2025年浙教版选择性必修3生物上册阶段测试试卷

…………○…………内…………○…………装…………○…………内…………○…………装…………○…………订…………○…………线…………○…………※※请※※不※※要※※在※※装※※订※※线※※内※※答※※题※※…………○…………外…………○…………装…………○…………订…………○…………线…………○…………第=page22页，总=sectionpages22页第=page11页，总=sectionpages11页2025年浙教版选择性必修3生物上册阶段测试试卷615考试试卷考试范围：全部知识点；考试时间：120分钟学校：______姓名：______班级：______考号：______总分栏题号一二三四五六总分得分评卷人得分一、选择题(共9题，共18分)1、戊型肝炎病毒是一种RNA病毒；ORF2基因编码的结构蛋白（pORF2）位于病毒表面，构成病毒的衣売。我国科研人员利用基因工程技术，在大肠杆菌中表达pORF2，制备戊型肝炎疫苗，过程如图。下列关于该疫苗的叙述正确的是（）

A.过程①需要的酶是RNA聚合酶，原料是U、G、CB.重组基因表达载体上的启动子需来源于戊型肝炎病毒C.过程⑤需要用聚乙二醇处理大肠杆菌使其处于感受态D.过程⑥大量制备pORF2蛋白前应做相应的检测与鉴定2、甲；乙两图表示从细菌细胞中获取目的基因的两种方法；以下说法中错误的是（）

A.甲方法可建立该细菌的基因组文库B.乙方法可建立该细菌的cDNA文库C.甲方法要以脱氧核苷酸为原料D.乙方法需要反转录酶参与3、下列有关腐乳制作的叙述，正确的是（）A.所使用豆腐含水量过高有利于毛霉菌丝生长B.腐乳坯堆积会改变发酵温度而影响毛霉生长C.卤汤处理可使豆腐块变硬且能抑制杂菌生长D.加盐腌制可抑制杂菌生长且能赋予独特风味4、A种植物细胞和B种植物细胞的结构如图所示（仅显示细胞核）；将A；B两种植物细胞去掉细胞壁后，诱导二者的原生质体融合，形成单核的杂种细胞，若经过组织培养得到了杂种植株，则该杂种植株是（）

A.二倍体，基因型是DdYyRrB.三倍体，基因型是DdYyRrC.四倍体，基因型是DdYyRrD.四倍体，基因型是DDddYYyyRRrr5、微生物代谢过程中产生的CO32-，可与环境中的Ca2+反应形成碳酸钙沉淀，这种现象称为微生物诱导碳酸钙沉淀（MICP）。MICP形成的机制多种多样，通过细菌分解尿素引起碳酸钙沉淀是最广泛的方式。下列相关说法正确的是（）A.尿素只有被土壤中的细菌分解成氨后，才能被植物利用B.通常用以尿素为唯一碳源的培养基筛选分解尿素的细菌C.在培养基中加入酚酞指示剂，可以初步鉴定尿素分解菌D.尿素分解菌可以分解碳酸钙质碎石，有效避免土壤板结6、农杆菌转化法是植物转基因技术中常用的转化方法之一。下列与该方法相关的叙述，错误的是（）A.土壤农杆菌是重组质粒的受体细胞B.T—DNA是拟核DNA上的一段序列C.农杆菌能侵染双子叶植物和裸子植物D.新鲜叶圆片与农杆菌在适宜条件下共培养，部分细胞会被转化7、野生型大肠杆菌菌株能在基本培养基上生长，赖氨酸营养缺陷型突变菌由于发生基因突变只能在添加了赖氨酸的培养基上生长。下图为以野生型菌株为材料，诱变、纯化赖氨酸营养缺陷突变株的部分流程图，数字代表培养基，A、B、C表示操作步骤。下列有关说法正确的是（）

（原位影印是指用无菌绒布轻盖在已长好菌落的培养基②上；然后不转动任何角度，将②上的菌落按原位“复印”至新的培养基③和④上）

A.野生型大肠杆菌能够合成所需的全部氨基酸，因此培养基中无需提供氮源B.①②④培养基中需添加赖氨酸，而③培养基中不能添加赖氨酸C.需将①中的菌液适当稀释后，用接种环蘸取菌液在②上进行划线接种D.从④培养基中挑取乙菌落进行纯化培养即可获得所需突变株8、重庆忠州豆腐乳被业界称为“腐乳王”，因风味独特而盛销不衰，远销英国、加拿大、中东、东南亚等国家和地区，腐乳的制作流程为“让豆腐块长出白色菌丝（前期发酵）→加盐腌制→加卤汤装瓶→密封腌制”。下列相关说法正确的是（）A.腐乳制作过程中有多种微生物的参与，其中起主要作用的是曲霉B.霉菌分泌的蛋白酶等物质，能将蛋白质分解为小分子肽和氨基酸C.加盐和卤汤腌制的目的仅仅是调味，并不能抑制瓶内杂菌的生长D.豆腐块相当于固体培养基，腌制用的玻璃瓶常用紫外线进行灭菌9、科研人员用电融合的方法诱导母羊的乳腺上皮细胞与另一只羊的去核卵细胞融合，然后将重构胚移植到代孕母羊的体内，最终培育出了克隆羊多莉。下表是科学家获得的部分实验数据，下列相关叙述，不合理的是（）。实验组别序号①②核供体细胞6岁母羊的乳腺上皮细胞发育到第9天的早期胚胎细胞融合成功细胞数277385早期发育成功胚胎数2990移植后成功怀孕母羊数/代孕母羊数1/1314/27出生并成活羔羊数1（多莉）4A.两组羔羊性状主要与核供体母羊相同B.②组比①组成功率高，可能因为胚胎细胞分化程度低C.本实验涉及到细胞培养、核移植和胚胎分割技术D.克隆技术应用于人类，可能存在一定的伦理风险评卷人得分二、多选题(共7题，共14分)10、如图是研究人员从红棕壤中筛选高效分解尿素细菌的示意图；有关叙述正确的是（）

A.在配制步骤②、③的培养基时，应先调pH后高压蒸汽灭菌B.步骤③采用涂布平板法接种，并需向牛肉膏蛋白胨培养基中加入尿素C.步骤④挑取③中不同种的菌落分别接种，比较细菌分解尿素的能力D.步骤③纯化分解尿素细菌的原理是将聚集的细菌分散，可以获得单细胞菌落11、下列相关实验的叙述，正确的是（）A.发酵过程中，要严格控制温度、pH等发酵条件，否则会影响菌种代谢产物的形成B.DNA的粗提取与鉴定实验中，用菜花替代鸡血作为实验材料，实验操作会有不同C.PCR实验中使用的微量离心管、枪头、缓冲液、蒸馏水等在使用前不用灭菌D.用琼脂糖凝胶电泳鉴定PCR产物时，DNA分子的迁移速率与凝胶浓度、分子大小无关12、B基因存在于水稻基因组中；其仅在体细胞（2n）和精子中正常表达，但在卵细胞中不转录。为研究B基因表达对卵细胞的影响，设计了如下实验，培育转基因植株。以下鉴定筛选转基因植株的方式正确的是（）

A.将随机断裂的B基因片段制备成探针进行DNA分子杂交B.以Luc基因为模板设计探针进行DNA分子杂交C.以B基因编码蛋白的序列为模板设计探针与从卵细胞提取的mRNA杂交D.检测加入荧光素的卵细胞中是否发出荧光13、下表有关基因表达的选项中；能够表达的有（）

