的脱靶效应也不容忽视，一旦脱靶效应发生在重要功能基因上会造成不必要的安全风险。

经过几十年的螺旋式发展,基因治疗在遗传病和获得性疾病（如恶性肿瘤；心血管疾病和感染性疾病等）的治疗上均取得了令人兴奋的临床试验进展。基因治疗的进步为许多疾病的治疗提供了新的思路,也让无数患者看到了希望。不久的将来；基因治疗或将成为人类疾病治疗不可或缺的一部分。

(1)基因治疗是在________水平进行操作；以实现缓解或治愈疾病的一种治疗手段。

(2)将AAV载体输注自身存在抗AAV抗体的患者，抗体会________而降低载体的递送效果，AAV病毒衣壳会引起机体细胞免疫应答进而使________被破坏而失效。

(3)逆转录病毒载体可将外源基因整合到宿主基因组，这种随机整合会带来潜在的安全隐患，原因是________。

(4)CCR5是HIV感染人体细胞不可缺少的关键受体。科研人员以CCR5为靶基因，利用基因治疗手段治疗艾滋病，取得积极效果，该治疗的思路是________。

(5)对基因治疗的认识或态度，正确的是（）。A．所有的基因治疗策略都是用正常基因去替换突变基因B．遗传病是由于遗传物质改变所致，基因治疗只适用于治疗遗传病C．对于体外无法培养的细胞，可通过载体直接将基因导入患者体内细胞进行治疗D．基因治疗具有难以预料的潜在安全隐患，不应该继续研究和发展参考答案一、选择题(共6题，共12分)1、C【分析】【分析】

微生物的营养物质主要包括碳源；氮源、水和无机盐等；配置培养基时一般要考虑微生物的营养物质是否全面、各种营养物质的比例及pH等因素。

【详解】

A；培养基不一定都含有碳源、氮源；如培养自养型微生物的培养基中不需加入碳源，分离自生固氮菌的培养基中，不需加入氮源，A错误；

B；操作者的衣着和手只能进行消毒；不能灭菌，要考虑物体的耐受程度，B错误；

C；对于微生物的生长来说；在营养物质供应充分的基础上，pH适宜、渗透压浓度适宜及适宜的氧气对于其生长繁殖都是有利的，C正确；

D；使用后的培养基丢弃前一定要进行灭菌；以免污染环境，D错误。

故选C。

【点睛】2、D【分析】【分析】

由题意知：农杆菌Ti质粒的基因被剪切后整合到植物的染色体上；因为其质粒上的细胞分裂素和生长素基因，诱发细胞异常生长和分裂，产生了过量的细胞分裂素和生长素，导致细胞过度增殖形成植物肿瘤。

【详解】

A；植物肿瘤的形成与生长素基因和细胞分裂素两个基因在植物细胞内表达有关；A错误；

B；清除植物肿瘤组织中的农杆菌后；还有Ti质粒整合到植物DNA上的，通过基因的复制表达也会导致肿瘤继续生长，B错误；

C；T-DNA在转移的过程中需要保留左边界和右边界序列；转移结束后需要将左边界和右边界序列进行剪切，C错误；

D；根据题干信息“冠瘿碱是农杆菌生命活动必需的有机物质；而植物自身不能合成和利用”可知，去除冠瘿碱合成基因，农杆菌在被感染植物体内不能大量繁殖，D正确。

故选D。

【点睛】3、B【分析】【分析】

单克隆抗体的制备涉及细胞融合；细胞培养和细胞筛选；从题干信息图可看出，过程1代表的是注射特异性抗原使小鼠免疫，从而获得能产生相应抗体的B淋巴细胞；过程2是将B淋巴细胞与骨髓瘤细胞融合的过程；过程3是克隆培养筛选后的阳性细胞，一共需要进行两次，最终获得能产生特异性抗体的杂交瘤细胞，此后在培养基或小鼠腹腔中培养。

【详解】

A；图中过程1是通过注射抗原或抗原蛋白来获得产生相应抗体的B淋巴细胞；A正确；

B；过程2是促进细胞融合的过程；其中电融合技术是用低压电流击穿细胞膜促使细胞融合，B错误；

C；c细胞为杂交瘤细胞；有三种，分别是骨髓瘤细胞-骨髓瘤细胞、骨髓瘤细胞-B淋巴细胞、B淋巴细胞-B淋巴细胞，其中骨髓瘤细胞和B淋巴细胞都有两个染色体组，融合后的细胞都含有4个染色体组，其中e细胞是杂交瘤细胞，C正确；

