左氧氟沙星片含量测定分析方法验证

左氧氟沙星片含量测定分析方法验证摘要：目的建立反相高效液相色谱法，测定左氧氟沙星片的含量。方法以C18柱为固定相；以醋酸铵高氯酸钠溶液（取醋酸铵4.0g和高氯酸钠7.0g，加水1300ml使溶解，用磷酸调节pH至2.2）-乙腈（83:17）为流动相；稀释剂：0.1mol/L盐酸；检测波长为294nm。结果左氧氟沙星在0.04μg/ml~146.36μg/ml内线性关系良好，相关系数1.0000；低，中，高3种浓度的平均回收率分别为98.4%，98.2%，98.3%。结论本方法准确，简便，专属性强，可用于左氧氟沙星片含量测定的考察。关键词：左氧氟沙星；含量测定；分析；验证导言：通过下文实验采用高效液相色谱法对左氧氟沙星片的含量进行测定，可以为左氧氟沙星片质量控制提供有效的依据，并且这种测量方法的专属性强，精密度好，准确度高，能够为左氧氟沙星片质量控制提供有效的定量方法。1仪器与试剂1.1实验仪器本次实验使用的仪器是岛津LC-2030C液相色谱仪、BSA124S型赛多利斯电子天平、PB-10型赛多利斯酸度计、DK-S22型恒温数显水浴锅。1.2实验试剂、样品及对照品本次实验使用的试剂是高氯酸钠、醋酸铵、盐酸、磷酸（均为分析纯）、乙腈（色谱纯）及去离子水；样品为左氧氟沙星片（乐信乐美（海南）生物科技有限公司，批号：200301）；左氧氟沙星对照品（中国食品药品检定研究院，批号：130455-201607；含量：97.3%）2实验方法2.1实验的色谱条件本次实验使用的色谱柱为SHIMADZUC18色谱柱（规格：4.6*250mm，5µm），其柱温为40℃，其流动相为醋酸铵高氯酸钠溶液（取醋酸铵4.0g和高氯酸钠7.0g，加水1300ml使溶解，用磷酸调节pH至2.2）-乙腈（83:17）；流速为1.0ml/分钟；进样量为10μl；检测波长为294nm。稀释剂：0.1mol/L盐酸。2.2配制供试品溶液的方法供试品贮备液：精密称取本品细粉约0.14g（约相当于左氧氟沙星，按C18H20FN3O4计0.1g），置100ml量瓶中，加稀释剂适量，超声使溶解，冷却至室温，用稀释剂稀释至刻度，摇匀，滤过，即得。供试品溶液：精密量取供试品储备液1ml，至10ml量瓶中，加稀释剂稀释至刻度，摇匀，即得。2.3专属性①未破坏试验：精密量取供试品储备液1ml，至10ml量瓶中，加稀释剂稀释至刻度，摇匀，即得。②酸破坏试验：精密量取供试品储备液1ml，至10ml量瓶中，加1mol/LHCl溶液1ml，轻轻摇匀，98℃水浴破坏6小时后，加1mol/LNaOH溶液1ml中和，用稀释剂稀释至刻度，摇匀，滤过，即得。③碱破坏试验：精密量取供试品储备液1ml，至10ml量瓶中，加1mol/LNaOH溶液1ml，轻轻摇匀，98℃水浴破坏6小时后，加1mol/LHCl溶液1ml中和，用稀释剂稀释至刻度，摇匀，滤过，即得。④氧化破坏试验：精密量取供试品储备液1ml，置10ml量瓶中，加3%过氧化氢溶液1ml，轻轻摇匀，90℃水浴破坏3小时后，用稀释剂稀释至刻度，摇匀，滤过，即得。⑤高温破坏试验：精密量取供试品储备液1ml，置10ml量瓶，用稀释剂稀释至刻度，摇匀，98℃水浴破坏6小时后，取出，放冷，滤过，即得。⑥光照破坏试验：精密量取供试品储备液1ml，置10ml量瓶，用稀释剂稀释至刻度，摇匀，置光照度为4500lx±500lx、紫外照度1.5W/m2的强度下，放置1天，取出，滤过，即得。