。基因表达的细胞表达产物A细菌抗虫蛋白基因抗虫棉叶肉细胞细菌抗虫蛋白B人酪氨酸酶基因正常人皮肤细胞人酪氨酸酶C动物胰岛素基因大肠杆菌工程菌细胞动物胰岛素D兔血红蛋白基因兔成熟红细胞兔血红蛋白A.AB.BC.CD.D14、我国首例绿色荧光蛋白“转基因”克隆猪的培育过程如图所示，其中字母代表结构或生物，数字代表过程，下列相关叙述错误的是（）

A.为了①和②的顺利完成，需要用灭活的病毒对细胞进行诱导B.将C的细胞核去掉，实质上是去除纺锤体—染色体复合物C.为避免将E植入F时产生排斥反应，移植前应给F注射免疫抑制剂D.移入F的桑葚胚要经历囊胚、原肠胚等阶段才能形成猪的幼体15、转基因作物的推广种植，大幅度提高了粮食产量，取得了巨大的经济效益和生态效益硕果累累的转基因成果在带给人们喜悦的同时，也促使人们关注转基因生物的安全性问题。下列有关转基因作物的安全性的叙述，正确的是（）A.转入抗性基因的植物可能成为“入侵物种”，影响生态系统的稳定性B.抗性基因可能会随花粉传播到田间近缘野生植物体内，造成基因污染C.若目的基因来自自然界，则培育出的转基因植物不会有安全性问题D.大面积种植抗虫棉，有可能会导致棉铃虫群体中相关抗性基因频率增大16、某牧场引进一只产肉性能优异的良种公羊；为了在短时间内获得具有该公羊优良性状的大量后代，该牧场通过以下流程进行了相关操作。下列有关叙述错误的是（）

A.在体外受精前对采集到的精子要进行获能处理B.用孕激素对供体母羊进行处理，可获得更多的卵母细胞C.为避免受体母羊对植入胚胎产生排斥反应，应注射免疫抑制剂D.为了提高已有胚胎的利用率，可采用胚胎分割技术评卷人得分三、填空题(共8题，共16分)17、一般包括______、______等技术18、微生物________________的方法很多，最常用的是_____________和__________________。19、通过统计平板上的________________，就能推测出样品中大约含有多少活菌。为了保证结果准确，一般选择菌落数在_________________________的平板进行计数。20、转化的概念：是______进入受体细胞内，并且在受体细胞内维持______的过程。21、目的基因是指：______22、沙门氏菌是一种常见的食源性致病菌；被感染了沙门氏菌的人或带菌者的粪便污染的食品，会使人发生食物中毒。沙门氏菌的最适繁殖温度为37°C，在20℃以上即能大出繁殖，其对热抵抗力不强，在60℃的条件下15min就能被杀死。肉桂精油是从肉桂树中提炼获得的，具有不溶于水；易溶于有机溶剂且易挥发的特性，能抑制沙门氏菌的繁殖。回答下列问题：

（1）培养沙门氏菌时要进行无菌操作，常用的灭菌方法有________（答出两种）。用平板培养沙门氏菌时一般需要将平板________（填“倒置”或“正置”）。单个细菌在平板上会形成菌落，研究人员通常可根据菌落的形状、大小和颜色等特征来初步区分不同种的微生物，原因是________。

（2）从鸡粪便取样，经选择培养后需要经过一系列________才能将样品涂布到鉴别培养基上。对获得的沙门氏菌常采用________的方法长期保存。

（3）根据题干信息，为避免食用被沙门氏菌污染的食品而引发的食物中毒，家庭中储存、加工食品的方法是________。

（4）根据肉桂精油的化学特性，可采用________法来提取，提取过程中影响精油品质的因素有________。23、我国政府同样禁止进行治疗性克隆实验。（选择性必修3P108）()24、动物细胞培养的条件：_____、_____、_____、_____等。评卷人得分四、判断题(共2题，共18分)25、通过体细胞核移植技术已经获得了多种克隆动物，该技术的成功率已经很高。（选择性必修3P54）()A.正确B.错误26、胚胎发育早期，细胞的数量不断增加，胚胎的总体积也增加。()A.正确B.错误评卷人得分五、实验题(共3题，共12分)27、单克隆抗体特异性强；灵敏度高，用于诊疗疾病具有准确；高效等特点。下图表示单克隆抗体制备过程。

回答下列问题：

（1）若细胞B是小鼠的骨髓瘤细胞；则A是_________________细胞，诱导d过程常用的因素是_________________（答出一个即可）。

（2）用于筛选细胞D的培养基必需满足两个条件：一是_________________细胞都会死亡；二是保证_________________细胞能生长。

（3）使用合成培养基体外培养杂交瘤细胞时；通常需要加入_________________等一些天然成分，并置于含有_________混合气体的培养箱中进行培养。

（4）制备抗新冠病毒单克隆抗体检测试剂，可用_________________（选填数字标号：①新冠病毒灭活疫苗、②新冠病毒RNA疫苗、③新冠病毒灭活疫苗或RNA疫苗）免疫小鼠，以获得图中的A细胞。28、酿酒；酿醋、腐乳、泡菜、酱制品等是源于中国的传统发酵技术；为部分地区经济发展做出巨大贡献。请依据相关生物学知识回到下列问题。

（1）泡菜腌制过程中，进行发酵的主要微生物在细胞结构上属于___________生物。不能采用加入抗生素的方法来抑制杂菌的原因是____________________________。

（2）腐乳外部有一层致密的“皮”，是前期发酵时______等生物在豆腐表面上生长的菌丝。

（3）测定亚硝酸盐含量的方法是___________，在泡菜腌制过程中定期测定亚硝酸盐含量的目的是____________________________。

（4）为了保证既无杂菌，又能使发酵菌发挥正常作用，泡菜所用盐水应__________再使用。

（5）某些制作泡菜的某些蔬菜也可用作DNA粗提取与鉴定，沸水浴条件下，提取出的DNA可与_________试剂反应呈_______________色。29、科学家的发现给人类的生活带来了无限的想象；他们采集了某深海海域的沉积物样品，分离；鉴定得到其中的深海放线菌，以期获得具有前景的抗生素替代品。据此回答下列问题：

(1)研究人员欲筛选出深海放线菌进行研究，取1g沉积物样品接种在液体培养基中摇瓶培养，稀释后取菌液通过_______________法接种到高氏一号（加数滴质量分数为10%的酚）培养基表面以获得单菌落。

(2)通过PCR技术扩增分离得到的放线菌的16SrRNA基因可进行菌株的种属鉴定。PCR技术中起关键作用的酶是_____________。该技术能在放线菌总的DNA中专一性扩增出16SrRNA基因的原因是______________。PCR产物一般可通过_________________鉴定。

(3)科学家还将Oct3/4、Sox2、c-Mc和KIf4基因通过逆转录病毒转入小鼠成纤维细胞中。2~3周后，这些细胞显示出ES细胞的形态、具有活跃的分裂能力，它们就是iPS细胞。在这个实验过程中，逆转录病毒的作用是_______________如何证明iPS细胞的产生不是由于培养基的作用？请写出实验设计思路______________评卷人得分六、综合题(共4题，共24分)30、新冠病毒（COVID-19）是一种单股正链RNA病毒；为了更大限度地提升疫苗研发的成功率，我国的科研攻关组布局了新冠病毒的灭活疫苗；核酸疫苗、基因工程疫苗这3大类疫苗的技术路线。请回答下面关于疫苗生产的相关问题：