D；过程3是专一抗体检测及克隆培养筛选后获得阳性细胞；该过程需要多次进行，D正确。

故选B。4、B【分析】【分析】

转基因生物的安全性问题包括：（1）食物安全：滞后效应；出现过敏源、食物的营养成分改变等。（2）生物安全：基因扩散导致对生物多样性的威胁。（3）环境安全：对生态系统稳定性及环境的影响。

【详解】

A；转基因技术是按照人们的意愿对生物进行设计的；但是也存在负面影响，A错误；

B；转基因农作物对于解决粮食、能源等问题起了积极作用；同时也存在着一定风险，如可能造成食物的营养成分发生改变等，B正确；

C；克隆技术如果被不当利用将给社会造成灾难；应禁止生殖性克隆，但是不反对治疗性克隆，如治疗性克隆可用于治疗白血病等，C错误；

D；转基因技术如果被恐怖分子利用将可能导致人类灭绝；但不应该停止转基因相关研究，应加大监督和管理力度，D错误。

故选B。5、C【分析】【分析】

1；PCR是聚合酶链式反应的简称；指在引物指导下由酶催化的对特定模板（克隆或基因组DNA）的扩增反应，是模拟体内DNA复制过程，在体外特异性扩增DNA片段的一种技术，在分子生物学中有广泛的应用。

2；伴性遗传是由性染色体上的基因所控制的遗传；若就一对相对性状而言，则为一对等位基因控制的一对相对性状的遗传，伴性遗传遵循基因的分离定律。

【详解】

A；分析图甲可知；1号、2号都正常，而3号患病，说明该病为隐性基因致病。再分析图乙可知，3号个体电泳结果只有M1片段，2号只有M2片段，据此分析，可以判断致病基因是位于X染色体上，A错误；

B；PCR时；引物设计应该在基因的上游和下游，如果基因A和基因a的上游和下游的序列部分相同，则引物相同，否则不同，所以利用PCR技术扩增含A和a两种基因的DNA片段时，可能要设计两对引物或者一对引物，B错误；

C、根据题干“图甲是人类某单基因遗传病的系谱图，相关基因为A/a，在人群中该致病基因的频率为1/100”，即Xa的基因频率为1/100，则XA的基因频率为99/100；人群中基因型XAXA频率=（99/100）2，基因型XAXa频率=2×（1/100）×（99/100），则普通人群的正常女性中携带者的基因型频率=XAXa/（XAXA+XAXa）=2/101。故3号个体与一表型正常的女性婚配，即为XaY×2/101XAXa；则理论上后代患该病的概率=1/2×2/101=1/101，C正确；

D、分析图乙，6号有M1和M2片段，则6号的基因型应为XAXa；所以6号应为女性，且表型正常；则6号的M1片段只能来自4号，6号的M2片段只能来自5号，M2片段不可能来自1号或2号，D错误。

故选C。6、C【分析】【分析】

分析题图：图中①表示基因表达载体的构建；②表示将目的基因导入受体细胞。

【详解】

A；过程①构建基因表达载体；需用限制酶切割目的基因和载体，并用DNA连接酶连接，该过程无需DNA聚合酶参与，A错误；

B；终止子的作用是终止转录过程；B错误；

C、检测重组细胞是否表达出rhEPO；可利用抗原—抗体特异性结合的原理，采用抗原—抗体杂交技术检测，C正确；

D；采用细胞培养生产EPO成本比较高；可以采用乳腺生物反应器，将基因表达载体转入雌性哺乳动物受精卵中，使EPO基因在转基因动物的乳腺细胞中表达，通过分泌的乳汁来生产EPO，目前还不能直接用高度分化的体细胞克隆哺乳动物，D错误。

故选C。二、多选题(共8题，共16分)7、B:C【分析】【分析】

转基因生物的安全性问题：食物安全（滞后效应；过敏源、营养成分改变）、生物安全（对生物多样性的影响）、环境安全（对生态系统稳定性的影响）．生物安全：①转基因植物扩散到种植区外变成野生种或杂草；②转基因植物竞争能力强，可能成为“入侵的外来物种”，③转基因植物的外源基因与细菌或病毒杂交，重组出有害的病原体，④可能使杂草成为有抗除草剂基因的“超级杂草”。

【详解】

A；诱导动物细胞可用灭活的病毒；A错误；

B；我国对农业转基因生物实施标识制度；比如由转基因大豆加工制成的大豆油，标注为“本产品加工原料中含有转基因大豆，但本产品已不再含有转基因成分”，其相关的生物学依据是大豆油属于脂肪，不含目的基因编码的蛋白质，B正确；