同法对空白溶液分别进行上述破坏试验。精密量取上述溶液各10μl，分别注入液相色谱仪，记录色谱图。结果显示，各破坏条件下，未破坏空白溶液及破坏后的空白溶液均对测试无干扰，各破坏溶液中杂质峰与主峰均能达到基线分离，主峰峰纯度高，物料保持平衡，表明本方法具有良好的专属性。2.4线性精密称取左氧氟沙星对照品50.14mg，精密称定，置50ml量瓶中，加稀释剂适量，超声使溶解，冷却至室温，用稀释剂稀释至刻度，摇匀，作为对照品贮备液。精密量取对照品储备液1ml，至100ml量瓶中，加稀释剂稀释至刻度，摇匀，精密量取1ml，至250ml量瓶中，加稀释剂稀释至刻度，摇匀，作为线性溶液1。精密量取对照品储备液1.0ml，置20ml量瓶中，用稀释剂稀释至刻度，摇匀，作为线性溶液2。精密量取对照品储备液1.5ml，置20ml量瓶中，用稀释剂稀释至刻度，摇匀，作为线性溶液3。精密量取对照品储备液2.0ml，置20ml量瓶中，用稀释剂稀释至刻度，摇匀，作为线性溶液4。精密量取对照品储备液2.5ml，置20ml量瓶中，用稀释剂稀释至刻度，摇匀，作为线性溶液5。精密量取对照品储备液3.0ml，置20ml量瓶中，用稀释剂稀释至刻度，摇匀，作为线性溶液6。精密量取上述线性溶液各10μl，分别注入液相色谱仪，记录色谱图，并以主成分左氧氟沙星峰面积与其浓度计算线性回归方程，求出相关系数r。结果显示，在所验证浓度范围（0.04μg/ml~146.36μg/ml）内，主峰的峰面积与其相应浓度呈现良好的线性关系，线性回归方程为y=56393x+17111，相关系数r为1.0000。2.5回收率按处方量配制空白辅料溶液，精密称取9份空白辅料各约4mg，分别置9个100ml量瓶中，1~3号瓶分别加入左氧氟沙星原料约8mg，加稀释剂适量，超声使溶解，冷却至室温，用稀释剂稀释至刻度，摇匀，用0.45μm滤膜过滤，取续滤液，作为80%回收率溶液；4~6号瓶分别加入左氧氟沙星原料约10mg，加稀释剂适量，超声使溶解，冷却至室温，用稀释剂稀释至刻度，摇匀，用0.45μm滤膜过滤，取续滤液，作为100%回收率溶液；7~9瓶分别加入左氧氟沙星原料约12mg，加稀释剂适量，超声使溶解，冷却至室温，用稀释剂稀释至刻度，摇匀，用0.45μm滤膜过滤，取续滤液，作为120%回收率溶液。另外精密称取左氧氟沙星对照品约10mg，置100ml量瓶中，加稀释剂适量，超声使溶解，冷却至室温，用稀释剂稀释至刻度，摇匀，即得。平行配制2份溶液。精密量取对照品溶液和上述回收率溶液各10μl，分别注入到液相色谱仪中，记录色谱图，计算回收率，回收率%=测得量/加入量×100%。结果显示，9份回收率溶液测得的回收率分别为98.55%，98.36%，98.22%，98.30%，97.95%，98.26%，98.31%，98.68%，98.03%，平均回收率为98.3%，RSD为0.2%，表明本方法准确度良好。3讨论3.1通过试验，确定了左氧氟沙星片的含量测定方法，测定结果可靠，方法简便，为左氧氟沙星片的质量控制提供了依据。3.2通过200~400nm进行扫描，左氧氟沙星对照品溶液溶液在294nm处有最大吸收，故选择294nm为测定波长。4结论实验室主要是使用高效液相色谱法测定左氧氟沙星片中左氧氟沙星的含量。此检测方法的专属性强，精密度好，准确度高。本文以上研究主要是探讨用反相高效液相色