（1）2020年12月31日，新冠灭活疫苗已获得国家药监局批准附条件上市。灭活疫苗是在体外培养新冠病毒，然后将其灭活，将其制成疫苗。在制备灭活疫苗时，要先取相关细胞进行________________（技术），再接种病毒。该过程中，要给细胞合适的培养条件，包括________________、适宜的营养、温度和pH以及适宜的________________。

（2）基因工程疫苗被称为第二代疫苗；是指将病毒基因片段导入合适的表达载体，在体外表达病毒抗原后经纯化制备而成的疫苗，或用能够表达病毒抗原的活的重组载体本身制成的疫苗。常见的基因工程疫苗包括重组亚单位疫苗；病毒样颗粒疫苗、活病毒载体疫苗等。

①重组亚单位疫苗相当于生产不完整的病毒，而是单独生产最可能作为抗原的蛋白质制成疫苗。病毒的结构和病毒侵染人体细胞的过程如下图所示。选择蛋白________为重组亚单位疫苗的生产蛋白最合适。若要在体外获得该病毒的DNA，需要向试管中加入________________________作为模板、________________________作为原料、________作为催化剂等进行合成。常选择大肠杆菌作为相关基因的受体细胞，其优点是_______________________________________________。

②活病毒载体疫苗是指将相关蛋白质基因导入某些活病毒本身，常用的病毒载体包括腺病毒、流感病毒等。腺病毒是一种常见的DNA病毒，其优点包括宿主范围广泛、________________、病毒基因组相对容易操作、允许插入的外源基因容量大、病毒增殖速度快、颗粒比较稳定、冻干后无须冷藏等，目前已经成为最常用的病毒载体之一。在制造活病毒载体时，需要用到的工具酶是________________、________________等。

（3）核酸疫苗包括mRNA疫苗和DNA疫苗；是将编码相关蛋白质的基因；mRNA或者DNA注入人体，利用自身细胞合成外源蛋白，刺激人体产生抗体。目前，莫德纳公司和辉瑞/拜恩泰科的mRNA疫苗，已在美国和欧洲等地获得紧急授权批准。

①已知RNA病毒的核酸有正链RNA（+RNA）和负链RNA（-RNA）等类型；其区别如下图：

则mRNA疫苗中应将COVID-19中的RNA________（选填“本身”或“其互补链”）作为疫苗；注入人体。

②若将制好的RNA直接注入人体，会被人体内的________催化水解为核苷酸，因此可以将其装入脂质体中，送入细胞。这些RNA进入细胞后，能不能遗传下去？________（选填“能”或“不能”）。31、下图是培育表达人乳铁蛋白的乳腺生物反应器的技术路线。图中tet表示四环素抗性基因；amp表示氨苄青霉素抗性基因，BamHI；HindⅢ、SmaΙ直线所示为三种限制酶的切割位点：

（1）科学家用PCR的方法对人乳铁蛋白基因进行体外扩增，加热至94℃的目的是使DNA样品的_______键断裂；如果人乳铁蛋白基因的部分序列是：

5’ATGGCTAGGAAC3’

3’TACCGATCCTTG5’

根据上述序列应选择引物B和_______（填字母）进行PCR。

【选项A】引物：5’-TACCGA-3’【选项B】引物：5’-GTTCCT-3’

【选项C】引物：5’-AUGGCU-3’【选项D】引物：5’-ATGGCT-3’

（2）图中将人乳铁蛋白基因插入载体，需用_______、______限制酶同时切割载体和人乳铁蛋白基因。筛选含有重组载体的大肠杆菌首先需要在含_________的培养基上进行。

（3）能使人乳铁蛋白基因在乳腺细胞中特异性表达的调控序列是______

【选项A】启动子【选项B】tetR【选项C】复制原点【选项D】ampR

（4）过程①可采用的操作方法是________技术。

【选项A】农杆菌转化【选项B】大肠杆菌转化【选项C】显微注射【选项D】细胞融合。

（5）为检测人乳铁蛋白是否成功表达，通常可采用________技术。32、马铃薯是重要的经济作物；植物细胞工程在马铃薯的脱毒及育种等方面有重要应用。请回答下列问题：

(1)培育脱毒马铃薯时，外植体宜选用___________(“茎尖”叶片”)，不选另一个的理由是___________。

(2)植物组织培养常用到愈伤组织培养基、生芽培养基和生根培养基。在愈伤组织培养基上，外植体经脱分化形成愈伤组织，愈伤组织是一团___________。在再分化阶段，生长素和细胞分裂素参与了细胞分化方向的调节，与生根培养基相比，一般情况下生芽培养基中___________。

(3)马铃薯栽培种的抗病性和抗逆性较差，野生马铃薯种的抗病性和抗逆性较好，但二者存在杂交不亲合性。利用野生马铃薯种，通过细胞工程改进马铃薯栽培种种质的思路是___________。

(4)避免微生物污染、优化培养条件可提高植物组织培养的成功率。在植物组织培养时，应从___________等方面制定措施，减少污染(至少答出2点)；在培养室中培养时，注意优化培养环境，控制___________等培养条件(至少答出3点)。33、（一）现科研人员研究利用玉米秸秆作为廉价的糖源转化生产燃料酒精；不仅可以缓解能源危机；减少环境污染，而且是实现可持续发展战略的基本保障，具体的工艺流程如下图。请回答下列问题：

（1）由于木质纤维素组成成分复杂、结构稳定，生物降解时难以迅速进行，常用酸或碱预处理，目的是打断纤维素内部的化学键，降低聚合度，易被_______水解。

（2）将预处理后的玉米秸秆进行_______灭菌，冷却后接种一定浓度的里斯木霉菌悬液，24h就能产生大量的葡萄糖，葡萄糖与蒽酮试剂能产生颜色，为了检测秸秆水解效果，可采用光电比色法测定糖液中的葡萄糖含量，之前制作_______的标准曲线（填写坐标），使用的比色杯若光面玻璃不干净，将导致测量的数据_______（填偏小、偏大或无影响）。推测加入里氏木霉菌悬液的用途是_______。

（3）发酵过程接种休哈塔酵母，该微生物在_______的发酵液中可以生长繁殖；而绝大多数其他微生物都因无法适应该环境而抑制。

（4）酿酒的残渣堆积会积累醋杆菌，可从中筛选优良菌株。可采用_______方法将混合菌液接种到加有碳酸钙粉末的固体培养基中，加入碳酸钙可以筛选菌株的实验原理是_______。

（二）转基因技术可以使重组生物增加人们所期望的新性状；培育出新品种，下图是基因工程操作流程图，请根据图示回答下列问题：

（5）获取序列未知的目的基因，常用的方法是从______中提取，①过程中常用的酶有______。

（6）若要通过工程菌获得人类胰岛素，②过程中常用氯化钙处理大肠杆菌，其目的是______。为了检测目的基因是否成功表达出胰岛素，需要采用的方法有______

（7）在培育转基因抗冻蕃茄时，将离体蕃茄叶组织经脱分化形成愈伤组织，再通过______培养得到单细胞，将外源基因导入其中并培育形成抗冻蕃茄植株，过程④中用到的植物细胞工程技术是______