C；生物武器种类包括致病菌、病毒、生化毒剂以及经过基因重组的致病菌等；C正确；

D；转基因物种的无序迅速扩散可能变成野生种类或变成入侵的外来物种；威胁生态系统中其他生物的生存，甚至会破坏生物的多样性，D错误。

故选BC。8、A:D【分析】【分析】

培养基的概念及营养构成。

（1）概念：人们按照微生物对营养物质的不同需求；配制出的供其生长繁殖的营养基质。

（2）营养构成：各种培养基一般都含有水；碳源、氮源、无机盐；此外还要满足微生物生长对pH、特殊营养物质以及氧气的要求．例如，培养乳酸杆菌时需要在培养基中添加维生素，培养霉菌时需将培养基的pH调至酸性，培养细菌时需将pH调至中性或微碱性，培养厌氧微生物时则需要提供无氧的条件。

【详解】

A；平板上不含任何生长因子；若倒成平板后直接培养，出现菌落说明已被杂菌感染，因为该嗜热菌不能在缺乏生长因子的培养基中生长，A正确；

B；制备平板时；先灭菌再倒平板，B错误；

C；图中菌落生活在乙丙区域之间；说明同时需要乙和丙，C错误；

D；不同菌种所需生长因子不同；可利用生长图形法筛选菌种，D正确。

故选AD。9、A:D【分析】【分析】

分析题图：图中质粒和外源DNA都含有限制酶A；B、C的识别序列和切割位点；若用酶A切割会同时破坏质粒上的两个抗性基因。

【详解】

A；质粒中含有2个酶A的酶切位点；所以切割后会产生4个游离的磷酸基团，A正确；

B；如果用酶A和酶C同时切割质粒；会破坏质粒的标记基因，B错误；

C；根据B项分析；需要用酶B和酶C切割质粒和目的基因，导致四环素抗性基因被破坏，所以不能在含四环素的培养基中生长，C错误；

D；若用酶B和酶C切割；产生不同的黏性末端，可避免质粒自身环化，D正确。

故选AD。10、C:D【分析】【分析】

实验室的培养基按照功能划分；可以分为选择培养基和鉴别培养基。选择培养基是在微生物学中，将允许特定种类的微生物生长，同时抑制或阻止其他种类微生物生长的培养基称为选择培养基。

【详解】

A、KH2PO4和Na2HPO4可为尿素分解菌提供无机盐，H2PO4-和HPO42-又是一种调节pH的缓冲对；A正确；

B；培养基中除了尿素无其他含氮物质；只有尿素分解菌能通过分解尿素进行生长繁殖，故尿素既能为尿素分解菌提供氮源，又可对培养基中的微生物起选择作用，B正确；

C；琼脂不能被微生物利用；只能充当凝固剂，C错误；

D、表中的H2O为蒸馏水；起定容作用，蒸馏水不能对培养液进行稀释，稀释所用的溶剂应该是无菌水，D错误。

故选CD。11、B:D【分析】【分析】

参与豆腐发酵的微生物有青霉；酵母、曲霉、毛霉等多种；其中起主要作用的是毛霉。毛霉是一种丝状真菌，常见于土壤、水果、蔬菜、谷物上，具有发达的白色菌丝。毛酶等微生物产生的蛋白酶能将豆腐中的蛋白质分解成小分子的肽和氨基酸；脂肪酶可将脂肪分解成甘油和脂肪酸。

【详解】

A；果酒的制作原理是酵母菌的无氧呼吸产生酒精；酵母菌属于兼性厌氧生物，在有氧条件下大量繁殖，A正确；

B；制作果醋需要醋酸菌；它是一种好氧的微生物，可将葡萄中的糖（或乙醇）分解为乙酸，B错误；

C；多种微生物参与了腐乳的制作；如酵母菌、毛霉、曲霉等，其中起主要作用的是毛霉，C正确；

D；制作泡菜利用的乳酸菌是一种厌氧微生物；可以通过无氧呼吸产生乳酸，D错误。

故选BD。12、B:C【分析】【分析】

植物组织培养的过程为：离体的植物组织；器官或细胞经过脱分化（避光）形成愈伤组织；愈伤组织经过再分化（需光）过程形成胚状体，进一步发育形成植株。

【详解】

A；无菌技术包括消毒和灭菌；植物组织培养需要无菌操作，防止杂菌污染，所用器械需灭菌，实验人员和外植体需消毒操作，A错误；

B；菊花茎段在洗涤灵稀释液浸泡2min；用流水冲洗干净后，在70%酒精中消毒30s，再用流水冲洗后置于10%次氯酸钠溶液中消毒10min，然后用无菌水多次冲洗，B正确；

C；诱导培养愈伤组织期间一般不需要照光；在后续培养过程中，每日需要给予光照，目的是诱导叶绿素的形成，进一步形成叶绿体进行光合作用，C正确；

D；诱导愈伤组织形成试管苗的过程；需要将生长良好的愈份组织先转接到诱导生芽的培养基上，长出芽后，再将其转接到诱导生根的培养基上，进一步诱导生根，D错误。

故选BC。13、A:B:C【分析】【分析】

1；DNA粗提取和鉴定的原理：（1）DNA的溶解性：DNA和蛋白质等其他成分在不同浓度NaCl溶液中溶解度不同；DNA不溶于酒精溶液；但细胞中的某些蛋白质溶于酒精；DNA对酶、高温和洗涤剂的耐受性。（2）DNA的鉴定：在沸水浴的条件下，DNA遇二苯胺会被染成蓝色。

2；植物组织培养依据的原理为植物体细胞的全能性；即已经分化的细胞仍然具有发育成完整植株的潜能；培养过程的顺序是离体植物器官、组织或细胞（外植体）脱分化形成愈伤组织，再分化形成根、芽等器官进而形成新的植物体。

【详解】

A；DNA在不同浓度的NaCl溶液中溶解度不同；当NaCl溶液的浓度为0.14mol/L时，DNA溶解度最小，因此改变NaCl溶液的浓度既能使DNA溶解也能使其析出，A错误；

B；细胞代谢产物的工厂化生产利用的是细胞培养技术；原理是细胞增殖，未体现细胞的全能性，B错误；

C；相同时加酶洗衣粉洗涤效果好于普通洗衣粉酶的催化作用需适宜的pH值；pH不适宜时，加酶洗衣粉洗涤效果不一定好于普通洗衣粉，C错误；

D；精子与卵子相遇后；会发生顶体反应，释放顶体酶，透明带反应和卵黄膜封闭作用是阻止其他精子入卵的两道屏障，其中透明带反应是防止多精入卵的第一道屏障，D正确。

故选ABC。14、A:C【分析】【分析】

果酒的制作利用酵母菌的无氧呼吸产生酒精；醋酸菌在糖源；氧气充足时；直接将葡萄糖氧化为醋酸；在糖源不足、氧气充足时，可利用酒精，即乙醇作为呼吸底物，先将乙醇变成乙醛而后变为乙酸（醋酸）。

【详解】

A；制备培养基过程中；pH的调节应在灭菌前进行，A错误；

B；制作果酒时适当加大接种量；酵母菌菌体的基数增大，可使其快速形成优势菌群，抑制杂菌生长，提高发酵速率，B正确；

C；现代发酵工程选育出性状优良的菌种后；为满足发酵过程的需要，还要对菌种进行扩大培养，之后才可进行发酵罐内的发酵，C错误；

D；醋酸菌能够氧化酒精产生醋酸；造成葡萄酒的败坏。首先，乙醇被氧化生成乙醛，然后乙醛再被氧化生成醋酸（乙酸），故夏天开瓶后的红酒容易变酸，D正确。

故选AC。三、填空题(共8题，共16分)15、略

【解析】避免接种环温度太高，杀死菌种16、略

【分析】【分析】

【详解】

略【解析】特定磷酸二酯键特异性17、略

【分析】【分析】

【详解】

略【解析】受体细胞18、略

【分析】【分析】

【详解】

略【解析】原核生物19、略

【分析】【分析】

【详解】

略【解析】80—100℃变性20、略

【分析】【分析】

【详解】

略【解析】冷酒精白色221、略

【分析】【分析】

植物组织培养的条件：①细胞离体和适宜的外界条件（如适宜温度；适时的光照、pH和无菌环境等）；②一定的营养（无机、有机成分）和植物激素（生长素和细胞分裂素）。决定植物脱分化和再分化的关键因素是植物激素的种类和比例；特别是生长素和细胞分裂素的协同作用在组织培养过程中非常重要，被称为“激素杠杆”。