（8）若要培育能生产彩色羊毛的转基因羊，则需将转基因的受体细胞培养到早期胚胎后，再通过______过程形成转基因羊。参考答案一、选择题(共9题，共18分)1、D【分析】【分析】

基因工程技术的基本步骤：（1）目的基因的获取：方法有从基因文库中获取；利用PCR技术扩增和人工合成；（2）基因表达载体的构建：是基因工程的核心步骤；基因表达载体包括目的基因、启动子、终止子和标记基因等；（3）将目的基因导入受体细胞：根据受体细胞不同，导入的方法也不一样。将目的基因导入植物细胞的方法有农杆菌转化法、基因枪法和花粉管通道法；将目的基因导入动物细胞最有效的方法是显微注射法；将目的基因导入微生物细胞的方法是感受态细胞法；（4）目的基因的检测与鉴定：分子水平上的检测：①检测转基因生物染色体的DNA是否插入目的基因--DNA分子杂交技术；②检测目的基因是否转录出了mRNA--分子杂交技术；③检测目的基因是否翻译成蛋白质--抗原-抗体杂交技术。个体水平上的鉴定：抗虫鉴定、抗病鉴定、活性鉴定等。

【详解】

A；戊型肝炎病毒是一种RNA病毒；过程①是以病毒RNA为模板合成DNA，获取目的基因的过程，需要的酶是逆转录酶，原料是四种脱氧核苷酸，A错误；

B；启动子是一段有特殊结构的DNA片段；其作用是供RNA聚合酶的识别结合以驱动目的基因的转录，启动子具有物种或组织特异性，构建在大肠杆菌细胞内特异表达pORF2蛋白的载体时，需要选择大肠杆菌细胞的启动子，而不能选择其他物种和组织细胞的启动子，B错误；

C、将目的基因导入微生物细胞的方法是感受态细胞法，需要用Ca2+处理大肠杆菌；增大大肠杆菌细胞壁的透过性，使其处于感受态，C错误；

D；过程⑥大量制备pORF2蛋白前应对受体大肠杆菌进行目的基因的检测与鉴定；筛选出能表达pORF2蛋白的大肠杆菌进行培养，大量制备pORF2蛋白，D正确。

【点睛】2、C【分析】【分析】

分析图示可知，甲图中a表示从细菌细胞中获取的含目的基因的DNA分子，b表示用限制酶切割DNA分子；乙图表示通过反转录法合成目的基因；c表示从细菌细胞中获取的RNA，d表示反转录过程。

【详解】

A；甲图获取的是该细菌的全部DNA分子；因此用限制酶切割后可用于构建基因组文库，A正确；

B；乙图表示通过反转录法得到DNA分子；只包含该生物的部分基因，因此可用于构建cDNA文库，B正确；

C；甲图中是利用限制酶切割得到的目的基因；所以不需要脱氧核苷酸原料，C错误；

D；乙图为反转录过程；需要逆转录酶参与，D正确。

故选C。

【点睛】

本题考查获取目的基因的方法，其中比较基因组文库和部分基因文库，掌握反转录过程是解题的关键。3、B【分析】【分析】

参与腐乳制作的微生物主要是毛霉；其新陈代谢类型是异养需氧型。腐乳制作的原理：毛霉等微生物产生的蛋白酶能将豆腐中的蛋白质分解成小分子的肽和氨基酸；脂肪酶可将脂肪水解成甘油和脂肪酸。

【详解】

A；豆腐含水量过高不利于毛霉生长；A错误；

B；腐乳坯堆积会导致发酵温度升高；从而影响毛霉生长，B正确；

C；加盐腌制可以析出豆腐中的水分；使豆腐块变硬，并可抑制杂菌的生长，使豆腐块变硬且能抑制杂菌生长是盐的作用，而不是卤汤的作用，C错误；

D；加盐腌制可以抑制杂菌生长；但不能赋予独特风味，D错误。

故选B。

【点睛】4、C【分析】【分析】

植物体细胞杂交利用的原理是细胞膜的流动性；细胞的全能性，其操作流程为：首先获得植物的体细胞，而后去除细胞壁以获得原生质体，然后利用离心；电刺激、聚乙二醇等试剂诱导原生质体融合，当该原生质体再生出新的细胞壁意味着杂种细胞诱导成功，而后对杂种细胞进行植物组织培养技术，获得杂种植株，该过程的意义是克服远缘杂交不亲和的障碍。

【详解】

据图可知，A物种基因型为Dd，属于二倍体，B物种的基因型为YyRr，也属于二倍体。植物细胞融合后形成的杂种细胞含有两个亲本的遗传物质，基因型为DdYyRr；属于异源四倍体，即C正确。

故选C。

【点睛】5、A【分析】由于细菌在分解尿素的过程中合成脲酶；脲酶将尿素分解成氨，会使培养基碱性增强，pH升高，所以可以用检测pH的变化的方法来判断尿素是否被分解，可在培养基中加入酚红指示剂，尿素被分解后产生氨，pH升高，指示剂变红。

【详解】

A；尿素不能直接被植物吸收；只有被土壤中的细菌分解成氨后，才能被植物利用，A正确；

B；通常用以尿素为唯一氮源的培养基筛选分解尿素的细菌；B错误；

C；根据分析可知；在培养基中加入酚红指示剂，可以初步鉴定尿素分解菌，C错误；

D；由题意可知；尿素分解菌分解尿素可引起碳酸钙沉淀，而不能分解碳酸钙质碎石，D错误。

故选A。6、B【分析】【分析】

农杆菌转化法的原理：农杆菌中的Ti质粒上的T-DNA可转移至受体细胞；并且整合到受体细胞染色体的DNA上。根据农杆菌的这一特点，如果将目的基因插入到Ti质粒的T-DNA上，通过农杆菌的转化作用，就可以把目的基因整合到植物细胞中染色体的DNA上。

【详解】

A；将目的基因与载体相连形成重组质粒后；要导入土壤农杆菌内，再让农杆菌去侵染植物细胞，A正确；

B；T-DNA是位于Ti质粒中的一段序列；不位于拟核，B错误；

C；农杆菌能在自然条件下侵染双子叶植物和裸子植物；对大多数单子叶植物没有侵染能力，C正确；

D；农杆菌转化法的转化效率不是100%；因此适宜条件下，新鲜叶圆片与农杆菌共培养后，一部分细胞会被转化，D正确。

故选B。7、B【分析】【分析】

培养基：人们按照微生物对营养物质的不同需求；配制出供其生长繁殖的营养基质，是进行微生物培养的物质基础。

培养基种类：培养基按照物理性质可分为液体培养基；半固体培养基和固体培养基。

微生物的接种方法：平板划线法和稀释涂布平板法。

①平板划线法：通过接种环在琼脂固体培养基表面连续划线的操作；将聚集的菌种逐步稀释分散到培养基表面。

②稀释涂布平板法：将菌液进行一系列的梯度稀释；然后将不同稀释度的菌液分别涂布到琼脂固体培养基的表面，进行培养。

【详解】

A；野生型大肠杆菌不能够合成所需的全部氨基酸；并且还有别的有机物需要氮元素，因此培养基中需要提供氮源，A错误；

B；紫外线照射菌液；使大肠杆菌产生基因突变，便于筛选赖氨酸营养缺陷突变株，由于基因突变频率较低，且不定向，因此发生赖氨酸营养缺陷型突变的菌种不多，因此需要在①中添加赖氨酸来增大该突变株浓度，以便进行稀释涂布操作，②④中添加赖氨酸目的是使赖氨酸营养缺陷突变株能够在该培养基上生长，③不添加赖氨酸，赖氨酸营养缺陷突变株不能在其上繁殖形成菌落，通过③④对比，选择能在④中生长但是不能在③中生长的菌落即为赖氨酸营养缺陷突变株，故①②④培养基中需添加赖氨酸，而③培养基中不能添加赖氨酸，B正确；

C；需将①中的菌液适当稀释后；用微量移液器吸取少量菌液，用涂布器在②上进行涂布接种，C错误；

D；乙菌落在③培养基内对应位置也有菌落；属于野生型，不是所需突变株，D错误。

故选B。8、B【分析】【分析】

腐乳的制作原理：参与豆腐发酵的微生物有青霉；酵母、曲霉、毛霉等多种；其中起主要作用的是毛霉，其代谢类型为异养需氧型；毛霉能够产生蛋白酶和脂肪酶，将蛋白质和脂肪分别水解成小分子的肽和氨基酸、甘油和脂肪酸。

【详解】

A；参与豆腐发酵的微生物有青霉、酵母、曲霉、毛霉等多种；其中起主要作用的是毛霉，A错误；

B；毛霉能够产生蛋白酶和脂肪酶；将蛋白质和脂肪分别水解成小分子的肽和氨基酸、甘油和脂肪酸，B正确；

C；加盐腌制和加卤汤的目的是抑制瓶内杂菌生长的同时又能调制腐乳的风味；C错误；

D；豆腐块相当于固体培养基；能为微生物发酵提供营养条件等，在密封腌制时，最好将瓶口通过酒精灯的火焰，用灼烧法进行灭菌，以防止瓶口被污染，D错误。

故选B。9、C【分析】【分析】

胚胎移植的基本程序主要包括:

①对供；受体的选择和处理（选择遗传特性和生产性能优秀的供体；有健康的体质和正常繁殖能力的受体。用激素进行同期发情处理，用促性腺激素对供体母牛做超数排卵处理)；

②配种或人工授精；

③对胚胎的收集；检查、培养或保存（对胚胎进行质量检查；此时的胚胎应发育到桑椹或胚囊胚阶段)；

④对胚胎进行移植；

⑤移植后的检查。

【详解】

A；由于遗传物质主要在细胞核内；所以两组羔羊性状主要与核供体母羊相同，A正确；

B；动物胚胎细胞分化程度低、易恢复全能性；故②组比①组成功率高，B正确；

C；本实验涉及到细胞核移植、动物细胞培养；不涉及胚胎分割技术，C错误；

D；我国禁止对人类的克隆原因是克隆人一旦成功；将严重威胁着人类社会的稳定，打破原有的人际关系，可能引发一系列社会伦理、道德和法律问题，D正确。

故选C。二、多选题(共7题，共14分)10、A:C:D【分析】【分析】

微生物常见的接种的方法：①平板划线法：将已经熔化的培养基倒入培养皿制成平板；接种，划线，在恒温箱里培养。在线的开始部分，微生物往往连在一起生长，随着线的延伸，菌数逐渐减少，最后可能形成单个菌落。②稀释涂布平板法：将待分离的菌液经过大量稀释后，均匀涂布在培养皿表面，经培养后可形成单个菌落。

【详解】

A；在配制步骤②、③的培养基时；为避免杂菌污染，应先调pH值后再进行高压蒸汽灭菌，A正确；

B；要筛选出能高效分解尿素细菌；所选用的培养基要以尿素为唯一氮源，但牛肉膏和蛋白胨中都含有氮源，因此步骤③所用的培养基中不能含有牛肉膏蛋白胨，B错误；

C；步骤④挑取③中不同种的菌落分别接种；形成相互对照试验，比较细菌分解尿素的能力，C正确；

D；步骤③纯化分解尿素的原理是将聚集的细菌分散；可以获得单细胞菌落，D正确。

故选ACD。11、A:B【分析】【分析】

1；DNA粗提取和鉴定过程中破碎动植物细胞；获取含DNA的滤液区别：动物细胞的破碎比较容易，以鸡血细胞为例，在鸡血细胞液中加入一定量的蒸馏水，同时用玻璃棒搅拌，过滤后收集滤液即可。如果实验材料是植物细胞，需要先用洗涤剂溶解细胞膜。例如，提取洋葱的DNA时，在切碎的洋葱中加入一定的洗涤剂和食盐，进行充分的搅拌和研磨，过滤后收集研磨液。

2；影响DNA在琼脂糖凝胶中迁移速率的因素很多；包括DNA分子大小和构型、琼脂糖浓度、所加电压、电泳缓冲液的离子强度等。

【详解】

A；微生物发酵过程中要严格控制温度、pH、溶氧、通气量与转速等发酵条件；因为环境条件的变化不仅会影响菌种的生长繁殖，而且会影响代谢产物的形成，A正确；

B；用菜花替代鸡血作为实验材料；其实验操作步骤不完全相同，如植物细胞有细胞壁，破碎细胞时需要研磨并加入食盐和洗涤剂，B正确；

C；为避免外源DNA等因素的污染；PCR反应中使用的微量离心管、枪头、缓冲液以及蒸馏水等在使用前必须进行高压灭菌，C错误；

D；用琼脂糖凝胶电泳鉴定PCR产物时；DNA分子的迁移速率与琼脂糖的浓度、DNA分子大小及构型等因素有关，D错误。

故选AB。

【点睛】

本题考查发酵技术、DNA和蛋白质技术等相关知识，对于此类试题，需要考生注意的细节较多，如实验的原理、实验需要采用的试剂及试剂的作用、实验现象等，需要考生在平时的学习过程中注意积累。12、B:C:D【分析】【分析】

分析题图：图中①表示将目的基因导入农杆菌；②表示采用农杆菌转化法将目的基因导入植物细胞，之后再采用植物组织培养技术获得转基因植株。

【详解】

A；探针是指用放射性同位素（或荧光分子）标记的含有目的基因DNA片段；因此要以B基因编码蛋白的序列为模板设计探针，而不是将随机断裂的B基因片段制备成探针，A错误；