【详解】

（1）在植物中；一些分化的细胞，经过激素的诱导，可以脱分化失去其特有的结构和功能而转变成未分化细胞。

（2）胡萝卜的组织培养中；将接种后的胡萝卜组织块，放在恒温黑暗条件下培养。一段时间后，将生长良好的愈伤组织转接到分化培养基上继续培养。

（3）在植物组织培养过程中；由于培养细胞一直处于不断的分生状态，因此容易受到培养条件和外界压力的影响而产生突变。为筛选出具有抗盐性状的突变体，需将种子播种在含一定浓度的盐的培养基上，获得所需个体。

【点睛】

本题考查植物组织培养的相关知识，要求考生识记植物组织培养的过程、原理及条件，掌握植物组织培养技术的相关应用，能结合所学的知识准确分析，属于考纲识记和理解层次的考查。【解析】①.激素②.特有的结构和功能③.黑暗④.分化⑤.培养条件和外界压力⑥.一定浓度的盐22、略

【分析】【详解】

蛋白质形成二硫键，使蛋白质的结构更加稳定，因此T4溶菌酶的热稳定性会提高。这项技术属于蛋白质工程技术，其步骤为从预期的蛋白质功能出发→设计预期的蛋白质结构→推测应有的氨基酸序列→找到并改变相对应的脱氧核苷酸序列（基因）或合成新的基因→获得所需的蛋白质。【解析】会提高T4溶菌酶的耐热性。这项技术属于蛋白质工程技术，该技术的要点是从预期的蛋白质功能出发→设计预期的蛋白质结构→推测应有的氨基酸序列→找到并改变相对应的脱氧核苷酸序列（基因）或合成新的基因→获得所需的蛋白质。四、判断题(共2题，共4分)23、B【分析】【详解】

植物组织培养是指将离体的植物器官、组织或细胞等，培养在人工配制的培养基上，给予适宜的培养条件，诱导其形成完整植株的技术，最终获得了完整的植株，体现了植物细胞的全能性，而植物细胞培养的目的使获得大量的植物细胞，从而获得次生代谢物，利用的原理是细胞增殖，故错误。24、A【分析】【详解】

转基因生物的安全性问题：食物安全（滞后效应；过敏源、营养成分改变）、生物安全（对生物多样性的影响）、环境安全（对生态系统稳定性的影响）；对待转基因技术的利弊，正确的做法应该是趋利避害，不能因噎废食。我国对转基因技术的方针是一贯的、明确的，就是研究上要大胆，坚持自主创新；推广上要慎重，做到确保安全；管理上要严格，坚持依法监管。

该说法正确。五、实验题(共4题，共28分)25、略

【分析】【分析】

单克隆抗体的制备过程：（1）制备产生特异性抗体的B淋巴细胞：向免疫小鼠体内注射特定的抗原；然后从小鼠脾内获得相应的B淋巴细胞。（2）获得杂交瘤细胞：①将鼠的骨髓瘤细胞与脾细胞中形成的B淋巴细胞融合；②用特定的选择培养基筛选出杂交瘤细胞，该杂种细胞既能够增殖又能产生抗体。（3）克隆化培养和抗体检测。（4）将杂交瘤细胞在体外培养或注射到小鼠腹腔内增殖。（5）提取单克隆抗体：从细胞培养液或小鼠的腹水中提取。

【详解】

（1）用丙肝病毒对小鼠进行免疫后；小鼠的B淋巴细胞能产生抗丙肝病毒的抗体，从该小鼠的脾细胞中能获得产生该抗体的B淋巴细胞。B淋巴细胞在体外培养条件下不能无限增殖，而骨髓瘤细胞能无限增殖，故融合之前的两种细胞中，能通过动物细胞培养大量增加数量的是骨髓瘤细胞。

（2）诱导细胞融合的病毒表面含有的糖蛋白和一些酶；能够与细胞膜上的糖蛋白发生作用，使得细胞互相凝聚，细胞膜具有一定的流动性，在灭活病毒的诱导下，其上的蛋白质分子和脂质分子重新排布，细胞膜会发生融合。细胞融合后产生的融合细胞有B细胞间的融合；骨髓瘤细胞间的融合及B细胞和骨髓瘤细胞的融合，会产生三类细胞。筛选1是指利用选择培养基进行筛选得到杂交瘤细胞。由于杂交瘤细胞产生的抗体除了抗丙肝病毒的抗体外，还可能有其他类型，故筛选2是指进行多次的克隆化培养和专一性抗体检测，以得到能产生所需抗体的杂交瘤细胞。

（3）实验的自变量是培养液中接种杂交瘤细胞的数量，因变量为一定时间内抗丙肝病毒抗体的数量，除自变量外，其他条件要相同且适宜。所以实验思路为：将适宜的动物细胞培养液分为体积相同的几组（可自设组数）。在不同组别中接种不同量的能产生丙肝病毒的单克隆抗体的杂交瘤细胞，一定时间后测定培养液中的抗体含量。【解析】(1)给小鼠注射丙肝病毒使小鼠产生免疫反应骨髓瘤细胞。

(2)糖蛋白蛋白质分子和脂质分子选择培养基克隆化培养和抗体检测。

(3)将适宜的动物细胞培养液分为体积相同的几组（可自设组数）。在不同组别中接种不同量的能产生丙肝病毒的单克隆抗体的杂交瘤细胞，一定时间后测定培养液中的抗体含量26、略

【分析】【分析】

将微生物接种到固体培养基常用稀释涂布平板法；接种前先要将菌液进行一系列的梯度稀释，再将不同稀释度的菌液分别涂布到琼脂固体培养基的表面，在一定的稀释度的菌液里，聚集在一起的微生物能分散成单个细胞，在适宜的条件下培养让菌体进行繁殖，能够在培养基表面形成单个菌落。稀释涂布平板操作：①将涂布器浸在盛有酒精的烧杯中。取出时，要让多余的酒精在烧杯中滴尽。②取少量菌液，滴加到培养基表面。③将沾有少量酒精的涂布器在火焰上引燃，待酒精燃尽冷却8-10s。④用涂布器将菌液均匀地涂布在培养基上，涂布时可转动培养皿，使菌液分布均匀。

【详解】

（1）图1中是将土壤悬浮液取1mL；加入9mL无菌水进行稀释10倍。图1中微生物接种方式为稀释涂布平板法。该方法可以用于对菌落数进行计数，因为当样品的稀释度足够高时，培养基表面可以获得由单个细菌繁殖而成的单菌落，通过统计菌落的数量可以推测所涂菌液中细菌的数量。

（2）土壤中某种固氮菌的分离和纯化培养；培养基需要采用固体培养基，才可用于稀释涂布平板法，且因为是分离固氮菌，所以培养基中不加氮源。图1和图2中的两个培养基都是用于从多种微生物中分离目的菌种。

（3）图2中接种方法为平板划线法，且除第一次划线外，后面的每一次划线都要从上一次划线的末端开始，目的是将聚集的菌种逐步稀释，分散到培养基表面，最终达到分离的效果。图2中培养基时为了筛选出能分解除草剂草甘膦的微生物，所以有的菌落中的细菌能分解草甘膦，菌落周围因为草甘膦被分解而出现透明圈，有的菌落中的细菌不能分解草甘膦，菌落周围不能形成透明圈。【解析】(1)无菌水稀释涂布平板法当样品的稀释度足够高时；培养基表面可以获得由单个细菌繁殖而成的单菌落，通过统计菌落的数量可以推测所涂菌液中细菌的数量。

(2)没有氮源；属于固体培养基从多种微生物中分离出目的菌。

(3)将聚集的菌种逐步稀释，分散到培养基表面，最终达到分离的效果有的菌落中的细菌能分解草甘膦，菌落周围因为草甘膦被分解而出现透明圈，有的菌落中的细菌不能分解草甘膦，菌落周围不能形成透明圈27、略

【分析】【分析】

图1可知：T-2毒素是一种常见的菌素；CYP3A是降解T-2毒素的关键酶，T-2毒素可诱导其表达水平升高，当用两种调控序列同时连接启动子，启动子的活性最高。

图2可知：野生型探针能与NF-Y结合；突变型探针不能与NF-Y结合，NF-Y抗体一定能与NF-Y结合。

【详解】

（1）初级代谢产物一般是霉菌生命活动所必需的，大多存在于细胞内。次级代谢产物不是霉菌生命活动必需的，并且分泌到体外，故T-2毒素是霉菌的次级代谢产物。T-2毒素是一种由霉菌分泌的脂溶性小分子，脂溶性小分子以自由扩散的方式进入细胞。

（2）实验的自变量是有无调控序列；根据单一变量原则，对照组的目的是为了排除无光变量的影响，除了没有调控序列，其他处理和实验组相同，所以对照组和实验组猪肝细胞均导入含CYP3A基因启动子及LUC基因的表达载体，然后向各组猪肝细胞培养液中加入加入等量T-2毒素，适宜条件下进行培养。从图中信息可知，缺失两个调控序列和对照组活性一致，缺失一个比对照组活性略强，两个都存在活性最高，说明这两个调控序列是CYP3A基因响应T-2毒素的核心元件。故缺失两个调控序列或其中任一个，T-2毒素都不能诱导启动子活性明显增强。