B；可用DNA分子杂交技术；即以Luc基因为模板设计探针进行DNA分子杂交，B正确；

C；用标记的目的基因作探针与mRNA杂交；即以B基因编码蛋白的序列为模板设计探针与从卵细胞提取的mRNA杂交，C正确；

D；检测目的基因是否翻译成蛋白质；由图可知B基因与Luc基因连接形成B-Luc融合基因，因此可通过Luc基因表达，检测加入荧光素的卵细胞中是否发出荧光，D正确。

故选BCD。13、A:B:C【分析】【分析】

基因工程的原理是基因重组；把一种生物的基因转入另一种生物后，目的基因可以在受体细胞中表达出相应的蛋白质。

【详解】

A；细菌抗虫蛋白基因可通过转基因技术转入棉花体内；在棉花的叶肉细胞中表达产生细菌抗虫蛋白，使棉花具有抗虫能力，A正确；

B；正常人皮肤细胞中含有人酪氨酸酶基因；人酪氨酸酶基因能够表达产生人酪氨酸酶，B正确；

C；动物胰岛素基因可通过转基因技术转移到大肠杆菌体内；在大肠杆菌工程菌细胞中合成动物胰岛素，C正确；

D；兔属于哺乳动物；其成熟的红细胞中没有细胞核和众多细胞器，所以不可能表达出血红蛋白，D错误。

故选ABC。

【点睛】14、A:C【分析】【分析】

分析图解，可以看出绿色荧光蛋白“转基因”克隆猪涉及了多项生物工程技术。图中B表示基因表达载体的构建；然后将目的基因导入猪胎儿的成纤维细胞，经过动物细胞培养筛选出转基因体细胞，然后该细胞的细胞核与猪的卵细胞进行细胞核移植获得重组细胞。重组细胞经过早期胚胎培养到桑椹胚或囊胚期，最后经过胚胎移植技术将早期胚胎移植到代孕母猪子宫内，最后生成转基因克隆猪。由此可见，该过程中利用基因工程、动物细胞培养、细胞核移植、早期胚胎培养和胚胎移植等技术。

【详解】

A；①是将重组DNA导入受体细胞；直接采用显微注射法，无需对受体细胞进行诱导，②过程通常是将细胞注入去核卵母细胞中，然后利用电融合法使D构建成功，A错误；

B；C是处于MⅡ期的卵母细胞；这个时期的“核”实际上是纺锤体—染色体复合物，B正确；

C；受体对移入的外来胚胎基本上不发生免疫排斥反应；因此无需给F注射免疫抑制剂，C错误；

D；移入F的通常是桑葚胚；它要经历囊胚、原肠胚阶段的发育才能成为猪的幼体，D正确。

故选AC。15、A:B:D【分析】【分析】

转基因生物的安全性问题包括：食物安全（滞后效应；过敏源、营养成分改变）、生物安全（对生物多样性的影响）、环境安全（对生态系统稳定性的影响）。

【详解】

A；转基因生物具有某些特殊性质；他们在某地区的竞争能力较强，可能成为“外来入侵物种”，威胁生态系统中其他生物的存在，从而影响生态系统的稳定性，A正确；

B；转基因作物的基因可以通过花粉传播到田间近缘野生植物体内；该近缘物种在通过授粉会造成基因进一步扩散和污染，B正确；

C；即使目的基因来自自然界；培自出的转基因植物仍然可能会有潜在的安全性向题，C错误；

D；大面积种植转基因抗虫棉；有可能会导致棉铃虫群体中相关抗性基因频率增加，D正确。

故选ABD。16、B:C【分析】【分析】

胚胎移植的基本程序主要包括:

①对供；受体的选择和处理（选择遗传特性和生产性能优秀的供体；有健康的体质和正常繁殖能力的受体）。用激素进行同期发情处理，用促性腺激素对供体母牛做超数排卵处理。

②配种或人工授精。

③对胚胎的收集；检查、培养或保存（对胚胎进行质量检查；此时的胚胎应发育到桑甚胚或胚囊胚阶段。④对胚胎进行移植。

⑤移植后的检查。

【详解】

A；采集到的良种公羊的精子；在体外受精前要进行获能处理，A正确；

B；对本地母羊注射促性腺激素可促使其超数排卵；进而获得更多卵母细胞，B错误；

C；受体母羊对移入子宫的外来胚胎基本上不发生免疫排斥反应；不需要注射免疫抑制剂，C错误；

D；采用胚胎分割技术可提高已有胚胎的利用率；D正确。

故选BC。三、填空题(共8题，共16分)17、略

【解析】①.动物细胞培养和核移植技术、②.动物细胞融合与单克隆抗体18、略

【解析】①.接种②.平板划线法③.稀释涂布平板法19、略

【分析】【分析】

【详解】

略【解析】菌落数30～30020、略

【分析】【分析】

【详解】

略【解析】目的基因稳定和表达21、略

【分析】【分析】

【详解】

略【解析】是人们所需要转移或改造的基因22、略

【分析】【分析】

微生物实验中常用的灭菌方法有干热灭菌；高压蒸汽灭菌和灼烧灭菌；其中对于培养基一般用高压蒸汽灭菌，对于接种环一般用灼烧灭菌，对于培养皿等可以用干热灭菌。培养基放入培养箱中需要倒置培养，既可以使培养基表面的水分更好地挥发，又可以防止皿盖上的水珠落入培养基造成污染。对于频繁使用的菌种，可以采用临时保藏的方法，即将菌种接种到试管的固体斜面培养基上，在合适的温度下培养，当菌落长成后将试管放入4℃的冰箱中保藏，以后每3-6个月都要重新将菌种从旧的培养基上转移到新鲜的培养基上；对于需要长期保存的菌种可以采用甘油管藏法，在3mL的甘油瓶中装入1mL甘油后灭菌，将1mL培养的菌液转移到甘油瓶中，与甘油充分混匀后放在-20℃的冷冻箱中保存。植物有效成分的提取方法主要有蒸馏法、压榨法和萃取法，如玫瑰精油的化学性质稳定，难溶于水，易溶于有机溶剂，能随水蒸气一同蒸馏，常采用蒸馏法提取；对于如橘皮精油，其主要储存在橘皮部分，由于橘皮精油的有效成分在用水蒸气蒸馏时会发生部分水解，又会产生原料焦糊问题，所以一般采用压榨法提取。

【详解】

（1）微生物培养中常用的灭菌方法有高压蒸汽灭菌法；灼烧灭菌法、干热灭菌法等。用平板培养沙门氏菌时一般需要将平板倒置；可以防止皿盖上的水珠落入培养基造成污染。在一定的培养条件下，不同种微生物表现出各自稳定的菌落特征，因此单个细菌在平板上会形成菌落，通常可根据菌落的形状、大小和颜色等特征来初步区分不同种的微生物。

（2）从鸡粪便取样；经选择培养后，如果要将样品涂布到鉴别培养基上，需要经过一系列梯度稀释。对获得的沙门氏菌进行长期保存常采用甘油管藏法。

（3）根据题干信息；沙门氏菌的最适繁殖温度为37°C，在20℃以上即能大出繁殖，其对热抵抗力不强，在60℃的条件下15min就能被杀死，因此为避免食用被沙门氏菌污染的食品而引发的食物中毒，家庭中可采取低温储存；高温加工方法进行处理。

（4）根据题意；肉桂精油不溶于水；易溶于有机溶剂且易挥发，故可采用水蒸气蒸馏法进行提取，提取过程中蒸馏的温度、时间都会影响精油品质。

【点睛】

本题主要考查现代生物科技的原理和运用，意在考查考生的识记能力和理解所学知识要点，把握知识间内在联系，形成知识网络结构的能力，能运用所学知识，准确判断问题的能力。【解析】灼烧灭菌法、高压蒸汽灭菌法、干热灭菌法倒置在一定的培养条件下，不同种微生物表现出各自稳定的菌落特征梯度稀释甘油管藏低温储存、高温加工水蒸气蒸馏蒸馏的温度、时间23、略

【分析】【详解】

中国政府的态度：禁止生殖性克隆，不反对治疗性克隆，该表述错误。【解析】错误24、略

【分析】略【解析】营养无菌、无毒的环境适宜的温度、pH和渗透压气体环境四、判断题(共2题，共18分)25、B【分析】【详解】

目前；用体细胞核移植技术得到克隆动物的成功率还很低。

故错误。26、B【分析】【详解】

胚胎发育早期；细胞数量不断增加，但胚胎总体积不变或略有缩小。

故错误。五、实验题(共3题，共12分)27、略

【分析】【分析】

1；动物细胞培养注意事项：

（1）原理：细胞增殖。

（2）培养基性质：液体培养基。动物细胞培养所用的培养基的成分与体内细胞基本相同；如需要有葡萄糖；氨基酸、促生长因子、无机盐、微量元素、动物血清或血浆，还有适量的抗生素以保证无菌环境。

（3）需要使用动物血清。

（4）适宜的温度：36.5℃±0.5℃；适宜的pH：7.2～7.4。

（5）无菌条件下进行。通常还要在培养液中添加一定量的抗生素；以防培养过程中的污染。此外，应定期更换培养液，防止代谢产物积累对细胞自身造成危害。

（6）气体环境：95%空气+5%CO2。O2是细胞代谢所必需的，CO2的主要作用是维持培养液的pH。

2；单克隆抗体的制备：

（1）单克隆抗体制备的原理包括：①免疫原理：B淋巴细胞能产生特异性抗体。②细胞融合原理：利用病毒对宿主细胞的穿透性使B淋巴细胞与骨髓瘤细胞融合。③动物细胞培养技术：对杂交瘤细胞进行体内；体外培养。

（2）单克隆抗体制备流程：先给小鼠注射特定抗原使之发生免疫反应；之后从小鼠脾脏中获取已经免疫的B淋巴细胞；诱导B细胞和骨髓瘤细胞融合，利用选择培养基筛选出杂交瘤细胞；进行抗体检测，筛选出能产生特定抗体的杂交瘤细胞；进行克隆化培养，即用培养基培养和注入小鼠腹腔中培养；最后从培养液或小鼠腹水中获取单克隆抗体。

（3）制备单克隆抗体过程中的几种细胞：①免疫B细胞（浆细胞）：能产生单一抗体；但不能无限增殖。②骨髓瘤细胞：能无限增殖，但不能产生抗体。③杂交瘤细胞：既能产生单一抗体，又能在体外培养条件下无限增殖。

（4）动物细胞融合的原理是细胞膜的流动性；细胞的增殖。动物细胞融合诱导手段有电刺激、聚乙二醇、灭活的病毒等；结果产生杂交细胞。

【详解】

（1）若细胞B是小鼠的骨髓瘤细胞；则此过程可以为单克隆抗体的制备过程。故A是已经免疫的B淋巴细胞或能产生特定抗体的B细胞。动物细胞融合的原理是细胞膜的流动性；细胞的增殖。动物细胞融合诱导手段（诱导d过程）有电刺激、聚乙二醇、灭活的病毒等，结果产生杂交细胞。

（2）一般来说；诱导A细胞和B细胞融合，形成C细胞后，必须利用选择培养基来筛选出目的细胞。那么满足的条件必须是：未融合的（亲本）细胞和融合的同种（核的）细胞都会死亡，而杂交（瘤）细胞（或杂种细胞）能够在选择培养基上生长。

（3）动物细胞培养注意事项：一是液体培养基。动物细胞培养所用的培养基的成分与体内细胞基本相同，如需要有葡萄糖、氨基酸、促生长因子、无机盐、微量元素、动物血清或血浆，还有适量的抗生素以保证无菌环境。二是气体环境：95%空气+5%CO2。

（4）选用免疫原性好的细菌；病毒、立克次体、螺旋体等；经人工培养，再用物理或化学方法将其杀灭制成疫苗，即为灭活疫苗。而新冠病毒为RNA病毒，选用RNA疫苗都可以。故选③新冠病毒灭活疫苗或RNA疫苗。

【点睛】

本题考查动物细胞培养、单克隆抗体制备的相关知识，意在考查考生理解所学知识要点，把握知识间内在联系的能力；能运用所学知识与观点，对某些现实生活中的生物学问题进行解释、推理，做出合理的判断或得出正确的结论。【解析】经过（抗原、病原体）免疫的（小鼠）B（淋巴）细胞（或浆细胞，或已免疫的B细胞，或能产生特定抗体的B细胞）聚乙二醇（PEG）、灭活的（仙台）病毒、电激（或电融合）未融合的（亲本）细胞和融合的同种（核的）细胞杂交（瘤）细胞（或杂种细胞））血清（或血浆）95%空气和5%CO2③28、略

【分析】【分析】

1；腐乳的制作过程主要是：让豆腐上长出毛霉→加盐腌制→加卤汤装瓶→密封腌制。毛霉等微生物产生的蛋白酶可以将豆腐中的蛋白质分解成小分子的肽和氨基酸；脂肪酶可以将脂肪水解成甘油和脂肪酸。

2；测定亚硝酸盐含量的原理：在盐酸酸化条件下；亚硝酸盐与对氨基苯磺酸发生重氮化反应后，与N-1-萘基乙二胺盐酸盐结合形成玫瑰红色染料。将显色反应后的样品与已知浓度的标准液进行目测对比，可以大致估算出亚硝酸盐的含量。

【详解】

（1）泡菜腌制过程中；进行发酵的主要微生物是乳酸菌，乳酸菌为原核生物。由于抗生素会抑制乳酸菌的生长和繁殖，因此不能采用加入抗生素的方法来抑制杂菌。

（2）利用毛霉腌制腐乳时；腐乳的外部有一层致密的皮，它是毛霉等生物在豆腐表面上生长的菌丝。

（3）测定亚硝酸盐含量的方法是比色法；不同发酵时期亚硝酸盐的含量不同，在泡菜腌制过程中定期测定亚硝酸盐含量的目的是把握取食泡菜的最佳时机。

（4）为了保证既无杂菌；又能使发酵菌发挥正常作用，泡菜所用盐水应煮沸；冷却再使用。

（5）沸水浴条件下；提取出的DNA可与二苯胺试剂反应呈蓝色。

【点睛】

本题考查传统发酵技术的应用和DNA鉴定的原理，意在考查考生对所学知识的识记能力。【解析】原核抗生素会抑制乳酸菌的生长和繁殖毛霉比色法把握取食泡菜的最佳时机煮沸、冷却二苯胺蓝29、略

【分析】【分析】

PCR原理：在解旋酶作用下；打开DNA双链，每条DNA单链作为母链，以4种游离脱氧核苷酸为原料，合成子链，在引物作用下，DNA聚合酶从引物3'端开始延伸DNA链，即DNA的合成方向是从子链的5'端自3'端延伸的。实际上就是在体外模拟细胞内DNA的复制过程。DNA的复制需要引物，其主要原因是DNA聚合酶只能从3′端延伸DNA链。