（3）①实验的目的是要验证NF-Y能与B1结合；根据第2组和第3组结果，依据B1序列制备的NF-Y结合位点野生型探针能与NF-Y结合，根据第4组结果，突变型探针不能与NF-Y结合。第5组加入了NF-Y抗体，一定能与NF-Y结合。故可以解释为：结合位点突变的探针不能结合核蛋白中的NF-Y，也不会竞争NF-Y与标记探针的结合，所以第4组与第2组同样位置出现阻滞带。第5组，NF-Y的抗体结合NF-Y，因此第5组中出现标记探针；NF-Y和NF-Y抗体的结合物，结合物分子量大，阻滞带的位置更靠后。

②假设NF-Y和Sp1通过互作共同发挥调控功能，它们之间的距离是发挥作用的最佳距离，故增大或缩小B1和B2两者之间的距离都会降低CYP3A基因的启动子的活性。【解析】(1)次级自由扩散。

(2)等量的T-2毒素缺失两个调控序列或其中任一个；T-2毒素都不能诱导启动子活性增强。

(3)结合位点突变的探针不能结合核蛋白中的NF-Y，也不会竞争NF-Y与标记探针的结合，所以第4组与第2组同样位置出现阻滞带。NF-Y的抗体结合NF-Y，因此第5组中出现标记探针、NF-Y和NF-Y抗体的结合物，结合物分子量大，阻滞带的位置更靠后。NF-Y和Sp1通过互作共同发挥调控功能，它们之间的距离是发挥作用的最佳距离。28、略

【分析】【分析】

1；利用显微镜进行直接计数；也是一种常用的、快速直观的测定微生物数量的方法。该方法利用特定的细菌计数板或血细胞计数板，在显微镜下观察、计数，然后再计算一定体积的样品中微生物的数量，统计的结果一般是活菌数和死菌数的总和。细菌计数板和血细胞计数板的计数原理相同。血细胞计数板比细菌计数板厚，常用于相对较大的酵母菌细胞、霉菌孢子等的计数。用细菌计数板可对细菌等较小的细胞进行观察和计数。

2；灭菌则是指使用强烈的理化方法杀死物体内外所有的微生物；包括芽孢和孢子。湿热灭菌：高压蒸汽灭菌（压力为100kPa、温度为121℃、15~30min）；干热灭菌：160~170℃热空气维持2~3h。耐高温的和需要保持干燥的物品，如玻璃器皿、金属用具等；灼烧灭菌：接种工具。接种过程中，试管口、瓶口等容易被污染的部位。

【详解】

（1）大肠杆菌是细菌；培养培养大肠杆菌时，需要将培养基的pH调至中性或弱碱性，对培养基一般采用高压蒸汽灭菌法进行灭菌。

（2）细菌计数板和血细胞计数板的计数原理相同。血细胞计数板比细菌计数板厚；常用于相对较大的酵母菌细胞；霉菌孢子等的计数。用细菌计数板可对细菌等较小的细胞进行观察和计数。该方法统计的结果一般是活菌数和死菌数的总和，所以统计的细菌数目往往比实际活菌数目多。

（3）本实验为了证明野生型大肠杆菌经紫外线照射后；可获得组氨酸缺陷型突变菌株，可将野生型大肠杆菌经紫外线照射后接种于不含组氨酸的完全培养基上，适宜条件下培养一段时间后观察大肠杆菌是否生长，如果在培养基上无大肠杆菌生长，说明野生型大肠杆菌经紫外线照射后，获得了组氨酸缺陷型突变菌株。具体实验思路及结果如下：

实验思路：使用稀释涂布平板法将紫外线照射后的大肠杆菌接种于不含组氨酸的完全培养基上；标记为甲组；使用稀释涂布平板法将等量的野生型大肠杆菌接种于不含组氨酸的完全培养基上，标记为乙组；将未接种的不含组氨酸的完全培养基标记为丙组；将甲；乙、丙组培养基放于相同且适宜的环境中培养，一段时间后观察并统计培养基上的菌落数。