【详解】

（1）分析题意可知；研究人员取1g沉积物样品接种在液体培养基中摇瓶培养，稀释后可通过稀释涂布平板法接种到培养基表面以获得单菌落。

（2）PCR技术是一项通过体外控制温度扩增DNA的技术，该技术中由于温度较高，起关键作用的酶是耐高温DNA聚合酶；PCR扩增的前提是要有一段目的基因的核苷酸片段，分析题意，该技术能在放线菌总的DNA中专一性扩增出16SrRNA基因的原因是：引物是根据16SrRNA基因的一段已知核苷酸序列设计合成的；PCR产物一般可通过琼脂糖凝胶电泳来鉴定：凝胶中的DNA分子通过染色；可以在波长为300nm的紫外灯下被检测出来。

（3）分析题意，科学家将Oct3/4、Sox2、c-Mc和KIf4基因通过逆转录病毒转入小鼠成纤维细胞中，该过程中逆转录病毒是载体，能将外源基因ct3/4、Sox2、c-Mc和KIf4送入小鼠成纤维细胞；分析题意，实验目的是iPS细胞的产生不是由于培养基的作用，故实验的自变量是外源基因的有无，因变量是IPS细胞的产生情况，实验设计应遵循对照与单一变量原则，故可设计实验如下：将转入外源基因的细胞和没有转入外源基因的细胞分别培养在相同的培养基中，在相同且适宜的条件下，如果只有转入外源基因的细胞转化成了iPS细胞，则可以证明iPS细胞的产生不是由于培养基的作用。【解析】(1)稀释涂布平板法##涂布平板法

(2)耐高温DNA聚合酶引物能与16SrRNA基因特异性结合（引物是根据16SrRNA基因的一段已知核苷酸序列设计合成的）琼脂糖凝胶电泳。

(3)逆转录病毒是载体，能将外源基因ct3/4、Sox2、c-Mc和KIf4送入小鼠成纤维细胞。将转入外源基因的细胞和没有转入外源基因的细胞分别培养在相同的培养基中，在相同且适宜的条件下，如果只有转入外源基因的细胞转化成了iPS细胞，则可以证明iPS细胞的产生不是由于培养基的作用六、综合题(共4题，共24分)30、略

【分析】【分析】

1；动物细胞培养就是从动物机体中取出相关的组织；将它分散成单个细胞，然后，放在适宜的培养基中，让这些细胞生长和增殖；

2、动物细胞体外培养需要满足以下条件：无菌、无毒的环境、营养、温度和pH、气体环境（95%空气加5%CO2的混合气体）；

3；以RNA病毒的遗传物质合成DNA需要病毒的RNA为模板、逆转录酶、游离的脱氧核糖核苷酸作为原料等条件。

【详解】

（1）病毒不能独立存活，需要寄生于活细胞中，要培养病毒，需先体外培养动物细胞，动物细胞的体外培养需要无菌无毒、适应的营养、温度、pH和一定的气体条件（95%空气加5%CO2）；

（2）①新冠病毒是一种单股正链RNA病毒；利用RNA获取DNA为逆转录过程，该过程需要病毒的RNA作为模板，以游离的脱氧核糖核苷酸为原料，在逆转录酶的催化下合成，大肠杆菌作为相关基因的受体细胞，有繁殖快；易培养等优点；

②腺病毒作为常用的病毒载体；有宿主范围广泛；对人致病性低、病毒基因组相对容易操作、允许插入的外源基因容量大等特点，因此常用于重组病毒制作疫苗，制作活体病毒载体时，需要用限制酶将目的基因剪切再用DNA连接酶将目的基因和载体连接；

（3）①COVID-19是正链RNA病毒；自身的RNA可以作为合成蛋白质的模板，因此将本身作为疫苗注入人体即可表达相关蛋白质；

②若直接将RNA注入人体；会被人体内的RNA酶水解为核苷酸，因此可以将其装入脂质体中再注入人体中，RNA进入人体的体细胞而不是生殖细胞因此不能在人体内遗传下去。

【点睛】

本题涉及动物细胞培养、基因工程等相关知识点，需要学生能够结合课本内容进行迁移运用进行答题，题目难度一般。【解析】①.动物细胞培养②.无菌、无毒③.气体环境④.S⑤.病毒的RNA⑥.脱氧核苷酸⑦.逆转录酶⑧.繁殖快、易培养⑨.对人致病性低⑩.限制酶⑪.DNA连接酶⑫.本身⑬.RNA酶⑭.不能31、略

【分析】【分析】

结合题意分析图解：图中质粒包括四环素抗性基因；氨苄青霉素抗性基因、启动子、复制原点；以及两个限制酶切点，并且两个限制酶切点的位置均在四环素抗性基因上；目的基因上有三个限制酶切点，与质粒对照，共有的是BamHI、HindIII。图中①表示目的基因导入受体细胞，②表示通过胚胎移植的方式将早期胚胎移植到代孕母牛体内。

（1）

模板DNA经加热至94℃左右一定时间后；使模板DNA双链或经PCR扩增形成的双链DNA解离，使之成为单链，以便它与引物结合，为下轮反应作准备，因此在此过程中加热至94℃的目的是使DNA样品的氢键断裂。DNA聚合酶的合成方向都是子链的5′→3′，因此PCR所用引物设计应该是母链3'端互补的一段序列，人乳铁蛋白基因的部分序列一条链是：5’ATGGCTAGGAAC3’，引物为5’-GTTCCT-3’，另外一条链是：3’TACCGATCCTTG5’，引物是5’-ATGGCT-3’，因此引物选择B和D。

（2）

由图中信息可知；载体上有HindⅢ和BamHⅠ酶切位点，目的基因上也有它们的酶切位点，应用此2种酶切。当人乳铁蛋白基因和质粒连接成重组质粒后，tetR基因被人乳铁蛋白基因隔开，不是完整的，而ampR基因是完整的，所以筛选含有重组载体的大肠杆菌首先需要含氨苄青霉素的培养基上进行。

（3）

能让目的基因开始表达的是启动子；启动子是RNA聚合酶特异性识别和结合的DNA序列，是基因的一个组成部分，控制基因表达（转录）的起始时间和表达的程度，因此能使人乳铁蛋白基因在乳腺细胞中特异性表达的调控序列是启动子，A正确，BCD错误。故选A。

（4）

过程①可采用的操作方法是将目的基因导入到动物中常用显微注射法；C正确，ABD错误。故选C。

（5）

基因表达是转录和翻译；基因表达产物一般是蛋白质，因此一般检测目的基因是否表达里用抗原-抗体杂交的方法。

【点睛】

本题难度适中，属于考纲中识记、理解层次的要求，着重考查了基因工程的限制酶的作用特点、启动子的功能、目的基因导入动物细胞的方法等相关知识，要求考生具有一定的识图能力，并能识记相关基础知识。【解析】（1）D

（2）BamHΙHindⅢ氨苄青青霉素。

（3）A

（4）C

（5）抗原-抗体杂交32、略

【分析】【分析】

植物细胞工程包括植物组织培养和植物体细胞杂交；其中植物组织培养技术依据的原理是植物细胞的全能性。植物细胞工程技术的应用：植物繁殖的新途径（微型繁殖；作物脱毒、人工种子）、作物新品种的培育（单倍体育种、突变体的利用）、细胞产物的工厂化生产。

【详解】

（1）培育脱毒马铃薯时；一般选择茎尖作为外植体，而叶肉细胞带病毒（病毒载量大）；细胞的全能性低，一般不能作为外植体。

（2）植物组织培养过程；外植体经过脱分化形成的愈伤组织是一团具有分生能力（高度液泡化的）薄壁细胞。再分化形成芽和根