实验结果：乙组培养基出现较多菌落；甲组培养基没有出现菌落或出现菌落、但菌落数少于乙组；丙组培养基无菌落。【解析】(1)中性或弱碱高压蒸汽灭菌（或湿热灭菌）

(2)细菌计数板多。

(3)使用稀释涂布平板法将紫外线照射后的大肠杆菌接种于不含组氨酸的完全培养基上，标记为甲组；使用稀释涂布平板法将等量的野生型大肠杆菌接种于不含组氨酸的完全培养基上，标记为乙组；将未接种的不含组氨酸的完全培养基标记为丙组；将甲、乙、丙组培养基放于相同且适宜的环境中培养，一段时间后观察并统计培养基上的菌落数乙组培养基出现较多菌落；甲组培养基没有出现菌落或出现菌落、但菌落数少于乙组；丙组培养基无菌落六、综合题(共4题，共32分)29、略

【分析】【分析】

基因工程技术的基本步骤：

（1）目的基因的获取：方法有从基因文库中获取；利用PCR技术扩增和人工合成。

（2）基因表达载体的构建：是基因工程的核心步骤；基因表达载体包括目的基因；启动子、终止子和标记基因等。

（3）将目的基因导入受体细胞：根据受体细胞不同；导入的方法也不一样。将目的基因导入植物细胞的方法有农杆菌转化法；基因枪法和花粉管通道法；将目的基因导入动物细胞最有效的方法是显微注射法；将目的基因导入微生物细胞的方法是感受态细胞法。

（4）目的基因的检测与鉴定：分子水平上的检测：①检测转基因生物染色体的DNA是否插入目的基因--DNA分子杂交技术；②检测目的基因是否转录出了mRNA--分子杂交技术；③检测目的基因是否翻译成蛋白质--抗原-抗体杂交技术。个体水平上的鉴定：抗虫鉴定；抗病鉴定、活性鉴定等。

【详解】

（1）由图1可知：BT毒蛋白基因和转运肽基相邻；介于启动子与终止子之间，为构建BT毒蛋白基因和转运肽基因的融合基因，需用限制酶E1；E3、E4处理相关的DNA片段，再用DNA连接酶连接。

（2）构建基因表达载体时，应将融合基因插入Ti质粒的T-DNA区。用Ca2+处理农杆菌后获得感受态细胞；将其与基因表达载体混合完成转化后，由于重组质粒中含有潮霉素的抗性基因，故在添加潮霉素的培养基中，经筛选1得到含基因表达载体的农杆菌。

（3）为鉴定愈伤组织中是否含有目的基因；可利用碱基互补配对的原理，用分子水平的PCR/DNA分子杂交进行鉴定，也可以通过肉眼观察选择蓝色的愈伤组织，以确定目的基因是否表达。

（4）为获得具有抗性的转基因结球甘蓝；还可以通过选取长势相似的野生型和转基因结球甘蓝，分别进行抗虫接种实验，一段时间后，统计被害虫啃食的叶面积比，进行个体水平的检测。

（5）为减缓害虫对BT毒蛋白产生抗药性；延缓转基因结球甘蓝的抗虫效果逐年下降的情况，可将转基因结球甘蓝与非转基因结球甘蓝间隔种植或同时转入两种或两种以上不同机理的杀虫基因。

（6）由于转基因植物可能成为自然界原本不存在的“外来物种”；造成生物入侵；BT毒蛋白基因通过花粉扩散造成基因污染；通过食物链影响生物多样性，影响生态系统的结构和功能，故应注意相应的生态安全问题。

【点睛】

本题主要考查基因工程的相关知识，要求考生识记基因工程的操作步骤，能结合题干和图形获取有效信息，再结合所学知识准确答题，难度中等。【解析】E1、E3、E4DNA连接酶T-DNA感受态潮霉素PCR/DNA分子杂交蓝色表达选取长势相似的野生型和转基因结球甘蓝，分别进行抗虫接种实验，一段时间后，统计被害虫啃食的叶面积比例。a、b转基因植物可能成为自然界原本不存在的“外来物种”，造成生物入侵；BT毒蛋白基因通过花粉扩散造成基因污染；通过食物链影响生物多样性，影响生态系统的结构和功能（答出一点即可）30、略

【分析】【分析】

基因工程技术的基本步骤：

（1）目的基因的获取：方法有从基因文库中获取；利用PCR技术扩增和人工合成；

（2）基因表达载体的构建：是基因工程的核心步骤；基因表达载体包括目的基因；启动子、终止子和标记基因等；

（3）将目的基因导入受体细胞：根据受体细胞不同；导入的方法也不一样．将目的基因导入植物细胞的方法有农杆菌转化法；基因枪法和花粉管通道法；将目的基因导入动物细胞最有效的方法是显微注射法；将目的基因导入微生物细胞的方法是感受态细胞法；